專(zhuān)利名稱(chēng)：一種山藥珠芽的組培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于ー種植物的組培技術(shù)，特別地涉及山藥珠芽的組培技木。
背景技術(shù)：
山藥(Dioscorea opposita Thunb.),別名薯菌、懷山藥,為薯菌科多年生纏繞草本植物。其根莖經(jīng)去外皮干燥后可入藥，具補(bǔ)脾胃，補(bǔ)肺益陰，固腎澀精等作用，主治體倦，虛勞咳嗽，肺虛咳喘，腎虛遺精等癥，除藥用外還可食用。山藥的傳統(tǒng)繁殖方法主要有兩種，ー種是蘆頭繁殖法，一種是珠芽繁殖法。蘆頭繁殖法主要是指選取蘆頭(脖頸短)、粗壯、無(wú)病蟲(chóng)害、芽頭飽滿(mǎn)的山藥，將上部7-10厘米長(zhǎng)折下，置于室內(nèi)通風(fēng)處晾5-7天，貯藏于室內(nèi)或窖內(nèi)越冬。翌年4月取出用于種植。珠芽繁殖法是指選取無(wú)病蟲(chóng)害、無(wú)損傷、個(gè)頭較大的珠芽。用濕沙埋在室內(nèi)或窖內(nèi)過(guò)冬，防止受凍或
相對(duì)于蘆頭繁殖來(lái)說(shuō)，珠芽繁殖的成活率更高，而且長(zhǎng)期使用蘆頭繁殖存在嚴(yán)重的退化現(xiàn)象，另外珠芽的體積小，便于保存和運(yùn)輸，因此從上述角度來(lái)說(shuō)珠芽繁殖要優(yōu)于蘆頭繁殖，但是珠芽繁殖也有其自身的缺陷，那就是珠芽比蘆頭更加?jì)赡?，需要更?yán)格的貯存條件。
發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了ー種山藥珠芽的組培方法，通過(guò)這種方法能讓珠芽在短時(shí)間內(nèi)快速大量地増殖，從而大大降低需要貯存的珠芽數(shù)量，同時(shí)也大大提高了珠芽繁殖的范圍。本發(fā)明所述的山藥珠芽的組培方法如下I、外植物體取材和消毒。將從山藥上取下的珠芽切成長(zhǎng)寬分別為O. 5-1厘米的方塊狀，用自來(lái)水沖洗干凈后用洗衣粉溶液浸泡15分鐘，再用自來(lái)水沖洗干凈。將珠芽塊置于超凈工作臺(tái)上，先用75%酒精消毒30秒，然后用O. 1%的升汞溶液浸泡5分鐘，隨后用無(wú)菌水沖洗3-4次，置于無(wú)菌的干凈培養(yǎng)皿中備用。2、培養(yǎng)基的配置和接種。配置兩種培養(yǎng)基，一種為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，一種為增殖培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為在MS培養(yǎng)基中加入6-芐氨基腺嘌呤3. Omg/L,蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH6.0。増殖培養(yǎng)基的配方為在MS培養(yǎng)基中加入6-芐氨基腺嘌呤5. Omg/L，萘こ酸O. 3ml/L，蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH6. O。在超凈臺(tái)中將珠芽芽體朝上接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。培養(yǎng)溫度為25±1°C，光照強(qiáng)度12001x，光照時(shí)間10h/d。3、叢生珠芽的増殖。在山藥珠芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上已經(jīng)長(zhǎng)出叢生珠芽之后，將叢生珠芽從主體上切下，將其轉(zhuǎn)移到增值培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代擴(kuò)繁。4、馴化移栽。將生長(zhǎng)出的珠芽移植至通風(fēng)、明亮的煉苗室中，揭開(kāi)培養(yǎng)皿蓋子，將珠芽取出，洗凈粘在其上的培養(yǎng)基，用0. 1%的高錳酸鉀溶液浸泡10-15分鐘，再轉(zhuǎn)移到已消毒的苔蘚基質(zhì)上。移栽后適當(dāng)澆水，保持光照在1500-20001X之間，溫度為25-30°C，光照時(shí)間12h/d，空氣濕度大于90%。其中步驟2中提到的MS培養(yǎng)基的配方是本領(lǐng)域技術(shù)人員所共知的，其配方為工作液濃度單位mg/L大量元素NH4N031 650 ；ΚΝ03 1900 ；CaCl2 · 2H20 440 ；MgS04 · 7H20 370 ；KH2P04170 ；微量元素KI0· 83 ；Η3Β03 6. 2 ； MnSO4 · 4Η20 22. 3 ；ZnS04 · 7Η20 8. 6 ；Na2MnO4 · 2Η200. 25 ；CuSO4 · 5Η20 O. 025 ；CoCl2 · 6Η20 O. 025 ；鐵鹽=FeSO4· 7Η20 27. 8 ；Na2-EDTA · 2Η20 37. 3
有機(jī)物質(zhì)肌醇100 ;煙酸O. 5 ;鹽酸吡哆醇(維生素B6) O. 5 ;鹽酸硫胺素(維生素BI) O. I ;甘氨酸 2. O。其中山藥珠芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上長(zhǎng)出叢生珠芽大約需要13-15天，在増殖培養(yǎng)基上，大約10天左右又可生產(chǎn)新的叢生珠芽，馴化移栽的時(shí)間以5-7天為宜。本發(fā)明提供的組培方法中的培養(yǎng)基是經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)得出的較好配方，與一般的培養(yǎng)基相比，本發(fā)明提供的誘導(dǎo)培養(yǎng)基能使產(chǎn)生的叢生珠芽更多，產(chǎn)生的速度更快，而增殖培養(yǎng)基則能最快速地使叢生珠芽成熟。通過(guò)本發(fā)明提供的組培方法，可以使山藥的珠芽在不到ー個(gè)月的時(shí)間內(nèi)大量增殖，而且增殖獲得的珠芽的質(zhì)量都很高，基本上能夠保證無(wú)病蟲(chóng)害，而且生命力旺盛。這樣一方面大大減輕了山藥種植中對(duì)珠芽的挑選和采收，另一方面也大大降低了珠芽貯存的成本。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例II、外植物體取材和消毒。選取健康且成熟的山藥珠芽，將從山藥上取下的珠芽切成長(zhǎng)寬分別為O. 5厘米左右的方塊狀，用自來(lái)水沖洗干凈后用洗衣粉溶液浸泡15分鐘，再用自來(lái)水沖洗干凈。將珠芽塊置于超凈工作臺(tái)上，先用75%酒精消毒30秒，然后用O. 1%的升汞溶液浸泡5分鐘，隨后用無(wú)菌水沖洗3-4次，置于無(wú)菌的干凈培養(yǎng)皿中備用。2、培養(yǎng)基的配置和接種。配置兩種培養(yǎng)基，一種為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，一種為增殖培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為在MS培養(yǎng)基中加入6-芐氨基腺嘌呤3. Omg/L,蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH6.0。増殖培養(yǎng)基的配方為在MS培養(yǎng)基中加入6-芐氨基腺嘌呤5. Omg/L，萘こ酸O. 3ml/L，蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH6. O。在超凈臺(tái)中將珠芽芽體朝上接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。培養(yǎng)溫度為25±1°C，光照強(qiáng)度12001x，光照時(shí)間10h/d。3、叢生珠芽的増殖。經(jīng)過(guò)13天的時(shí)間，誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的山藥珠芽平均已經(jīng)長(zhǎng)出4-7個(gè)叢生珠芽。在山藥珠芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上已經(jīng)長(zhǎng)出叢生珠芽之后，將叢生珠芽從主體上切下，將其轉(zhuǎn)移到增值培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代擴(kuò)繁。經(jīng)過(guò)10天的時(shí)間，繼代珠芽基本生成完全。4、馴化移栽。將生長(zhǎng)出的珠芽移植至通風(fēng)、明亮的煉苗室中，揭開(kāi)培養(yǎng)皿蓋子，將珠芽取出，洗浄粘在其上的培養(yǎng)基，用O. 1%的高錳酸鉀溶液浸泡12分鐘，再轉(zhuǎn)移到已消毒的苔蘚基質(zhì)上。移栽后適當(dāng)澆水，保持光照為18001x，溫度為27°C，光照時(shí)間12h/d，空氣濕度大于90%。在馴化移栽7天后，這些珠芽即可用于實(shí)地土壤種植。這些珠芽在實(shí)地土壤種植時(shí)的存活率達(dá)到99. 4%，長(zhǎng)成率達(dá)到93%。實(shí)施例2
I、外植物體取材和消毒。選取健康且成熟的山藥珠芽，將從山藥上取下的珠芽切成長(zhǎng)寬分別為O. 7厘米左右的方塊狀，用自來(lái)水沖洗干凈后用洗衣粉溶液浸泡15分鐘，再用自來(lái)水沖洗干凈。將珠芽塊置于超凈工作臺(tái)上，先用75%酒精消毒30秒，然后用O. 1%的升汞溶液浸泡5分鐘，隨后用無(wú)菌水沖洗4次，置于無(wú)菌的干凈培養(yǎng)皿中備用。2、培養(yǎng)基的配置和接種。配置兩種培養(yǎng)基，一種為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，一種為增殖培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為在MS培養(yǎng)基中加入6-芐氨基腺嘌呤3. Omg/L,蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH6.0。増殖培養(yǎng)基的配方為在MS培養(yǎng)基中加入6-芐氨基腺嘌呤5. Omg/L，萘こ酸O. 3ml/L，蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH6. O。在超凈臺(tái)中將珠芽芽體朝上接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。培養(yǎng)溫度為25±1°C，光照強(qiáng)度12001x，光照時(shí)間10h/d。3、叢生珠芽的増殖。經(jīng)過(guò)14天的時(shí)間，誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的山藥珠芽平均已經(jīng)長(zhǎng)出4-6個(gè)叢生珠芽。在山藥珠芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上已經(jīng)長(zhǎng)出叢生珠芽之后，將叢生珠芽從主體上切下，將其轉(zhuǎn)移到增值培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代擴(kuò)繁。經(jīng)過(guò)11天的時(shí)間，繼代珠芽基本生成完全。4、馴化移栽。將生長(zhǎng)出的珠芽移植至通風(fēng)、明亮的煉苗室中，揭開(kāi)培養(yǎng)皿蓋子，將 珠芽取出，洗浄粘在其上的培養(yǎng)基，用O. 1%的高錳酸鉀溶液浸泡12分鐘，再轉(zhuǎn)移到已消毒的苔蘚基質(zhì)上。移栽后適當(dāng)澆水，保持光照為18001x，溫度為27°C，光照時(shí)間12h/d，空氣濕度大于90%。在馴化移栽6天后，這些珠芽即可用于實(shí)地土壤種植。這些珠芽在實(shí)地土壤種植時(shí)的存活率達(dá)到99. 2%，長(zhǎng)成率達(dá)到92%。實(shí)施例3I、外植物體取材和消毒。選取健康且成熟的山藥珠芽，將從山藥上取下的珠芽切成長(zhǎng)寬分別為I厘米左右的方塊狀，用自來(lái)水沖洗干凈后用洗衣粉溶液浸泡15分鐘，再用自來(lái)水沖洗干凈。將珠芽塊置于超凈工作臺(tái)上，先用75%酒精消毒30秒，然后用O. 1%的升汞溶液浸泡5分鐘，隨后用無(wú)菌水沖洗4次，置于無(wú)菌的干凈培養(yǎng)皿中備用。2、培養(yǎng)基的配置和接種。配置兩種培養(yǎng)基，一種為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，一種為增殖培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為在MS培養(yǎng)基中加入6-芐氨基腺嘌呤3. Omg/L,蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH6.0。増殖培養(yǎng)基的配方為在MS培養(yǎng)基中加入6-芐氨基腺嘌呤5. Omg/L，萘こ酸0. 3ml/L，蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH6. O。在超凈臺(tái)中將珠芽芽體朝上接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。培養(yǎng)溫度為25±1°C，光照強(qiáng)度12001x，光照時(shí)間10h/d。3、叢生珠芽的増殖。經(jīng)過(guò)15天的時(shí)間，誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的山藥珠芽平均已經(jīng)長(zhǎng)出3-6個(gè)叢生珠芽。在山藥珠芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上已經(jīng)長(zhǎng)出叢生珠芽之后，將叢生珠芽從主體上切下，將其轉(zhuǎn)移到增值培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代擴(kuò)繁。經(jīng)過(guò)11天的時(shí)間，繼代珠芽基本生成完全。4、馴化移栽。將生長(zhǎng)出的珠芽移植至通風(fēng)、明亮的煉苗室中，揭開(kāi)培養(yǎng)皿蓋子，將珠芽取出，洗浄粘在其上的培養(yǎng)基，用0. 1%的高錳酸鉀溶液浸泡12分鐘，再轉(zhuǎn)移到已消毒的苔蘚基質(zhì)上。移栽后適當(dāng)澆水，保持光照為18001x，溫度為27°C，光照時(shí)間12h/d，空氣濕度大于90%。在馴化移栽7天后，這些珠芽即可用于實(shí)地土壤種植。這些珠芽在實(shí)地土壤種植時(shí)的存活率達(dá)到99. 0%，長(zhǎng)成率達(dá)到91%。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明公開(kāi)的內(nèi)容和所掌握的本領(lǐng)域技術(shù)對(duì)本發(fā)明內(nèi)容作出替換或變型，但是這些替換或變型都不應(yīng)視為脫離本發(fā)明構(gòu)思的，這些替換或變型均在本發(fā)明要求保護(hù)的權(quán)利范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.ー種山藥珠芽的組培方法，其特征在于該方法包括以下步驟 1)外植物體取材和消毒，將從山藥上取下的珠芽切成長(zhǎng)寬分別為O.5-1厘米的方塊狀，用自來(lái)水沖洗干凈后用洗衣粉溶液浸泡15分鐘，再用自來(lái)水沖洗干凈。將珠芽塊置于超凈工作臺(tái)上，先用75%酒精消毒30秒，然后用O. 1%的升汞溶液浸泡5分鐘，隨后用無(wú)菌水沖洗3-4次，置于無(wú)菌的干凈培養(yǎng)皿中備用， 2)培養(yǎng)基的配置和接種，配置兩種培養(yǎng)基，一種為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，一種為增殖培養(yǎng)基，在超凈臺(tái)中將珠芽芽體朝上接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。培養(yǎng)溫度為25±1°C，光照強(qiáng)度12001x，光照時(shí)間I Oh/d， 3)叢生珠芽的増殖，在山藥珠芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上已經(jīng)長(zhǎng)出叢生珠芽之后，將叢生珠芽從主體上切下，將其轉(zhuǎn)移到增值培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代擴(kuò)繁， 4)馴化移栽，將生長(zhǎng)出的珠芽移植至通風(fēng)、明亮的煉苗室中，揭開(kāi)培養(yǎng)皿蓋子，將珠芽取出，洗浄粘在其上的培養(yǎng)基，用O. 1%的高錳酸鉀溶液浸泡10-15分鐘，再轉(zhuǎn)移到已消毒的苔蘚基質(zhì)上。移栽后適當(dāng)澆水，保持光照在1500-20001x之間，溫度為25-30°C，光照時(shí)間12h/d，空氣濕度大于90%。
2.權(quán)利要求I中所述的山藥珠芽的組培方法，其特征在于步驟2)中所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為在MS培養(yǎng)基中加入6-芐氨基腺嘌呤3. Omg/L,蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，pH6. O。
3.權(quán)利要求I中所述的山藥珠芽的組培方法，其特征在于步驟2)中所述的增殖培養(yǎng)基的配方為在MS培養(yǎng)基中加入6-芐氨基腺嘌呤5. Omg/L，萘こ酸O. 3ml/L,蔗糖30g/L，瓊脂 8g/L，pH6.0。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種山藥珠芽的組培方法。包括外植物體取材和消毒，培養(yǎng)基的配置和接種，叢生珠芽的增殖以及馴化移栽。通過(guò)這種方法能讓珠芽在短時(shí)間內(nèi)快速大量地增殖，從而大大降低了需要貯存的珠芽數(shù)量，同時(shí)也大大提高了珠芽繁殖的使用范圍。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102823501SQ201210351638
公開(kāi)日2012年12月19日 申請(qǐng)日期2012年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月20日
發(fā)明者彭江晨 申請(qǐng)人:溧陽(yáng)市天目湖保健品有限公司