專利名稱：一種茶樹種質(zhì)資源苗期抗寒性的鑒定方法
一種茶樹種質(zhì)資源苗期抗寒性的鑒定方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于茶樹種質(zhì)資源早期鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體介紹了一種茶樹種質(zhì)資源苗期抗寒性的鑒定方法。
背景技術(shù)：
茶樹原產(chǎn)于熱帶及亞熱帶地區(qū)，是一種喜溫暖氣候條件的葉用植物。近年來，一方面隨著茶葉需求量的不斷增加，茶葉種植面積不斷北移；另一方面，隨著氣候變化的不穩(wěn)定，越冬期及初春茶樹頻繁遭遇“霜凍，，或“倒春寒”等低溫傷害，造成茶樹新梢受害，影響茶葉的產(chǎn)量和品質(zhì)，嚴重時甚至會導致整株死亡。因此，提高茶樹的抗寒性，使茶樹安全越冬至關(guān)重要。
其中，選育抗寒良種，利用茶樹自身的遺傳因素來抵御低溫脅迫是最根本的途徑。 而抗寒良種選育的關(guān)鍵則是種質(zhì)資源抗寒性的早期鑒定。目前，鑒定茶樹抗寒性強弱最可靠的方法是直接鑒定法。即當試驗地遭遇嚴寒時，實地進行觀測和比較鑒定。但直接鑒定成本較高，受自然環(huán)境限制較大。為了克服這個困難，人們依據(jù)相關(guān)指標進行間接鑒定，但目前大多數(shù)只是利用單個指標(如質(zhì)膜透性)進行鑒定。因此，如何對茶樹種質(zhì)資源進行苗期抗寒性準確、快速鑒定，成為生產(chǎn)中亟待解決的技術(shù)問題。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對抗寒良種選育的關(guān)鍵問題，提供一種快速，準確的茶樹抗寒性鑒定方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案為一種茶樹種質(zhì)資源苗期抗寒性的鑒定方法，所述的步驟如下
(1)材料的培養(yǎng)
采集茶樹種子，將茶籽用25_30°C溫水浸泡4-5天，每天換水兩次，浮在水面的茶籽撈出淘汰，然后將剩余種子攤放于砂畦上并蓋以稻草，每天灑水一次，當50%的茶籽露出胚根時，進行播種；
(2)茶樹幼苗的脅迫處理
當茶樹生長至7-8片葉時，將茶樹幼苗移至15°C，光照60k lx,光照Uh/d的環(huán)境條件下平衡生長15d，然后將溫度調(diào)至4°C進行冷馴化；
(3)茶樹葉片生理生化指標的測定
采集茶樹葉片3片，分別測定葉片的質(zhì)膜相對透性Xl，可溶性糖含量X2，可溶性蛋白含量X3 ；
(4)實驗數(shù)據(jù)處理
計算茶樹葉片抗寒生理指數(shù)，茶樹葉片抗寒生理指數(shù)Y = 0.18-0. 02X1+0. 161X2+0. 74X3 ；
(5)抗寒性評價
采用歐氏距離，將抗寒生理指數(shù)用類平均法進行聚類分析，通過聚類分析結(jié)果和抗寒生理指數(shù)對茶樹種質(zhì)資的抗寒性做出綜合評價。
優(yōu)選的是所述的砂畦首先鋪砂5-6厘米，沙上鋪茶子7-10厘米，茶子上面蓋一層 5-6厘米厚的細砂，砂上蓋稻草或麥秸。
優(yōu)選的是所述的葉片的質(zhì)膜相對透性采用電導儀測定。
優(yōu)選的是所述的葉片可溶性糖含量采用硫酸蒽酮比色法測定。
優(yōu)選的是所述的葉片可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍G-250染色法測定。
本發(fā)明的有益效果為本發(fā)明操作簡便、成本低廉、鑒定快速準確。其中，葉片的質(zhì)膜相對透性反應(yīng)了葉片細胞膜受破壞的程度；可溶性糖和可溶性蛋白是茶樹葉片重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，其含量越高，茶樹的抗寒性越強。利用本發(fā)明評價茶樹的抗寒性簡便易行。
圖1為本發(fā)明的具體實施例的聚類分析圖具體實施方式
通過下面給出的具體實施例，可以進一步的了解本發(fā)明，但他們不是對本發(fā)明的限定。
1)從山東省日照市平家村1979年引種種植成園的‘黃山種’茶園中，采集長勢良好、未受過凍害的茶樹種子，在青島農(nóng)業(yè)大學茶樹種質(zhì)資源圃日照圃中混合播種。從中選取長勢良好的幼苗茶樹觀株，以平陽特早和浙農(nóng)117無性系良種作為對照。
2)茶樹越冬期按單株采集幼齡茶樹葉片3片備用。
3)分別采用電導儀測定葉片的質(zhì)膜相對透性，硫酸蒽酮比色法測定葉片可溶性糖含量，考馬斯亮藍G-250染色法測定葉片可溶性蛋白含量。具體方法參照李合生《植物生理生化試驗原理和技術(shù)》。
4)基本的數(shù)據(jù)處理采用EXCELL軟件，將測定數(shù)據(jù)代入茶樹葉片抗寒生理指數(shù)的公式Y(jié) = O. 18-0. 02X1+0. 161X2+0. 74X3，求得茶樹葉片的抗寒生理指數(shù)。測定和分析結(jié)果詳見表1，表2。
結(jié)果表明，茶樹種質(zhì)資源在抗寒相關(guān)生理指標上變異豐富。變異系數(shù)介于5. 39-19. 71，平均為11. 68，可溶性糖的變異系數(shù)最大。供試材料的質(zhì)膜透性從 51. 04-61. 90變化不等，最小的為單株07082503，最大的為單株07080501 ；可溶性糖含量從 2. 30-4. 85變化不等，最小的為單株07083502，最大的為單株07084701 ；可溶性蛋白含量從 5. 74-9. 10變化不等，最小的為單株07092203，最大的為浙農(nóng)117。供試材料的抗寒生理指數(shù)介于3. 82-6. 21，平均為5. 13。
5)根據(jù)所得葉片抗寒生理指數(shù)，采用歐氏距離，按照類平均法對種質(zhì)資源進行聚類分析。詳見圖1。
從聚類圖中可以看出，在閾值為0.64處，可以將供試材料分成三個大類群，第I類群包括浙農(nóng)117等11份種質(zhì)材料，主要是可溶性糖和可溶性蛋白含量高，質(zhì)膜透性小的單株，屬于抗寒性強的單株；第III類群包括平陽特早在內(nèi)的5份種質(zhì)材料，主要是質(zhì)膜透性較大，可溶性糖和可溶性蛋白含量較低的單株，屬于抗寒性弱的單株 ’第II類群的單株介4于第I類群和第III類群之間，屬于抗寒性中等的單株。
表1供試材料抗寒生理指標測定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種茶樹種質(zhì)資源苗期抗寒性的鑒定方法，所述的步驟如下(1)材料的培養(yǎng)采集茶樹種子，將茶籽用25-30°C溫水浸泡4-5天，每天換水兩次，浮在水面的茶籽撈出淘汰，然后將剩余種子攤放于砂畦上并蓋以稻草，每天灑水一次，當50%的茶籽露出胚根時，進行播種；(2)茶樹幼苗的脅迫處理當茶樹生長至7-8片葉時，將茶樹幼苗移至15°C，光照60k lx，光照iai/d的環(huán)境條件下平衡生長15d，然后將溫度調(diào)至4°C進行冷馴化；(3)茶樹葉片生理生化指標的測定采集茶樹葉片3片，分別測定葉片的質(zhì)膜相對透性XI，可溶性糖含量X2，可溶性蛋白含量X3 ；(4)實驗數(shù)據(jù)處理計算茶樹葉片抗寒生理指數(shù)，茶樹葉片抗寒生理指數(shù)Y = 0. 18-0. 02X1+0. 161X2+0. 74X3 ；(5)抗寒性評價采用歐氏距離，將抗寒生理指數(shù)用類平均法進行聚類分析，通過聚類分析結(jié)果和抗寒生理指數(shù)對茶樹種質(zhì)資的抗寒性做出綜合評價。
2.如權(quán)利要求1所述的茶樹種質(zhì)資源苗期抗寒性的鑒定方法，其特征在于所述的砂畦首先鋪砂5-6厘米，沙上鋪茶子7-10厘米，茶子上面蓋一層5-6厘米厚的細砂，砂上蓋稻草或麥秸。
3.如權(quán)利要求1所述的茶樹種質(zhì)資源苗期抗寒性的鑒定方法，其特征在于所述的葉片的質(zhì)膜相對透性采用電導儀測定。
4.如權(quán)利要求1所述的茶樹種質(zhì)資源苗期抗寒性的鑒定方法，其特征在于所述的葉片可溶性糖含量采用硫酸蒽酮比色法測定。
5.如權(quán)利要求1所述的茶樹種質(zhì)資源苗期抗寒性的鑒定方法，其特征在于所述的葉片可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍G-250染色法測定。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種茶樹種質(zhì)資源苗期抗寒性的鑒定方法，所述的步驟如下(1)材料的培養(yǎng)；(2)茶樹幼苗的脅迫處理；(3)茶樹葉片生理生化指標的測定；(4)實驗數(shù)據(jù)處理；(5)抗寒性評價。本發(fā)明操作簡便、成本低廉、鑒定快速準確。其中，葉片的質(zhì)膜相對透性反應(yīng)了葉片細胞膜受破壞的程度；可溶性糖和可溶性蛋白是茶樹葉片重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，其含量越高，茶樹的抗寒性越強。利用本發(fā)明評價茶樹的抗寒性簡便易行。
文檔編號A01C1/00GK102498873SQ20111033812
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月1日
發(fā)明者丁兆堂, 王玉, 范凱 申請人:青島農(nóng)業(yè)大學