專利名稱：一種枯草芽孢桿菌dj-6菌株及在葡萄病害防治上的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種微生物及用途，更具體地說涉及一種枯草芽孢桿菌mbtiiism-b菌株、用途及其制劑的制備方法，屬于生物農藥技術領域。
背景技術：
由植物病原真菌圍小叢殼菌(Mlomerella ci/ 濟侵染引發的葡萄炭疽病、囊孢殼菌iPhysalospora侵染引發的葡萄房枯病、鏈格孢菌iAlternaria viticola)引發的葡萄穗軸褐腐(枯)病、Coniothyrium dlodiella侵染引發的葡萄白腐病、單軸霉屬iPlasmopara vi ticola)侵染引發的葡萄霜霉病、灰葡萄孢菌(此cinerea )侵染引發的葡萄灰霉病和痂囊腔菌ampelina)侵染引發的葡萄黑痘病是我國葡萄上發生的主要病害。 葡萄病害當前主要通過化學防治來防控，常用以下化學藥劑防治甲基硫菌靈(thiophanate-methyl)、波爾多液(bordeaux mixture)、五氯酌·鈉(sodiumpentachlorophenol)λ 乙酸銅(cupric acetate)、啼菌酯(azoxystrobin)、醚菌酯(kresoxim-methyl)、啼霉胺(pyrimethanil)、苯醚甲環唑(difenoconazole)、烯 B虧菌酯(enestroburin)、氟嗎啉(fIumorph)、P定酉先菌胺(boscalid)、甲霜靈(metalaxyl)、霜霉威(propamocarb)、多菌靈(carbendazim)、咪鮮胺(prochloraz)、卩比唑醚菌酯(pyraclostrobin)和烯酰嗎啉(dimethomorph)等。長期以來，由于多頻次、多劑量施用化學藥劑，造成葡萄病原菌對常用化學藥劑都產生了不同程度的抗(耐)藥性，生產上屢屢出現防治失敗的事例。目前成功用于防治葡萄病害的生物農藥專用制劑還沒有。文獻已報道生物防治控制葡萄病害的生防菌屬(種)主要有(I)木霉菌屬真菌spp.)中的綠色木^ (Trichoderma viride)^(Trichoderma harzianum^)和長枝木霉艦longi brachi a turn ) ； (2)芽抱桿菌屬細菌spp.)中的枯草芽抱桿菌
錯質芽抱桿菌{Bacillus cereus)、多粘芽抱桿菌(抱^77心polymyxa )、巨大芽抱桿菌和解淀粉芽抱桿菌amyloli quefaci ens ) ； (3)
單格孢菌(Ulocladium a trum) ; (4)鏈霉菌屬細菌焊c^spp.)中的灰綠鏈霉菌(Streptomyces griseovirides) λ{Streptomyces hygroscopicus)Λ^(51 treptomyces aureochromogenes)矛口鏈霉菌(51 treptomyces kitasazwaensis) ； (5) {叚單胞菌屬細菌spp.)中的洋蔥假單胞菌(Pseudomonas、焚光假單胞
細菌(/ ^肌/7和惡臭假單胞菌(/ ^肌/6_9/ 狀putlda); (6)酵母菌中的季也蒙畢赤氏酵母CPicAia guiIIiermondii)和羅倫隱球酵母Iaurentii)
坐寸O本發明提供的可同時兼治葡萄多種病害的頡頏細菌枯草芽孢桿菌DJ-6菌株，在現有技術中沒有提及和公開。
發明內容
本發明解決現有技術存在的不足，提供一株分離自黃杜鵑花的內生芽孢桿菌枯草芽孢桿菌UaciBm subtilis)V)i-&菌株，該菌株可用于防治葡萄炭疽病、葡萄房枯病、葡萄穗軸褐腐病、葡萄灰霉病、葡萄黑痘病和葡萄白腐病。同時本發明還提供用該枯草芽孢桿菌DJ-6菌株加工成懸浮劑的制備方法。本發明是通過以下技術方案實現的
本發明的枯草芽孢桿菌(拉丁文學名為Bacillus subtil is )DJ-6菌株，已于2012年7月2日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏單位地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，保藏號為CGMCC No. 6314。本發明的菌種具有如下特征
(1)DJ-6菌株的細胞形態及生理生化特征(見表I)
權利要求
1.一種枯草芽孢桿菌SMiiJi1S)DJ-6菌株，該菌種已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號為CGMCC No. 6314。
2.根據權利要求I所述的枯草芽孢桿菌DJ-6菌株，其特征在于該菌株的16SrRNA基因序列為
3.根據權利要求I所述的枯草芽孢桿菌DJ-6菌株，其特征在于該菌株的gyrB基因序列為
4.權利要求I所述的枯草芽孢桿菌DJ-6菌株在防治葡萄炭疽病、葡萄房枯病、葡萄穗軸褐腐病、葡萄灰霉病、葡萄黑痘病和葡萄白腐病方面的應用。
5.一種用權利要求I所述的枯草芽孢桿菌DJ-6菌株發酵液制備而成的懸浮劑。
6.一種制備權利要求4所述的懸浮劑的方法，其特征在于包括以下步驟(A)菌液的獲得 用無菌芽簽挑取事先在PDA固體培養基上劃線培養好的DJ-6菌株單菌落斑，接種于裝有5 mL PDA液體培養液的容積為20 mL的三角瓶中，于30 °C >200 rpm條件下振蕩培養16h，過夜，將上步所得培養液5 mL全部接種于裝有400 mL PDA培養液的容積為1000 mL的三角瓶中，200 rpm、30°C條件下振蕩培養16 h ;把所得的400mL培養液接種于裝有20 L培養液的容積為30L的發酵罐(鎮江東方GUS-30)，20L發酵培養液中固容物含量為豆柏100g、馬鈴薯淀粉200 g、蔗糖25 g、酵母粉25 g、碳酸鈣20 g、MnS04 1.0 g，設置發酵條件為溶氧100%，攪拌速度為350 rpm，發酵溫度30 °C，發酵時間36 h，pH 7. 0-7. 2 ； (B)菌劑加工工藝 將發酵好的發酵液按如下方法加工成懸浮劑 (I)將發酵液離心(8000 rpm)后用20%丙三醇溶液(V/V)(溶液用無菌水配制)重新懸浮，測定懸浮液的活芽孢含量，根據測定結果用20%丙三醇溶液(V/V)調節懸浮液的活芽孢數，終含量調節成芽孢含量為LOXIOki cfu/mL (即每毫升含100億個活芽孢);(2)在上述調節好的懸浮液中按5 g/L (W/V)的用量加入黃原膠，并攪拌均勻，得成品懸浮劑的濃度為100億活芽孢/mL。
7.根據權利要求5所述的制備懸浮劑的方法，其特征在于步驟(B)中所述的懸浮劑中的添加劑為丙三醇和和黃原膠。
全文摘要
本發明為一種枯草芽孢桿菌DJ-6菌株(其在CGMCC的保藏編號為CGMCC No.6314)及發酵液制備成懸浮劑的方法。該制劑能有效防治葡萄炭疽病、葡萄房枯病、葡萄穗軸褐腐病、葡萄灰霉病、葡萄黑痘病和葡萄白腐病。
文檔編號A01P3/00GK102876605SQ201210354630
公開日2013年1月16日 申請日期2012年9月23日 優先權日2012年9月23日
發明者楊敬輝, 吉沐祥, 姚克兵, 莊義慶 申請人:江蘇丘陵地區鎮江農業科學研究所