專利名稱：香蕉組織培養的暗培養方法
技術領域：
本發明屬于植物組織培養技術領域，具體是涉及香蕉組織培養的暗培養方法。
背景技術：
香蕉(Musa balbisiana Colla)是我國南方的重要熱帶水果之一，同時也是許多地區的重要經濟收入來源，并且許多農戶依靠種植香蕉脫貧致富。大多數的栽培食用香蕉都是單性三倍體AAA，具有高度的不育特性，主要靠無性繁殖，生產上通常利用吸芽進行繁殖，種苗不足時，也可采用香蕉的地下莖切塊來繁殖種苗，但是該方法長期使用會累積許多病毒，如束頂病、花葉病等。造成嚴重的危害。另外，不良的香蕉種苗會導致生長不良，果品不佳，收獲不統一等問題。香蕉組織培養技術能夠在短時間內快速繁殖出大量規格統一的優質的無病蟲害的健康種苗，并且，新品種的培育和引進也需要利用脫病毒和組培快繁 技術加快名優品種的發展。香蕉組培技術是我國農業科研工作者在20世紀80年代后期研發推廣，該技術的應用對我國香蕉產業的迅速發展起到了重大的推進作用，也使得種苗工廠化生產得以實現，在短時間內將優良品種大面積推廣，達到大規模商品化香蕉生產。但是該產業經過20多年的應用，我們發現該技術存在不足，在生產應用中主要問題是
I.生產培養單周期時間長，香蕉組培生產中一般單周期培養(即接種到新培養基到培養)時間為30天以上。2.生產耗電量大，由于培養過程中，需補充光照，補光為時間IOh/天,光照強度1500 20001x。3.補光產生的能耗高，由于補充光照通常采用40W的日光燈，在工作時會產生大量的熱量，為了降低培養室的培養溫度，就必須空調降溫，由此每年夏季就會產生一筆不小的電費，給企業增加了營運成本，非常不利于工廠化生產。4.由于生產周期長，導致生產場地周轉慢，占用大量培養架，從而導致廠房面積增加。5.采用人工光照培養，為了滿足每個培養瓶生長所需的光照，則培養層架通常只能擺放繼代材料108瓶，占用空間大，采用本發明的暗培養方法，每層培養架可擺放200^220瓶，有效利用了空間。人工光照培養等量的組培苗占地多，也是廠房面積增加的一個重要原因。以上缺點是傳統組培生產中普遍存在的問題，在中國南方的熱帶及亞熱帶地區，香蕉組培苗已經成為大宗種苗品種，每年都有超過上億株的市場需求，但是由于生產成本在逐年的遞增(人工費用，電費，場地租金等)極大的阻了種苗工廠化產業的發展，因此開發一種新的組培技術以克服原有培養方式的缺點，確保香蕉種苗產業的進一步發展已經勢在必行。而本發明香蕉組織培養過程中采用暗培養方法則可以有效彌補光培養方式中的許多不足，為香蕉種苗產業的穩步發展提供技術支持。香蕉組織培養中的暗培養方法具有的優勢有以下4點I.生產周期縮短，香蕉組織培養如采用光培養的方式，由于光線有一定的抑制作用，從本次接種到下次接種一般單周期培養時間為20至25天，改用了暗培養的方式，則培養時間可以縮短至15 18天。2.離體組織及試管苗適宜在一種 特定的溫度下生長和發育。如一段適宜的溫度為(25±2) °C。當室溫不符合這種溫度時，則應啟動空調器，根據要求調節溫度，直到符合要求。傳統的光培養式組織培養一般使光照強度達到1500 20001x，要達到該光照強度的話，每層培養架則需分別裝兩支日光燈，供光照用。由此會產生一筆巨大的照明電力費用。如一個15 Hl2的培養室越可容下15個長130cm寬35cm的五層培養架。按每層兩支40W日光燈計算，則每個培養室補光的日耗電量為
ff=40 X 2 X 5 X 15 X 10=60kw/h 那么年耗電量為365X60=21900kw/h
一家年產3500 4000萬株組培苗的植物組培工廠因為補光所產生的電力費用則可高達547500度/年。由于本發明改用了暗培養技術，每年在光照方面可節省的費用是相當可觀的，對于企業在市場的競爭中提供了極大的優勢。3.進入夏季后，利用光培養技術補光照明燈管散發出來的熱量較大，使得培養室溫度遠遠超越了香蕉作物組織能夠忍耐的極限溫度33°C以上要達到理想的培養溫度28 30°C，必然需要利用空調機降溫。以15 20 m2—臺空調機(功率750w/h)計算，年降溫電量約為600度(按6個月/年計)，年生產4000萬株的生產規模降溫電量為15000度。改進培養模式暗培養后，則其降溫費用可大幅度下降，減少生產成本。4.隨著場地費用成本的逐年提高，原來繼代單周期為25天的生產模式表現出了周轉緩慢，占用大量培養室，單位面積的產出的下降，增加了運營的成本。暗培養的方式將單周期時間縮短成15天后，該問題就可大幅減緩。5.培養架的單位培養密度的增加，提高了單位面積的產出量。
發明內容
本發明的目的為了解決現有技術中存在的不足，而提供一種香蕉組織培養的暗培養方法，
在組織培養誘導脫分化和生根分化過程中采用暗培養方法，避免了傳統人工光照培養，既縮短了培養周期，也降低了生產能耗，保證組培苗質量的同時為組培苗繁殖培育降低了生產成本。本發明的技術方案如下
香蕉組織培養中的暗培養方法，它包括如下步驟
(1)外植體的選取及處理；
(2)誘導脫分化組織暗培養；
(3)生根分化暗培養；
(4)生根馴化和移栽；
所述外植體的選取是選取早春與秋季(特別是干旱季節)長勢旺盛的無病毒香蕉植株的吸芽；外植體的處理方法將吸芽清洗干凈，逐步剝去外層苞片，切除多余莖部部分，保留具有頂芽和側芽原基的小干莖，控制干莖直徑O為5 10cm，將干莖置超凈工作臺上，用75 80%酒精浸泡3(T35s消毒，再用0. I 0. 2%HgCl溶液浸泡l(Tl5min滅菌后，用無菌水沖洗3 4次，備用。吸芽為植物根際或地上莖葉腋間自然發生的短縮、肥厚呈蓮座狀的短枝。吸芽下部可自然生根，故可自母株分離而另行栽植培育成新植株。所述誘導脫分化組織暗培養是將步驟(I)消毒好的外植體香蕉干莖接種到盛裝誘導培養基的培養瓶中，然后置于28 30°C下進行暗光培養25 30天，產生叢芽組織 ’然后將得到的叢芽組織切割進行繼代培養，繼代培養也采用誘導培養基進行暗光培養，培養溫度為28 30°C，繼代培養周期為15 18天，繁殖系數為3 4，繼代培養得到所需數量的香蕉叢芽組織；所述誘導培養基以MS為基礎培養基，其他各組分含量為6-芐氨基腺嘌呤I 3mg/L, NAA生長素0. 2 lmg/L, Su白砂糖2% 5%, Agar瓊脂2 5g, pH為5. 8 6. O。這種從芽組織具備很好的繼代及生根分化的能力。 對來自于外植體所增殖的培養物(包括細胞、組織或其切段)通過更換新鮮培養基及不斷切割或分離，進行連續多代的培養，就稱為繼代培養。也是指愈傷組織在培養基上生長一段時間后，營養物枯竭，水分散失，并已經積累了一些代謝產物，此時需要將這些組織轉移到新的培養基上，這種轉移稱為繼代培養或傳代培養。繁殖系數(propagationcoefficient)是指在一次繼代培養中由一個苗(芽或芽叢)得到新苗的個數。所述生根分化暗培養將經繼代培養得到的香蕉叢芽組織接種到盛裝有生根培養基的培養瓶中，在28 30°C下進行暗光培養10 15天，誘導培養出根系后，再將長出根系的香蕉苗轉移到日光大棚進行自然光照煉苗；自然光照煉苗20天后，香蕉苗的莖桿粗壯健康，葉片由嫩黃色轉青綠色，根系發達，根毛豐富；所述生根培養基以MS為基礎培養基，其他各組分含量為NAA生長素0. 05 0. 15mg/L，Su白砂糖25 27g/L，Agar瓊脂2 5g，pH為5. 8 6. O。煉苗是在保護育苗的情況下，采取放風、降溫、適當控水等措施對幼苗強行鍛煉的過程，使其定植后能夠迅速適應露地的不良環境條件，縮短緩苗時間，增強對低溫、大風等的抵抗能力。所述暗光培養是指將在植物組織培養室中，將培養瓶排列放置在培養層架上，培養瓶直徑為05飛cm，培養瓶間距< I cm，通過入射到普通培養室的自然光進行培養，各培養瓶處于暗光培養狀態。所述培養層架為4 6層，每層培養架(130*35cm)可放置200 220瓶培養瓶。由于培養瓶緊密排列放置在培養架上，培養瓶之間擺放距離小，白天自然光照射到培養瓶上時，由于培養瓶之間的相互遮擋及透明培養瓶之間的漫反射作用，因此培養瓶處于暗光或是弱光狀態。晚上由于自然光線非常弱小，各培養瓶也處于暗光狀態。本發明的就是在這種狀態下進行組織培養，不需要像傳統的暗培養那樣進行遮光，也無需進行額外的人工補光，，而傳統的組培是需要進行人工補光的。傳統的香蕉組織培養早期可不照光，但芽萌發后，每天需要光照12h左右，光照強度為2000 30001X，能耗大.；繼代培養時莖尖叢芽團每40天才可分割轉接I次，培養周期長。本發明所述的植物組織培養實驗室是無陽光直射的。所述生根馴化和移栽是指經過步驟(3 )自然光煉苗后的香蕉苗，洗凈根部培養基，移植到營養杯中，在大棚中育苗5(T60天，再移植到大田中定植即可得到香蕉種苗。本發明的培養方法也適用到粉蕉或其它品種的香蕉的組織培養中。本發明的優點
I.采用本發明的方法，在組織培養的脫分化培養階段及分化生根的階段進行暗培養，組織處于弱光或暗光的狀態下生長，使得脫分化細胞分裂的速度加快，避免了人光補光過程中光照的抑制作用，使得培養周期縮短，提高生產效率。2.采用暗培養方式，使得出苗整齊健壯，生長速度快，變異率低，生根分化快，相對光培養技術有較大的優勢。采用本發明的培養方法一年生產香蕉苗可達到4000萬株。3.米用本發明的暗培養方法可以大幅度降低光培養生產中所產生的電能消耗,有 效降低生產成本，提高市場競爭力。4.采用本發明的暗培養方法，增加培養架的單位培養密度，可以節省培育場地，大大提高生產場地的利用率。5.提高了生產效率，降低勞動強度。本發明采用的暗培養方法，使得組培在脫分化培養階段及分化生根的階段靠自然光進行生長，因此不需要控制其光照的強度，不需要人工調節光照的強度，降低了勞動力，有利于提高生產效率。
具體實施例方式本發明用下列實施例進行說明，但不限制本發明的范圍。實施例I
香蕉組織培養中的暗培養方法，它包括如下步驟
(I)外植體的選取及處理
選取香蕉品種桂蕉6號早春干旱季節長勢旺盛的無病毒香蕉植株的吸芽；然后將吸芽用自來水清洗干凈，再用市售洗滌液清洗2 3次，逐步剝去外層苞片，切除多余莖部部分，保留具有頂芽和側芽原基的小干莖，控制干莖直徑O為5 10cm，將干莖置超凈工作臺上，用75%酒精浸泡30s，再用0. l%HgCl溶液浸泡10 min，搖動充分滅菌，倒掉消毒藥液。再用無菌水沖洗3 4次，備用。(2)誘導脫分化組織暗培養
將步驟(I)消毒好的香蕉干莖接種到盛裝有誘導培養基的培養瓶中，誘導培養基以MS為基礎培養基，其他各組分含量為6-芐氨基腺嘌呤(6-BA ) I 3mg/L，NAA生長素0. 2 lmg/L, Su白砂糖2% 5%, Agar瓊脂2 5g,pH為5. 8 6. O。然后置于28 30°C下進行暗光培養25 30天，產生叢芽組織；然后將得到的每條叢芽組織切割成3分進行繼代培養，繼代培養也采用誘導培養基進行暗光培養，培養溫度為28 30°C，繼代培養周期為15 18天，繁殖系數為3 4，繼代培養得到所需數量的香蕉叢芽組織。在植物組織培養實驗室中，培養瓶排列放置在培養層架上，培養層架為5層,每層培養架(130*35cm)可放置216個培養瓶；培養瓶直徑為①6cm，培養瓶間距0cm，通過入射到普通培養室的自然光進行培養，各培養瓶處于暗光培養狀態。(3)生根分化暗培養
將經繼代培養得到的香蕉叢芽組織接種到裝有生根培養基的培養瓶中，生根培養基以MS為基礎培養基，其他各組分含量為NAA生長素0. 05、. 15mg/L，Su白砂糖25 27g/L，Agar瓊脂2 5g，pH為5. 8 6. O。在28 30°C下進行暗光培養10 15天，誘導培養出根系后，再將長出根系的香蕉苗轉移到日光大棚進行自然光照煉苗；自然光照煉苗20天后，香蕉苗的莖桿粗壯健康，葉片由嫩黃色轉青綠色，根系發達，根毛豐富。在植物組織培養實驗室中，培養瓶排列放置在培養層架上，培養層架為5層,每層培養架(130*35cm)可放置216個培養瓶；培養瓶直徑為06cm，培養瓶間距0 cm，通過透入培養室的自然光進行培養，各培養瓶處于暗光培養狀態。(4)生根馴化和移栽
經過步驟(3)自然光煉苗后的香蕉苗，洗凈根部培養基，移植到營養杯中，在大棚中育苗5(T60天，再移植到大田中定植即可得到優質的香蕉種苗。
實施例2
(I)外植體的選取及處理
選取香蕉品種桂蕉6號秋季干旱季節長勢旺盛的無病毒香蕉植株的吸芽；然后將吸芽用自來水清洗干凈，再用市售洗滌液清洗2 3次，逐步剝去外層苞片，切除多余莖部部分，保留具有頂芽和側芽原基的小干莖，控制干莖直徑O為8 10cm，將干莖置超凈工作臺上，用75%酒精浸泡35s，再用0. l%HgCl溶液浸泡15 min，搖動充分滅菌，倒掉消毒藥液。再用無菌水沖洗3 4次，備用。(2)誘導脫分化組織暗培養
將步驟(I)消毒好的香蕉干莖接種到盛裝有誘導培養基的培養瓶中，誘導培養基以MS為基礎培養基，其他各組分含量為6-芐氨基腺嘌呤(6-BA ) 3mg/L, NAA生長素0. 5mg/L, Su白砂糖5%，Agar瓊脂2g，pH為5. 8 6. O。然后置于28 30°C下進行暗光培養25天，產生叢芽組織；然后將得到的每條叢芽組織切割成4份進行繼代培養，繼代培養也采用誘導培養基進行暗光培養，培養溫度為28 30°C，繼代培養周期為15天，繁殖系數為3 4，繼代培養得到所需數量的香蕉叢芽組織。在植物組織培養實驗室中，培養瓶排列放置在培養層架上，培養層架為4層,每層培養架(130*35cm)可放置200個培養瓶；培養瓶直徑為①5cm，培養瓶間距1cm，通過入射到普通培養室的自然光進行培養，各培養瓶處于暗光培養狀態。(3)生根分化暗培養
將經繼代培養得到的香蕉叢芽組織接種到裝有生根培養基的培養瓶中，生根培養基以MS為基礎培養基，其他各組分含量為NAA生長素0. lmg/L，Su白砂糖25g/L，Agar瓊脂2g,pH為5. 8 6. O。在28 30°C下進行暗光培養15天，誘導培養出根系后，再將長出根系的香蕉苗轉移到日光大棚進行自然光照煉苗；自然光照煉苗20天后，香蕉苗的莖桿粗壯健康，葉片由嫩黃色轉青綠色，根系發達，根毛豐富。在植物組織培養實驗室中，培養瓶排列放置在培養層架上，培養層架為4層,每層培養架(130*35cm)可放置200個培養瓶；培養瓶直徑為①5cm，培養瓶間距1cm，通過透入培養室的自然光進行培養，各培養瓶處于暗光培養狀態。(4)生根馴化和移栽
經過步驟(3)自然光煉苗后的香蕉苗，洗凈根部培養基，移植到營養杯中，在大棚中育苗5(T60天，再移植到大田中定植即可得到優質的香蕉種苗。
實施例3
(I)外植體的選取及處理
選取香蕉品種桂蕉6號早春干旱季節長勢旺盛的無病毒香蕉植株的吸芽；然后將吸芽用自來水清洗干凈，再用市售洗滌液清洗2 3次，逐步剝去外層苞片，切除多余莖部部分，保留具有頂芽和側芽原基的小干莖，控制干莖直徑巾為5 8cm，將干莖置超凈工作臺上，用75%酒精浸泡30s，再用0. l%HgCl溶液浸泡10 min，搖動充分滅菌，倒掉消毒藥液。再用無菌水沖洗3 4次，備用。 (2)誘導脫分化組織暗培養
將步驟(I)消毒好的香蕉干莖接種到盛裝有誘導培養基的培養瓶中，誘導培養基以MS為基礎培養基，其他各組分含量為6-芐氨基腺嘌呤(6-BA ) 2mg/L, NAA生長素0. 6mg/L, Su白砂糖3%，Agar瓊脂5g，pH為5. 8 6. O。然后置于28 30°C下進行暗光培養28天，產生叢芽組織；然后將得到的每條叢芽組織切割成4份進行繼代培養，繼代培養也采用誘導培養基進行暗光培養，培養溫度為28 30°C，繼代培養周期為18天，繁殖系數為3 4，繼代培養得到所需數量的香蕉叢芽組織。在植物組織培養實驗室中，培養瓶排列放置在培養層架上，培養層架為6層,每層培養架(130*35cm)可放置210個培養瓶；培養瓶直徑為①6cm，培養瓶間距0cm，通過入射到普通培養室的自然光進行培養，各培養瓶處于暗光培養狀態。(3)生根分化暗培養
將經繼代培養得到的香蕉叢芽組織接種到裝有生根培養基的培養瓶中，生根培養基以MS為基礎培養基，其他各組分含量為NAA生長素0. lmg/L，Su白砂糖25g/L，Agar瓊脂5g，pH為5. 8 6. O。在28 30°C下進行暗光培養12天，誘導培養出根系后，再將長出根系的香蕉苗轉移到日光大棚進行自然光照煉苗；自然光照煉苗20天后，香蕉苗的莖桿粗壯健康，葉片由嫩黃色轉青綠色，根系發達，根毛豐富。在植物組織培養實驗室中，培養瓶排列放置在培養層架上，培養層架為6層,每層培養架(130*35cm)可放置210個培養瓶；培養瓶直徑為①6cm，培養瓶間距0cm，通過透入培養室的自然光進行培養，各培養瓶處于暗光培養狀態。(4)生根馴化和移栽
經過步驟(3)自然光煉苗后的香蕉苗，洗凈根部培養基，移植到營養杯中，在大棚中育苗5(T60天，再移植到大田中定植即可得到優質的香蕉種苗。實施例4
粉蕉組織培養中的暗培養方法，它包括如下步驟
(I)外植體的選取及處理
選取粉蕉品種金粉I號早春干旱季節長勢旺盛的無病毒香蕉植株的吸芽；然后將吸芽用自來水清洗干凈，再用市售普通洗滌液清洗2 3次，逐步剝去外層苞片，切除多余莖部部分，保留具有頂芽和側芽原基的小干莖，控制干莖直徑O為5 10cm，將干莖置超凈工作臺上，用75%酒精浸泡30s，再用0. l%HgCl溶液浸泡10 min,搖動充分滅菌，倒掉消毒藥液。再用無菌水沖洗3 4次，備用。(2)誘導脫分化組織暗培養；
將步驟(I)消毒好的香蕉干莖接種到盛裝有誘導培養基的培養瓶中，誘導培養基以MS為基礎培養基，6-BA6-芐氨基腺嘌呤I 3mg/L，NAA生長素0. 2 lmg/L，Su白砂糖2% 5%, Agar瓊脂2g 5g，pH為5. 8 6. 0 ;置于28 30°C下進行暗光培養25 30天，產生叢芽組織；然后進行繼代培養，繼代培養周期為15 18天，繁殖系數為3 4，繼代培養得到實際生產所需數量的粉蕉叢芽組織。培養瓶排列放置在培養層架上，培養瓶直徑為06011,培養瓶間距< I cm,通過透入培養室的自然光進行培養，各培養瓶處于暗光培養狀態。每層培養架(130*35cm)可放置200 220瓶
(3)生根分化暗培養
將經繼代培養得到的香蕉叢芽組織接種到盛裝生根培養基的培養瓶中，生根培養基以MS為基礎培養基，NAA生長素0. 05 0. 15mg/L，Su白砂糖25 27g/L，Agar瓊脂2g 5g，pH為5. 8 6. 0 ;經過10 15天的暗光培養，培養溫度28 30°C，誘導培養出根系后，再將香 蕉苗轉移到日光大棚進行自然光照煉苗；自然光照煉苗20天后，香蕉苗的莖桿粗壯健康，葉片由嫩黃色轉青綠色，根系發達，根毛豐富。培養瓶排列放置在培養層架上，培養瓶直徑為06011,培養瓶間距< I cm,通過透入培養室的自然光進行培養，各培養瓶處于暗光培養狀態。每層培養架(130*35cm)可放置200 220 瓶。(4)生根馴化和移栽
經過步驟(3)自然光煉苗后的粉蕉苗，洗凈根部培養基，移植到營養杯中，在大棚中育苗5(T60天，再移植到大田中定植即可得到優質的粉蕉種苗。實施例5
(I)外植體的選取及處理
選取香蕉品種桂蕉6號早春干旱季節長勢旺盛的無病毒香蕉植株的吸芽；然后將吸芽用自來水清洗干凈，再用市售洗滌液清洗2 3次，逐步剝去外層苞片，切除多余莖部部分，保留具有頂芽和側芽原基的小干莖，控制干莖直徑O為6 9cm，將干莖置超凈工作臺上，用80%酒精浸泡30s，再用0. 2%HgCl溶液浸泡10 min，搖動充分滅菌，倒掉消毒藥液。再用無菌水沖洗3 4次，備用。(2)誘導脫分化組織暗培養
將步驟(I)消毒好的香蕉干莖接種到盛裝有誘導培養基的培養瓶中，誘導培養基以MS為基礎培養基，其他各組分含量為6-芐氨基腺嘌呤(6-BA ) lmg/L, NAA生長素I. Omg/L, Su白砂糖2%，Agar瓊脂3g，pH為5. 8 6. O。然后置于28 30°C下進行暗光培養25天，產生叢芽組織；然后將得到的每條叢芽組織切割成3份進行繼代培養，繼代培養也采用誘導培養基進行暗光培養，培養溫度為28 30°C，繼代培養周期為15天，繁殖系數為3 4，繼代培養得到所需數量的香蕉叢芽組織。在植物組織培養實驗室中，培養瓶排列放置在培養層架上，培養層架為5層,每層培養架(130*35cm)可放置220個培養瓶；培養瓶直徑為①6cm，培養瓶間距Ocm，通過入射到普通培養室的自然光進行培養，各培養瓶處于暗光培養狀態。(3)生根分化暗培養
將經繼代培養得到的香蕉叢芽組織接種到裝有生根培養基的培養瓶中，生根培養基以MS為基礎培養基，其他各組分含量為NAA生長素0. 15mg/L，Su白砂糖27g/L，Agar瓊脂3g，pH為5. 8 6. O。在28 30°C下進行暗光培養10天，誘導培養出根系后，再將長出根系的香蕉苗轉移到日光大棚進行自然光照煉苗；自然光照煉苗20天后，香蕉苗的莖桿粗壯健康，葉片由嫩黃色轉青綠色，根系發達，根毛豐富。在植物組織培養實驗室中，培養瓶排列放置在培養層架上，培養層架為5層,每層培養架(130*35cm)可放置220個培養瓶；培養瓶直徑為①6cm，培養瓶間距0c m，通過透入培養室的自然光進行培養，各培養瓶處于暗光培養狀態。
權利要求
1.香蕉組織培養中的暗培養方法，其特征在于它包括如下步驟 (1)外植體的選取及處理； (2)誘導脫分化組織暗培養； (3)生根分化暗培養； (4)生根馴化和移栽； 所述誘導脫分化組織暗培養是將步驟(I)消毒好的外植體香蕉干莖接種到盛裝誘導培養基的培養瓶中，然后置于28 30°C下進行暗光培養25 30天，產生叢芽組織；然后將得到的叢芽組織切割進行繼代培養，繼代培養也采用誘導培養基進行暗光培養，培養溫度為28 30°C，繼代培養周期為15 18天，繁殖系數為3 4，繼代培養得到所需數量的香蕉叢芽組織；所述誘導培養基以MS為基礎培養基，其他各組分含量為6-芐氨基腺嘌呤I 3mg/L，NAA生長素O. 2 lmg/L，Su白砂糖2% 5%，Agar瓊脂2 5g，pH為5. 8 6. O。
2.根據權利要求I所述的香蕉組織培養中的暗培養方法，其特征在于所述生根分化暗培養將經繼代培養得到的香蕉叢芽組織接種到盛裝有生根培養基的培養瓶中，在28 30°C下進行暗光培養10 15天，誘導培養出根系后，再將長出根系的香蕉苗轉移到日光大棚進行自然光照煉苗；自然光照煉苗20天后，香蕉苗的莖桿粗壯健康，葉片由嫩黃色轉青綠色，根系發達，根毛豐富；所述生根培養基以MS為基礎培養基，其他各組分含量為NAA 生長素 O. 05 O. 15mg/L，Su 白砂糖 25 27g/L，Agar 瓊脂 2 5g，pH 為 5. 8 6. O。
3.根據權利要求I或2所述的香蕉組織培養中的暗培養方法，其特征在于所述暗光培養是指將培養瓶排列放置在培養層架上，培養瓶直徑為Φ 5飛cm,培養瓶間距< I cm,通過入射到普通培養室的自然光進行培養，各培養瓶處于暗光培養狀態。
4.根據權利要求3所述的香蕉組織培養中的暗培養方法，其特征在于所述培養層架為4 6層,每層培養架可放置200 220瓶培養瓶。
5.根據權利要求3所述的香蕉組織培養中的暗培養方法，其特征在于所述外植體的選取是選取早春與秋季長勢旺盛的無病毒香蕉植株的吸芽；外植體的處理方法將吸芽清洗干凈，剝去外層苞片，保留具有頂芽和側芽原基的小干莖，控制干莖直徑Φ為5 IOcm ;將干莖置超凈工作臺上，用75 80%酒精浸泡3(T35s，再用O. Γθ. 2%HgCl溶液浸泡l(Tl5min滅菌后，用無菌水沖洗3 4次，備用。
6.根據權利要求I或5所述的香蕉組織培養中的暗培養方法，其特征在于所述生根馴化和移栽是指經過步驟(3)自然光煉苗后的香蕉苗，洗凈根部培養基，移植到營養杯中，在大棚中育苗5(Γ60天，再移植到大田中定植即可。
全文摘要
本發明公開了香蕉組織培養中的暗培養方法，它包括如下步驟(1)外植體的選取及處理；(2)誘導脫分化組織暗培養；(3)生根分化暗培養；(4)生根馴化和移栽；本發明在誘導脫分化組織暗培養和生根分化暗培養過程中采用暗光或弱光培養，替代了傳統香蕉組織培養中加光(1500~2500lx)進行繼代增殖培養，壯苗、生根初期培養。提高了香蕉組培的增殖倍數，縮短單周期培養的時間，且采用暗培養方式可避免傳統的光培養中由于日光燈補光時產生的電耗及抵消補光產生的熱量，減少降溫所需費用。因此采用本發明的方法可提高生產效率，降低生產成本，有利產業的發展。
文檔編號A01H4/00GK102726302SQ201210248030
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月18日 優先權日2012年7月18日
發明者葉翠娟, 李小泉, 林貴美, 牟海飛, 鄒瑜, 韓曉華 申請人:廣西植物組培苗有限公司