專利名稱：一種高效的兔眼藍莓組培快繁方法
技術領域：
本發明屬于植物組織培養技術領域，特別涉及一種高效的兔眼藍莓組培快繁方法。
背景技術：
藍莓(Vacciniumspp.)屬于杜胃$花科(Ericaceae)越桔屬(Vaccinium)多年生落葉或常綠灌木果樹。藍莓果實具有極高的營養保健價值和經濟價值，其營養價值遠遠高于其它水果，常被譽為“世界漿果之王”;藍莓果實具有防止腦神經衰老、增強心臟功能、明目抗癌等獨特功效，被聯合國糧農組織(FAO)確定為人類五大健康食品之一。由于藍莓獨特的風味和極高的營養保健價值，其果實及產品風靡世界，供不應求，在國際市場上售價昂貴。雖然目前世界藍莓種植規模逐年增長，但目前每年的市場缺口依然達到40萬噸以上， 發展潛力巨大。近幾年我國藍莓種植面積增長很快，但是根據世界藍莓發展規律和中國藍莓產業發展預測，我國的藍莓適度種植規模應在2萬hm2以上，因此，存在著很大的開發空間。由于藍莓具有極高的營養價值和獨特的保健功效，發展勢頭強勁，常見的繁殖方法如扦插、分根等已難以滿足日益增長的藍莓苗木市場需求。為此，國內外進行了藍莓的組織培養快速繁殖研究，已有的研究認為藍莓組織培養以WPM基本培養基為最佳，添加一定濃度的植物生長調節物質玉米素后可獲得較高的藍莓組織培養增殖系數；但與蘋果和草莓等植物的組織培養相比，藍莓在試管內生根較慢，且生根率低。蘋果和草莓一般在接種后20 天內可完成生根過程，生根率達95%以上，而藍莓在1/2WPM添加IBA的培養基中培養20天后生根率還不到10 %，培養40天后生根率也僅30 % 70 %，有些品種在培養基中培養60 天或更長時間后才能在新梢基部生根，或者在培養基的外面長出氣生根，難以建立高效的藍莓組織培養快繁體系，從而無法實現藍莓大規模工廠化生產。2007年11月14日公開的申請號為200710024502. 8的發明創造公開了一種兔眼藍莓組織培養方法，該方法分為誘導、增殖、生根、煉苗四個階段。其誘導階段的培養基組分為WPM+Zt 10mg/L，增殖階段的培養基組分為WPM+Zt 5mg/L，生根階段的培養基為常規培養基。該方法提高了兔眼藍莓莖的誘導和增殖，并提高了成活率。百度文庫中公開了一種越橘使用的改良WPM基質組培技術(http://wenku. baidu. com/view/7f801748c850ad02de804126. html)。其誘導階段的培養基組分為改良 WPM+Zt 2mg/L，增殖階段的培養基組分為改良WPM+Zt lmg/L，生根階段的培養基組分為 改良 WPM+IBA O. lmg/L。改良 WPM 即以 Ca(NO3)2 · 4H20、KNO3> C10H13FeN2NaO8 和鹽酸硫胺素代替原 WPM 培養基中的 K2SO4, CaCl2, FeSO4 和 Na2_EDTA。王大平教授2009年在安徽農業科學雜志上發表了一篇名為《不同因素對兔眼藍莓離體培養芽誘導效果的影響》的文章，其得出的結論是兔眼藍莓離體培養芽誘導的最佳外植體為莖段，最佳培養基為改良WPM+Zt I 4mg/L，莖段在最佳培養基中的萌芽率為
46.7%。
2008年5月14日公開的申請號為200710157193. I的發明創造公開了一種適宜藍莓試管苗增殖的培養基組合物及其方法，其增殖培養基的組分為WPM+TDZ O. 2 O. 5mg/ L+IBA O. I O. 2mg/L+GA O. lmg/L。同樣 2008年 5 月 14 日公開的申請號為 200710157194. 6 的發明創造公開了一種適宜藍莓試管苗生根的培養基組合物及其方法，其生根培養基的組分為:1/2 改良 WPM+IBA O. 03 O. lmg/L。
發明內容
本發明的目的是提供一種高效的兔眼藍莓組培快繁方法。本發明解決所述技術問題的方案是一種高效的兔眼藍莓組培快繁方法，包括如下幾個步驟步驟一從健壯兔眼藍莓植株上獲取帶腋芽的藍莓莖段外植體，外植體經常規消毒后接種于初代誘導培養基上，所述初代誘導培養基為改良WPM+Zt I. O I. 5mg/L ；步驟二 將初代誘導得到的藍莓無菌苗的莖段或莖尖無菌接種于繼代增殖培養基上進行培養，所述繼代增殖培養基為改良WPM+ZtO. 5 O. 8mg/L ；步驟三將繼代增殖的藍莓無菌苗基部在100 500mg/L IBA無菌溶液中浸5 15s,隨后接種至藍莓生根培養基中，所述生根培養基為1/2改良WPM+IAA O. I O. 2mg/ L+AC O.5g/L ；步驟四將生根組培苗培養瓶從培養室移至塑料大棚煉苗4 7d，移栽前開蓋鍛煉3 5d，將幼苗移栽入穴盤中的栽培基質內，覆膜保濕5 7d，其間每天通風透氣5 15min兩次，7d后完全揭除塑料薄膜，此后進行正常的栽培管理。科研人員在不斷探索著藍莓的組培快繁方法，正如背景技術提到的，科研人員的研究方向集中在培養基的配方研究上，通過改變組培流程中各培養基的配方以期摸索出一種高效的藍莓組培快繁方法。本發明使用改良WPM培養基比傳統的WPM基本培養基更有利于藍莓無菌苗的誘導、增殖和生長。而且玉米素(Zt)的濃度較小，由于Zt價格昂貴，較小濃度的Zt能夠節約成本。經申請人反復試驗發現將繼代增殖的藍莓無菌苗基部在100 500mg/L IBA無菌溶液中浸5 15s后再接種至藍莓生根培養基中，有利于提高藍莓無菌苗的生根率，根數較多，根系生長正常，效果優于單純在生根培養基中直接添加IBA或IAA。添加活性炭(AC)可能模擬了植物根系的自然環境生長條件，有利于根系的發育。生根組培苗移至塑料大棚的工藝步驟和參數，也是申請人反復摸索而得。與常規藍莓組培方法相比，使用該方法可以使兔眼藍莓試管苗的增殖系數提高60%，試管苗的瓶內生根時間由90天縮短為30天，生根率由50 %提高到95 %，移栽成活率由40 %上升到95 %，有利于建立快速高效的兔眼藍莓組培快繁技術體系。作為進一步的技術方案，所述步驟一、步驟二、步驟三的培養溫度均為25±2°C，光照強度均為1500 2500Lx，光暗周期比均為12h 12h。穩定的環境條件，更有利于組培苗的生長。作為進一步的技術方案，將幼苗移栽入穴盤中的栽培基質前，藍莓幼苗根部用 O. I %多菌靈處理IOs ;揭除塑料薄膜后立即噴施750倍液的普力克。噴施兩種不同的藥劑，有利于提聞移栽成活率。
作為進一步的技術方案，所述栽培基質由草炭蛭石按體積比2 I配制而成。實驗證明草炭與蛭石的組合基質有利于兔眼藍莓組培苗的生長，效果優于草炭與石英砂的組合或草炭與珍珠巖的組合。綜上所述，本發明不但高效，而且成本較低，有利于規模化生產。
具體實施例方式實施例I一種高效的兔眼藍莓組培快繁方法，共分4個步驟。步驟一從健壯兔眼藍莓植株上獲取帶腋芽的藍莓莖段外植體，外植體經常規消毒后接種于初代誘導培養基上，所述初代誘導培養基為改良WPM+Zt 1.0mg/L，培養溫度為25±2°C，光照強度為1500 2500Lx，光暗周期比為12h 12h;改良WPM即以 Ca (NO3) 2 MH2CKKNO^CiciH13FeN2NaO8 和鹽酸硫胺素代替原 WPM 培養基中的 K2SO4, CaCl2, FeSO4 和Na2-EDTA,其中白糖20g/L,瓊脂5 8g/L，ρΗ5· 2。培養30d后，芽誘導率為90%。步驟二 將初代誘導得到的藍莓無菌苗的莖尖或莖段無菌接種于繼代增殖培養基上進行培養，所述繼代增殖培養基為改良WPM+ZtO. 6mg/L,培養溫度為25±2°C，光照強度為1500 2500Lx，光暗周期比為12h 12h ;每隔50d繼代增殖一次。下表反映了增殖培養基的配方對增殖系數、株高、無菌苗生長情況的影響。
增殖培養基增殖系數株高(cm) 無菌苗生長情況
改良 WPM+Zt 0.22.6±0.73.5±1.2較瘦弱
改良 WPM+Zt 0.56.2±1.64.1±1.9健壯良好 改良 WPM+Zt 0.86.3±1.84.0±2.0健壯良好
改良 WPM+Zt 1.56.5±2.03.9±1.7健壯良好
WPM+Zt 0.22.3±0.63.3±1.1較瘦弱
WPM+Zt 0.53.9±1.53.7±1.5健壯良好其中，增殖系數=培養周期內的總芽數/最初接種的芽或莖段數。從表中，可以明顯發現改良WPM+Zt O. 5 O. 8mg/L的配方最合理。步驟三將繼代增殖的藍莓無菌苗基部在100mg/L IBA無菌溶液中浸15s，隨后接種至藍莓生根培養基中，所述生根培養基為1/2改良WPM+IAA O. lmg/L+AC O. 5g/L，培養溫度為25±2°C，光照強度為1500 2500Lx，光暗周期比為12h 12h ;IBA無菌溶液的配置方法為將IBA溶于少量95%乙醇中，再加水至一定濃度，定容后將IBA溶液進行過濾滅菌。培養30d后，試管苗即可長出數條根系，生根率達96%。下表反映了生根培養基的配方和是否經過IBA無菌溶液處理對生根率和根系生
長情況的影響。
權利要求
1.一種高效的兔眼藍莓組培快繁方法，其特征在于包括如下幾個步驟步驟一從健壯兔眼藍莓植株上獲取帶腋芽的藍莓莖段外植體，外植體經常規消毒后接種于初代誘導培養基上，所述初代誘導培養基為改良WPM+Zt I. O I. 5mg/L ；步驟二 將初代誘導得到的藍莓無菌苗的莖段或莖尖無菌接種于繼代增殖培養基上進行培養，所述繼代增殖培養基為改良WPM+ZtO. 5 O. 8mg/L ；步驟三將繼代增殖的藍莓無菌苗基部在100 500mg/L IBA無菌溶液中浸5 15s， 隨后接種至藍莓生根培養基中，所述生根培養基為1/2改良WPM+IAA O. I O. 2mg/L+AC O. 5g/L ；步驟四將生根組培苗培養瓶從培養室移至塑料大棚煉苗4 7d,移栽前開蓋鍛煉3 5d，將幼苗移栽入穴盤中的栽培基質內，覆膜保濕5 7d，其間每天通風透氣5 15min 兩次，7d后完全揭除塑料薄膜，此后進行正常的栽培管理。
2.如權利要求I所述的一種高效的兔眼藍莓組培快繁方法，其特征在于所述步驟一、 步驟二、步驟三的培養溫度均為25±2°C，光照強度均為1500 2500Lx，光暗周期比均為 12h 12h。
3.如權利要求I或2所述的一種高效的兔眼藍莓組培快繁方法，其特征在于將幼苗移栽入穴盤中的栽培基質前，藍莓幼苗根部用O. 1%多菌靈處理IOs ;揭除塑料薄膜后立即噴施750倍液的普力克。
4.如權利要求I所述的一種高效的兔眼藍莓組培快繁方法，其特征在于所述栽培基質由草炭蛭石按體積比2 I配制而成。
全文摘要
本發明屬于植物組織培養技術領域，特別涉及一種高效的兔眼藍莓組培快繁方法。該方法的初代誘導培養基為改良WPM+Zt 1.0～1.5mg/L，繼代增殖培養基為改良WPM+Zt 0.5～0.8mg/L，生根培養基為1/2改良WPM+IAA 0.1～0.2mg/L+AC 0.5g/L；將繼代增殖的藍莓無菌苗基部在100～500mg/L IBA無菌溶液中浸5～15s后接種至藍莓生根培養基中，生根完成后將生根組培苗培養瓶從培養室移至塑料大棚煉苗4～7d，移栽前開蓋鍛煉3～5d，將幼苗移栽入穴盤中的栽培基質內，覆膜保濕5～7d，其間每天通風透氣5～15min兩次，7d后完全揭除塑料薄膜。本發明不但高效，而且成本較低，有利于規模化生產。
文檔編號A01H4/00GK102577967SQ20121005447
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月2日 優先權日2012年3月2日
發明者孫慶俊, 張海洋, 陳建中 申請人:湖州師范學院