專利名稱：一種非洲菊組培增殖苗的瓶外無土扦插生根方法
技術領域：
本發明涉及一種非洲菊組培増殖苗的瓶外無土扦插生根方法，屬于植物生物技術及栽培技術領域。
背景技術：
非洲菊(Gerbera jamesoniI Bolus)是菊科大丁草屬多年生宿根草本花丼，因其花大、花艷、花色全且花期長，在我國廣泛種植。目前通常采用組培快繁技術為生產上提供品質優良的無病、無毒非洲菊種苗。現有的組培快繁技術主要包括培養室培養和培養室外扦插培養兩大階段，培養室培養主要包括外植體的誘導培養、増殖培養和生根培養，培養室外培養主要是將在培養室內培養基中生根的組培苗置于培養室外馴化和移栽培育成活，、其存在如下問題首先，高激素濃度下的高増殖系數會對增殖試管苗的生根、馴化和移栽等生產后續環節產生不利影響；其次，無菌苗從瓶內到瓶外，由恒溫、高濕、弱光、無菌轉換到變溫、變濕、有菌的生長條件下，環境變化十分劇烈，在培養基中進行生根培養，形成的生根苗移植到瓶外其適應性培育需要較長的緩苗時間，煉苗成活率較低，種苗的質量較差；第三，瓊脂是固體培養中最好的固化劑，瓶內培養步驟越多，使用瓊脂越多，而瓊脂占了培養基成本的80%，是造成培養成本高的關鍵因素，另外煉苗移栽時，生根苗根系的瓊脂清洗困難，附在幼苗根系上未清洗干凈的瓊脂易造成根系污染，從而影響了移栽成活率。組培苗的増殖倍數、生根率、生根苗的適應能力，是影響非洲菊エ廠化育苗成功與否、效益高低的直接因素。因此，需要尋找ー種繁殖速度快、組培苗的移栽成活率高，又能降低組織培養成本低，降低土傳病害，創造適合非洲菊組培苗生長且利于移栽成活的環境條件的新方法。
發明內容
本發明要解決的技術問題主要是針對現有技術非洲菊在培養室條件的瓶內培養基中進行生根培養，導致培育出的生根苗適應能力較弱，緩苗過渡培養時間較長，移栽成活率較低；種苗攜帶土傳病害嚴重從而制約無土栽培技術在非洲菊生產中廣泛應用的缺陷和不足，而提供將非洲菊的生根培養從瓶內移為瓶外，并且生根與過渡培養、扦插移栽在同一步驟進行的一種新的非洲菊組培増殖苗的無土扦插生根方法，以提高生根苗的適應能力，從而提高組培苗的移栽成活率。為解決上技術問題和達到本發明目的，本發明所提供的一種非洲菊組培増殖苗的瓶外無土扦插生根方法的技術方案是將經過消毒滅菌處理的非洲菊花托外植體接入誘導培養基中進行誘導培養至分化出幼芽，再將誘導培養分化出的幼芽按如下步驟進行，
A、増殖培養將誘導培養分化出的幼芽切下轉接到盛有下述列增殖培養基的培養瓶
中
MS基本培養液
6-芐胺基嘌呤(6-BA )O. 3 O. 7 mg/L萘こ酸(NAA )O. lmg/L
鹿糖30000mg/L
瓊脂6500mg/L
PH5· 8 6· O
培養瓶在培養室內光照強度為1500 2000 lx，溫度為25±2°C，光照時間為10 12h/d的條件下進行繼代増殖培養；
B、煉苗當培養瓶內培養出長度為2 3 cm的增殖苗時，將該培養瓶從培養室搬入蓋有遮光率為70%遮陽網的移栽大棚中進行4 7d煉苗，移栽大棚的溫度控制為18°C -28°C；C、瓶外無土扦插生根在所述的移栽大棚內搭建苗床，苗床的基質為無土混合基質，無土混合基質的厚度為5cm以上,所述的無土混合基質是將珍珠巖、蛭石和泥炭按珍珠巖蛭石泥炭的體積比為I :1 2的比例混合而成；·Β步驟的増殖苗從瓶內取出，用清水洗浄增殖苗上的培養基，使用75%百菌清可濕性粉劑1000倍液消毒f 2 min后，將增殖苗切成單株小苗，將單株小苗基部蘸生根水5 8s后扦插到所述的無土混合基質中，扦插密度為3cmX3cm,扦插前,先用清水噴濕該無土混合基質，使基質濕透，然后用70%敵克松可濕性粉劑1000倍液消毒，扦插后噴定根水，第二天噴施70%甲基托布津可濕性粉劑1000倍液，移栽大棚內空氣相對濕度控制在80%以上，溫度與步驟B相同，35d后，得生根種苗；所述的生根水是將吲哚丁酸(IBA)用蒸餾水配制成濃度為600 800mg/L的水溶液。如果生產上需更大量的種苗，可進ー步擴大増殖苗的數量，即可以將步驟A増殖培養的増殖苗每隔20d按步驟A相同的操作方法轉接一次以上繼代增殖培養，然后將得到 的増殖苗按步驟B和步驟C進行。上述方法步驟C中所述的扦插前，先用清水噴濕該無土混合基質，使基質濕透，然后用70%敵克松可濕性粉劑1000倍液消毒，該70%敵克松可濕性粉劑1000倍液的用量為每平方米100毫升藥液；所述的扦插后噴定根水，第二天噴施70%甲基托布津可濕性粉劑1000倍液，該70%甲基托布津可濕性粉劑1000倍液的用量為每平方米70毫升藥液。與現有技術相比，本發明的有益效果如下
I、本發明將常規的非洲菊組培快繁中生根階段在培養室瓶內培養基中培育改為瓶外大棚無土生根培育，解決了現有技術在瓶內生根，生根苗適應環境能力較弱，移栽時根系易受損，苗易折斷，根系上的瓊脂難洗干凈，易引進爛苗，成活率較低的缺陷；增強了生根苗適應環境能力，保障了種苗生根率，提高了扦插移栽成活率。2、本發明將組培快繁獲得的大量増殖苗移植大棚無土扦插生根培育，并將生根、過渡培養和扦插移栽結合一體，既保持了利用組織培養技術實現非洲菊周年生產、穩定種苗性狀、繁殖速度快等優點，又克服了組培苗煉苗成活率低、生產成本高、生產環節多等難題。3、本發明將無菌増殖苗直接扦插在無土混合基質中，既降低了苗期土傳病害，還可為非洲菊的無土栽培提供優質種苗。4、本發明巧妙科學設置的増殖培養基和相應的無土扦插生根培育措施，不僅使每次増殖倍數可達3 4倍，得大量増殖苗，還使無土扦插的成活率大量提高，苗壯，増殖苗移植到大棚的無土扦插的成活率達85%以上，無土扦插成活苗中生根率達90%以上。
具體實施例方式下面結合實施例對說明本發明作進ー步的描述，但僅是舉例，不構成對本發明的限制。各實施例中無特別說明的均為常規方法。百菌清的化學名稱為2，4，5，6_四氯-1，3-苯ニ甲臆，劑型為75%可濕性粉劑；甲基托布津可濕性粉劑的化學名稱為1，2-ニ(3-甲氧羰基-2_硫脲基)苯，劑型為70%可濕性粉劑；敵克松的化學名稱為化學名稱對ニ甲胺基苯重氮磺酸鈉，劑型為70%可濕性粉劑，所述的百分數為質量分數，所使用的各種農藥及各種試劑等為市售。實施例I
1、外植體選擇和消毒滅菌選擇非洲菊植株I 2cm大小的花托；將該花托先在自來水下沖洗5min后，用質量濃度為O. 1%的洗衣粉水清洗5min，漂洗干凈后在無菌超凈臺中將花托放入質量濃度為70%的こ醇溶液中浸泡10s，用無菌水漂洗2遍，在質量濃度為O. 1%的升汞中浸泡10 15min，再在IOOml質量濃度為O. 2%的次氯酸鈉加吐溫20兩滴的溶液中浸泡lOmin，最后用無菌水漂洗4遍，在浸泡過程中充分搖動器皿；
2、誘導培養將經過步驟I消毒滅菌處理的花托，切去花柄和花萼，并切成O.5 Icm大小，接入盛有下述誘導培養基的培養瓶中
MS基本培養液
6_芐胺基嘌呤(6-BA) 8 mg/L 吲哚こ酸(IAA)0.4 mg/L
鹿糖30000 mg/L
瓊脂6500 mg/L
PH5.8
培養瓶在光照強度為1500 2000 lx，溫度為25±2°C，光照時間為10h/d的條件下進行外植體誘導，25d用相同誘導培養基轉接I次，并在相同培養條件下培養直到分化出幼芽；如果一次誘導培養可分化出幼芽，可不再轉接繼續誘導培養；
3、増殖培養將步驟2誘導培養分化出的幼芽切下轉接盛有下述增殖培養基的培養瓶
中
MS基本培養液
6-芐胺基嘌呤(6-BA)O. 3 mg/L
萘こ酸(NAA)O. I mg/L
鹿糖30000 mg/L
瓊脂6500 mg/L
PH5.8
培養瓶在培養室內光照強度為1500 2000 lx，溫度為25±2°C，光照時間為10h/d的條件下進行繼代増殖培養，増殖倍數可達3倍，為再獲得更多的増殖苗，可每20d用相同增殖培養基及培養條件繼代轉接進行增殖培養；
4、煉苗當培養瓶內培養出長度為2 3cm的増殖苗時，將該培養瓶從培養室搬入蓋有遮光率為70%遮陽網的移栽大棚中進行4d煉苗，移栽大棚的溫度控制為18°C -22°C ；
5、瓶外無土扦插生根在所述的移栽大棚內搭建苗床，苗床的基質為無土混合基質，無土混合基質的厚度為5cm (無土混合基質的厚度還可大于5cm,從節約成本的角度考慮基質厚度為5cm即可)，所述的無土混合基質是將珍珠巖、蛭石和泥炭按珍珠巖蛭石泥炭的體積比為I :1 2的比例混合而成；將步驟4的増殖苗從瓶內取出，用清水洗凈增殖苗上的培養基，使用75%百菌清可濕性粉劑1000倍液消毒f 2 min后，將增殖苗用接種刀切成單株小苗，將單株小苗基部蘸生根水5 8s后扦插在所述的無土混合基質中，扦插密度為3cm X 3cm,扦插前,先用清水噴濕該無土混合基質，使基質濕透，然后用70%敵克松可濕性粉劑1000倍液消毒后再扦插，用量為每平方米100毫升70%敵克松可濕性粉劑1000倍液藥液，扦插后噴定根水，第二天噴施70%甲基托布津可濕性粉劑1000倍液，用量為每平方米70毫升70%甲基托布津可濕性粉劑1000倍液藥液；移栽大棚內的空氣相對濕度控制在 80% 90%，溫度與步驟4相同，35d后，得生根種苗；所述的生根水是將吲哚丁酸(IBA)用蒸餾水配制成濃度為800mg/L的水溶液。效果増殖苗移植到大棚的無土扦插的成活率達85%以上，無土扦插成活的増殖苗中生根率達95%以上，獲得了適應性強的生根種苗。實施例2
步驟I外植體選擇和消毒滅菌與實施例I步驟I相同；
步驟2誘導培養與實施例I步驟2相同；
步驟3、除以下操作不同外，其余操作方法與實施例I步驟3相同
增殖培養基中的6-芐胺基嘌呤(6-BA)為O. 7mg/L, PH為6. O 増殖效果每次繼代増殖倍數達4倍
步驟4煉苗，除以下操作不同外，其余操作方法與實施例I步驟4相同
煉苗時間為7d，移栽大棚的溫度控制為23°C 28°C ；
步驟5瓶外無土扦插生根，除以下操作不同外，其余操作方法與實施例I步驟5相同 生根水是將吲哚丁酸(IBA)用蒸餾水配制成濃度為600mg/L的水溶液。效果増殖苗移植到大棚的無土扦插成活率達90%以上，無土扦插成活的増殖苗中生根率達90%以上，獲得了適應性強的生根種苗。本發明的核心是將非洲菊外植體誘導出幼苗進行所述的增殖培養、煉苗和無土扦插生根，此三步是協調配合的，達到了特別好的效果，除實施例I列舉的步驟I外植體選擇和消毒滅菌和步驟2所述的誘導培養外，采用其它方法將非洲菊外植體消毒滅菌和其它誘導培養基誘導培養，只要能將非洲菊外植體誘導出幼苗，再將該幼苗按本發明所述的増殖培養、煉苗和瓶外無土扦插生根方法也能實現本發明目的。
權利要求
1.一種非洲菊組培增殖苗的瓶外無土扦插生根方法,將經過消毒滅菌處理的非洲菊花托外植體接入誘導培養基中進行誘導培養至分化出幼芽，其特征在于再將誘導培養分化出的幼芽按如下步驟進行， A、增殖培養將誘導培養分化出的幼芽切下轉接到盛有下述增殖培養基的培養瓶中 MS基本培養液 6-芐胺基嘌呤0. 3 0. 7 mg/L 萘乙酸0. lmg/L 鹿糖30000mg/L 瓊脂6500mg/L PH5. 8 6. 0 培養瓶在培養室內光照強度為1500 2000 lx，溫度為25±2°C，光照時間為10 12h/d的條件下進行繼代增殖培養； B、煉苗當培養瓶內培養出長度為2 3cm的增殖苗時，將該培養瓶從培養室搬入蓋有遮光率為70%遮陽網的移栽大棚中進行4 7d煉苗，移栽大棚內的溫度控制為18 0C -28 0C ； C、瓶外無土扦插生根在所述的移栽大棚內搭建苗床，苗床的基質為無土混合基質，無土混合基質的厚度為5cm以上,所述的無土混合基質是將珍珠巖、蛭石和泥炭按珍珠巖蛭石泥炭的體積比為I :1 2的比例混合而成步驟的增殖苗從瓶內取出，用清水洗凈增殖苗上的培養基，使用75%百菌清可濕性粉劑1000倍液消毒f 2 min后，將增殖苗切成單株小苗，將單株小苗基部蘸生根水5 8s后扦插到所述的無土混合基質中,扦插密度為3cmX 3cm,扦插前,先用清水噴濕該無土混合基質，使基質濕透，然后用70%敵克松可濕性粉劑1000倍液消毒，扦插后噴定根水，第二天噴施70%甲基托布津可濕性粉劑1000倍液，移栽大棚內空氣相對濕度控制在80%以上，移栽大棚內溫度與步驟B相同，35d后，得生根種苗；所述的生根水是將吲哚丁酸用蒸餾水配制成濃度為600 800mg/L的水溶液。
2.根據權利要求I所述的非洲菊組培增殖苗的瓶外無土扦插生根方法，其特征在于將步驟A增殖培養的增殖苗每隔20d按步驟A相同的操作方法轉接一次以上繼代增殖培養，然后將得到的增殖苗按步驟B和步驟C進行。
3.根據權利要求I或2所述的非洲菊組培增殖苗的瓶外無土扦插生根方法，其特征在于步驟C中所述的扦插前，先用清水噴濕該無土混合基質，使基質濕透，然后用70%敵克松可濕性粉劑1000倍液消毒，該70%敵克松可濕性粉劑1000倍液的用量為每平方米100毫升藥液；所述的扦插后噴定根水，第二天噴施70%甲基托布津可濕性粉劑1000倍液，該70%甲基托布津可濕性粉劑1000倍液的用量為每平方米70毫升藥液。
全文摘要
本發明公開一種非洲菊組培增殖苗的瓶外無土扦插生根方法。該方法主要包括將誘導培養的幼芽轉接到增殖培養基MS基本培養液，6-BA0.3～0.7mg/L，NAA0.1mg/L，蔗糖30000mg/L，瓊脂6500mg/L中培養，長出增殖苗時，將增殖培養瓶搬入蓋有遮光率為70%遮陽網的大棚中進行4～7d煉苗，然后，將增殖苗進行瓶外無土扦插生根培育。本發明將生根階段在大棚內無土生根培育，增強了生根苗適應環境能力，保障了種苗生根率，提高了扦插移栽成活率，既保持了組織培養技術優點，又克服了組培苗煉苗成活率低、生產成本高、生產環節多等難題，還降低了苗期土傳病害，可為非洲菊的無土栽培提供優質種苗。
文檔編號A01H4/00GK102657094SQ20121016268
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月24日 優先權日2012年5月24日
發明者單芹麗, 吳麗芳, 屈云慧, 曹樺, 李紳崇, 李金澤, 楊春梅, 汪國鮮, 王繼華, 許鳳 申請人:云南省農業科學院花卉研究所