專利名稱：一種核苷多肽組合物、其制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種核苷多肽組合物、其制備方法及用途。
背景技術(shù)：
肽的分子量一般在180-5000之間，一般將分子量在180-1000的小分子活性多肽統(tǒng)稱為“生物活性肽”，生物活性肽具有很多生理功能，包括免疫調(diào)節(jié)作用、抗菌作用、抗腫瘤作用等。人們研究發(fā)現(xiàn)，人類攝入的蛋白質(zhì)經(jīng)消化酶作用后，并不是僅以氨基酸的形式吸收，更多的是以小肽的形式吸收，以游離氨基酸形式吸收的比例很小，且肽比游離氨基酸消化更快、吸收率更高。
近年，相當(dāng)多學(xué)者報道了飲食核酸類物質(zhì)對機(jī)體免疫功能具有調(diào)節(jié)及增強(qiáng)作用。Sanderson等對核酸在腸道上皮細(xì)胞的吸收及代謝研究表明，進(jìn)食核酸后在腸道內(nèi)消化降解為核苷酸、核苷，并主要以核苷的形式進(jìn)行吸收，核苷通過異化擴(kuò)散和Na+依賴性載體介導(dǎo)的方式吸收至腸道上皮細(xì)胞。王鏡巖等編著的《生物化學(xué)》第三版下冊P387《核酸的降解和核苷酸代謝》章節(jié)中指明核酸的基本結(jié)構(gòu)是核苷酸，核酸降解生產(chǎn)核苷酸，核苷酸還能進(jìn)一步分解成核苷和磷酸，這是核酸的分解代謝，反之，核苷和磷酸組成核苷酸，核苷酸進(jìn)一步聚合成核酸。核苷是人體的正常組成物質(zhì)，是人體的天然組分。核酸營養(yǎng)的本質(zhì)就是核苷酸和核苷營養(yǎng)，核苷酸營養(yǎng)的本質(zhì)就是核苷營養(yǎng)。如《外源核苷酸的利用途徑和生理作用》丁詩華等提出核酸降解成核苷酸后經(jīng)腸道水解酶轉(zhuǎn)變成核苷、堿基后被腸細(xì)胞吸收，其中核苷是主要的吸收形式。因此核酸的降解物核苷更利于吸收和利用。
研究發(fā)現(xiàn)，多肽具有促進(jìn)腸道內(nèi)核酸分解產(chǎn)物核苷的吸收作用，并對核苷的轉(zhuǎn)運(yùn)及在某些臟器的分布、利用產(chǎn)生影響。魚類的精巢又叫魚白，是魚制造和貯存精子的器官，約占魚活體重的7%左右。魚精可制備活性多肽，其制備的多肽有多種用途，如中國專利申請?zhí)?00710059272. 9，魚精多肽中的抗氧化二肽的具有抗氧化、抗疲勞、性功能等方面的作用。魚精中富含脫氧核糖核酸(DNA)，利用麥芽根中含有的磷酸二酯酶和磷酸單酯酶可將脫氧核糖核酸降解成利于人體直接吸收的脫氧核糖核苷。如脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷和胸苷。海參屬棘皮動物門、海參綱、盾手目動物，海參體壁中含蛋白質(zhì)高達(dá)90% (折干計(jì))，還有氨基酸、多糖以及多種微量元素，被人們視為滋補(bǔ)佳品，具有極高的營養(yǎng)價值。近年來，人們發(fā)現(xiàn)海參含有許多重要的生物學(xué)活性物質(zhì)，如多肽、海參多糖、海參皂甙等。其中海參肽還具有提高免疫力、抗腫瘤、抗疲勞、延緩衰老、降血壓等功效。啤酒酵母的營養(yǎng)成分十分豐富，利用價值很高，其中蛋白質(zhì)含量很高，達(dá)到45%-60%。近年來啤酒酵母來源的生物活性肽的保健作用日益被揭開。如提高免疫多肽、抗氧化多肽、還有護(hù)肝的谷胱甘肽等。啤酒酵母中還含有5%-10%左右的核糖核酸(RNA)，將核糖核酸利用麥芽根中含有的磷酸二酯酶和磷酸單酯酶可將核糖核酸降解成利于人體直接吸收的核糖核苷，如腺苷、鳥苷、胞苷和尿苷等。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種核苷多肽組合物、其制備方法及用途。本發(fā)明提供一種制備核苷多肽組合物的方法，包括如下步驟A.將酵母泥用碳酸氫鈉浸泡洗滌，用分離機(jī)洗滌分離，收集重相備用；B.鮮海參切片，膠體磨膠體化，備用；C.將魚精搗碎，加入水，打成勻漿，膠體磨膠體化，備用；D.將麥芽根，粉碎，加入8-10倍重量份數(shù)的水，浸泡過濾，濾液備用； E.將步驟A處理后的酵母和步驟B處理后的海參和步驟C處理后的魚精按照重量比為I : I : I混合,用水配成固含量漿料,均質(zhì)；F加入蛋白酶，酶解，再加入胰酶，水解得待酶解液；G.加入步驟D中的麥芽根酶液，攪拌，然后酶解反應(yīng)后，分離；H.輕相液升至高溫后，滅酶，干燥得核苷多肽組合物。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，本發(fā)明提供的方法進(jìn)一步包括如下步驟A.將酵母泥用碳酸氫鈉浸泡洗滌15-20分鐘，過篩，利用酵母粉分離機(jī)洗滌二次，分離，收集重相備用；B.鮮海參速凍后切片，膠體磨膠體化，備用；C.將魚精搗碎，加入等體積的水，打成勻漿，膠體磨膠體化，備用；D.將麥芽根，粉碎至120-200目，加入8_10倍重量份數(shù)的水，調(diào)整PH為6. 0-6. 5，浸泡3-5小時，過濾，濾液備用；E.將步驟A處理后的酵母、步驟B處理后的海參和步驟C處理后的魚精按照重量比為I : I : I混合，用水配成8%-15%的固含量漿料，均質(zhì)二次；F.加入步驟E所得漿料的體積的O. 012%的蛋白酶，酶解10小時，再加入酶量為7000U/g胰酶，水解2小時得待酶解液；G.加入步驟D中的麥芽根酶液，加入量為待酶解液體積的1/10，攪拌，在55°C恒溫反應(yīng)4. 5小時后，用分離機(jī)分離；H.輕相液升溫至95°C，恒溫20分鐘滅酶，干燥得核苷多肽組合物。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟A中酵母泥選用啤酒廠5代以內(nèi)的酵母泥，10°C保溫備用。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，步驟A中過120目振蕩篩。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟A中碳酸氫鈉浸泡洗滌的時間為15分鐘。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，步驟A中采用3%0 _5%。含量碳酸氫鈉，進(jìn)一步的為5%。含量碳酸氫鈉。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟A中酵母粉分離機(jī)洗滌的頻率為1600_1800rpm。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟B中鮮海參在_70°C速凍，采用剪切機(jī)切片。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，步驟C中魚精包括體型較大的海產(chǎn)和淡水魚類，進(jìn)一步的包括鮭魚、鯡魚、鱒魚。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟C中采用均漿機(jī)打成均漿。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟D中麥芽根選用啤酒麥芽廠現(xiàn)產(chǎn)新鮮的金黃色(酶活較高)的麥芽根。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，步驟D中升溫至40°C浸泡。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟D中粉碎至200目。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟D中調(diào)整PH為6. O。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟E中利用均質(zhì)機(jī)50MP均質(zhì)二次。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟E中用水配成10%的固含量漿料。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，步驟F中加入蛋白酶后酶解的條件是55°C，pH為6. 0-7. 0， 進(jìn)一步的為6. 5。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，步驟F中加入胰酶后酶解的條件是50°C下，pH為8. 5。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，步驟G中加入麥芽根酶液調(diào)節(jié)pH為6. 5。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟G中麥芽根酶液優(yōu)選預(yù)先預(yù)熱到55°C。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟G中攪拌的方法采用先迅速攪拌，然后每隔半小時攪拌一次，每次攪拌時間為2分鐘。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟G中分離的方法采用酵母粉分離機(jī)1600_1800rpm下分離。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟H中輕相液經(jīng)板式換熱器升溫至95°C。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，步驟H中干燥的方法采用三效降膜濃縮蒸發(fā)器濃縮后經(jīng)噴霧干燥器干燥。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，步驟D中濾渣和步驟G中重相可用于制備飼料。本發(fā)明另一方面提供一種采用上述方法制備的核苷多肽組合物。本發(fā)明另一方面還提供上述核苷多肽組合物在制備增強(qiáng)免疫力及抗疲勞保健食品中的用途。本發(fā)明另一方面還提供上述核苷多肽組合物在制備增強(qiáng)免疫力及抗疲勞的藥物制劑中的用途。本發(fā)明將魚精、啤酒酵母、海參經(jīng)前處理后直接利用蛋白酶酶解制備活性多肽，依據(jù)DNA和RNA磷酸二酯鍵及磷酸單酯鍵的特性進(jìn)一步加入富含磷酸二酯酶和磷酸單酯酶的麥芽根提取物，將DNA和RNA在一個反應(yīng)體系中同時酶解，制備小分子的核糖核苷和脫氧核糖核苷，這樣，在一個體系中制備出核苷多肽組合物。整個組合物的制備過程簡便，工藝時間大幅縮短(常規(guī)的一般是將RNA和DNA單獨(dú)酶解)，降低了工業(yè)化生產(chǎn)成本。制備的產(chǎn)物中核苷品類齊全，既含有組成人體RNA的核糖核苷，也含有組成人體DNA的脫氧核苷，同時富含多種活性多肽。魚精、啤酒酵母和海參來源的活性多肽的存在也提升了復(fù)合核苷在人體的吸收和分布，核苷和多肽相互協(xié)同，提升了核苷多肽組合物的保健效果。本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例I :
鮮啤酒酵母選用啤酒廠5代以內(nèi)的酵母泥，10°C保溫槽車運(yùn)抵車間，用5%。含量碳酸氫鈉浸泡攪拌洗滌15分鐘后過120目振蕩篩，利用D424酵母粉分離機(jī)1600-1SOOrpm下洗滌分離 二次，收集重相備用。鮮海參_70°C速凍后剪切機(jī)切片，膠體磨膠體化，備用。將經(jīng)過篩選除雜后的鮭魚魚精洗凈浙干，搗碎機(jī)搗碎，加入等體積蒸餾水，放于勻漿機(jī)中打成勻漿，膠體磨膠體化，備用。選擇啤酒麥芽廠現(xiàn)產(chǎn)新鮮的金黃色(酶活較高)的麥芽根，常溫下將其粉碎至200目左右，加入8-10倍重量的自來水，用6摩爾/升的鹽酸調(diào)整pH為6. 0，然后在40°C浸泡3-5h,不銹鋼濾網(wǎng)過濾,濾液備用。將經(jīng)洗滌脫苦后的鮮酵母和經(jīng)膠體磨處理后的海參和鮭魚魚精(1:1: 1，折干重量比)，用自來水配成10%的固含量漿料，利用均質(zhì)機(jī)50MP均質(zhì)二次。加入0.012% (V/V)37071蛋白酶(諾維信公司)，55°C，ρΗ6· 5酶解10h，然后加入用來源于豬胰臟的胰酶(加酶量7000U/g)，用6摩爾/升的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH8. 5，50°C下，水解2h得待酶解液。加入預(yù)熱到55°C的麥芽根酶液，加入量為待酶解液體積的1/10 (V/V)，用6摩爾/升的鹽酸調(diào)整PH為6. 5，迅速攪拌，然后每隔半小時攪拌一次，每次攪拌時間為2分鐘。在55°C恒溫攪拌反應(yīng)4. 5小時，利用D424酵母粉分離機(jī)1600-1800rpm下分離。輕相液經(jīng)板式換熱器升溫到95°C，保溫20分鐘滅酶(重相液經(jīng)滾筒干燥為飼料)，然后進(jìn)入三效降膜濃縮蒸發(fā)器(溫州泰康蒸發(fā)器有限公司RNJM3-6000型)濃縮后經(jīng)噴霧干燥器干燥即得核苷多肽組合物。該復(fù)合核苷多肽原料水解度(DH)約為(57. 38±6. 24) 總氮含量(凱式定氮法)大于13%，含水量小于10%，其中蛋白水解產(chǎn)物分子量在100-1000D之間約為48. 3%(HPLC法測定)?？芍苯右员驹匣蛘咻o助其他具有相關(guān)功能的原料制備增強(qiáng)免疫力及抗疲勞的制劑，如膠囊或者片劑等。實(shí)施例2 鮮啤酒酵母選用啤酒廠5代以內(nèi)的酵母泥，10°C保溫槽車運(yùn)抵車間，用5%。含量碳酸氫鈉浸泡攪拌洗滌15分鐘后過120目振蕩篩，利用D424酵母粉分離機(jī)1600-1SOOrpm下洗滌分離二次，收集重相備用。鮮海參_70°C速凍后剪切機(jī)切片，膠體磨膠體化，備用。將經(jīng)過篩選除雜后的鯡魚魚精洗凈浙干，搗碎機(jī)搗碎，加入等體積蒸餾水，放于勻漿機(jī)中打成勻漿，膠體磨膠體化，備用。選擇啤酒麥芽廠現(xiàn)產(chǎn)新鮮的金黃色(酶活較高)的麥芽根，常溫下將其粉碎至200目，加入8-10倍重量的自來水，用6摩爾/升的鹽酸調(diào)節(jié)pH為6. 0，然后在40°C浸泡3_5小時，不銹鋼濾網(wǎng)過濾，濾液備用。將經(jīng)洗滌脫苦后的鮮酵母和經(jīng)膠體磨處理后的海參和鯡魚魚精(1:1: 1，折干重量比)，用自來水配成10%固含量漿料，利用均質(zhì)機(jī)50MP均質(zhì)二次。加人0.012% (V/V)37071蛋白酶(諾維信公司)，55°C，PH6. 5左右酶解12h，然后加入用來源于豬胰臟的胰酶(加酶量7000U/g)，用6摩爾/升的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH8. 5，50°C下,水解2h得待酶解液。
加入預(yù)熱到55°C的麥芽根酶液，加入量為待酶解液體積的1/10 (V/V)，用6摩爾/升的鹽酸調(diào)整PH為6. 5，迅速攪拌，然后每隔半小時攪拌一次，每次攪拌時間為2分鐘。在55°C恒溫攪拌反應(yīng)4. 5小時后，利用D424酵母粉分離機(jī)1600-1800rpm下分離。輕相液經(jīng)板式換熱器升溫到95°C，保溫20分鐘滅酶(重相液經(jīng)滾筒干燥為飼料)，然后進(jìn)入三效降膜濃縮蒸發(fā)器(溫州泰康蒸發(fā)器有限公司RNJM3-6000型)濃縮后經(jīng)噴霧干燥器干燥即得核苷多肽組合物。 該復(fù)合核苷多肽原料水解度(DH)約為(57. 38±6. 24) 總氮含量(凱式定氮法)大于13%，含水量小于10%，其中蛋白水解產(chǎn)物分子量在100-1000D之間約為48. 3%(HPLC法測定)。可直接以本原料或者輔助其他具有相關(guān)功能的原料制備增強(qiáng)免疫力及抗疲勞的制劑，如膠囊或者片劑等。實(shí)施例3 本發(fā)明對上述制備所得的復(fù)合核苷多肽進(jìn)行了增強(qiáng)免疫力功效測試。選擇清潔級(II級)昆明種健康雄性小白鼠200只，體重18_20g。試驗(yàn)設(shè)三個劑量組即0. 2g/kg體重組,0. 4g/kg體重組,0. 6g/kg體重組,低中高三個劑量組分別相當(dāng)于發(fā)明人人體日推薦量的10倍、20倍、30倍，陰性對照組動物給予蒸餾水，每天灌胃一次，灌胃體積為體重的2%，共30天。然后進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的觀測。末次灌胃Ih后參照《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范》中的方法對小鼠進(jìn)行臟器/體重比值測定、遲發(fā)型DTH試驗(yàn)、血清溶血值的測定、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)、小鼠NK細(xì)胞活性測定等免疫功能的測定。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用SAS軟件進(jìn)行分析。復(fù)合核苷多肽對小鼠體重的影響結(jié)果見表I-表5表I臟器/體重試驗(yàn)前后動物體重記錄(X 土 S)
權(quán)利要求
1.一種制備核苷多肽組合物的方法，其特征在于，包括如下步驟 A.將酵母泥用碳酸氫鈉浸泡洗滌，用分離機(jī)洗滌分離，收集重相備用； B.鮮海參切片,膠體磨膠體化,備用； C.將魚精搗碎,加入水,打成勻漿,膠體磨膠體化,備用； D.將麥芽根，粉碎，加入8-10倍重量份數(shù)的水，浸泡過濾，濾液備用； E.將步驟A處理后的酵母和步驟B處理后的海參和步驟C處理后的魚精按照重量比為1:1: I混合,用水配成固含量漿料,均質(zhì)； F.加入蛋白酶,酶解,再加入胰酶,水解得待酶解液； G.加入步驟D中的麥芽根酶液，攪拌，然后酶解反應(yīng)后，分離； H.輕相液升至高溫后，滅酶，干燥得核苷多肽組合物。
2.一種如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟如下 A.將酵母泥用碳酸氫鈉浸泡洗滌15-20分鐘，過篩，利用酵母粉分離機(jī)洗滌二次，分離，收集重相備用； B.鮮海參速凍后切片，膠體磨膠體化，備用； C.將魚精搗碎，加入等體積的水，打成勻漿，膠體磨膠體化，備用； D.將麥芽根，粉碎至120-200目，加入8-10倍重量份數(shù)的水，調(diào)整pH為6.0-6. 5，浸泡3-5小時，過濾，濾液備用； E.將步驟A處理后的酵母、步驟B處理后的海參和步驟C處理后的魚精按照重量比為1:1: I混合，用水配成8%-15%的固含量漿料，均質(zhì)二次； F.加入步驟E所得漿料的體積的O.012 %的蛋白酶，酶解10小時，再加入酶量為7000U/g胰酶，水解2小時得待酶解液； G.加入步驟D中的麥芽根酶液，加入量為待酶解液體積的1/10，攪拌，在55°C恒溫反應(yīng)4. 5小時后，用分離機(jī)分離； H.輕相液升溫至95°C，恒溫20分鐘滅酶，干燥得核苷多肽組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟A中過120目振蕩篩。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于，步驟A中采用3%。_5%。含量碳酸氫鈉。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于，步驟C中魚精包括鮭魚、鯡魚、鱒魚。
6.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于，步驟D中升溫至40°C浸泡。
7.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于，步驟F中加入蛋白酶后酶解的條件是55°C, pH 為 6. 0-7. O。
8.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于，步驟F中加入胰酶后酶解的條件是50°〇下邛!1為8.5。
9.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于，步驟G中加入麥芽根酶液調(diào)節(jié)pH為6. 5o
10.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于，步驟D中濾渣和步驟G中重相可用于制備飼料。
11.一種核苷多肽組合物，其特征在于采用如權(quán)利要求I或2所述的方法制備。
12.權(quán)利要求11的核苷多肽組合物在制備增強(qiáng)免疫力及抗疲勞保健食品中的用途。
13.權(quán)利要求11的核苷多肽組合物在制備增強(qiáng)免疫力及抗疲勞的藥物制劑中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供一種核苷多肽組合物、其制備方法及用途。本發(fā)明將魚精、啤酒酵母、海參經(jīng)前處理后直接利用蛋白酶酶解制備活性多肽，依據(jù)DNA和RNA磷酸二酯鍵及磷酸單酯鍵的特性進(jìn)一步加入富含磷酸二酯酶和磷酸單酯酶的麥芽根提取物，將DNA和RNA在一個反應(yīng)體系中同時酶解，制備小分子的核糖核苷和脫氧核糖核苷，這樣，在一個體系中制備出核苷多肽組合物。整個組合物的制備過程簡便，工藝時間大幅縮短(常規(guī)的一般是將RNA和DNA單獨(dú)酶解)，降低了工業(yè)化生產(chǎn)成本。制備的產(chǎn)物中核苷品類齊全，既含有組成人體RNA的核糖核苷，也含有組成人體DNA的脫氧核苷，同時富含多種活性多肽。魚精、啤酒酵母和海參來源的活性多肽的存在也提升了復(fù)合核苷在人體的吸收和分布，核苷和多肽相互協(xié)同，提升了核苷多肽組合物的保健效果。
文檔編號A23K1/14GK102823723SQ20121030623
公開日2012年12月19日 申請日期2012年8月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月27日
發(fā)明者楚大波 申請人:楚大波