專利名稱：裸鼠膀胱癌原位模型建立方法和裝置的制作方法
裸鼠膀胱癌原位模型建立方法和裝置技術領域
本發明屬人類惡性腫瘤動物模型建立技術，涉及一種實驗用裸鼠原位模型建立。 特別是人泌尿系膀胱腔內淺表性膀胱癌原位模型的建立方法和裝置。亦可用于人惡性腫瘤細胞裸鼠食道、結腸、子宮原位種植。
背景技術：
膀胱癌是泌尿生殖系統中最常見的惡性腫瘤，由于其較高的發病率及復發率而受到廣泛重視。膀胱癌初發時多為表淺性，目前對淺表性膀胱癌的常規治療為經尿道切除，術后輔以灌注化療或灌注免疫治療，但術后腫瘤仍有較高的復發率。目前，普遍認為研究膀胱癌原位動物模型可以對腫瘤的發生發展機制有進一步的認識，對提高臨床膀胱癌的治療具有十分重要的實際意義。然而，通常的裸鼠皮下接種人類腫瘤與人類的腫瘤的發生發展方式相差甚遠。近年來發現將不同臟器來源的人類腫瘤接種于裸鼠的對應臟器，即原位接種，對研究腫瘤的轉移有重要價值。近來，也有以先天性T細胞免疫缺陷的裸鼠為研究對象，采用細胞移植法，模擬人類膀胱癌的發生、發展過程，構建裸鼠淺表性膀胱癌原位模型，灌注藥物到裸鼠膀胱內，動態觀察治療效果，為開發新的膀胱腔內抗癌生物免疫制劑和抗癌化療藥物、尋找防治膀胱癌的策略奠定基礎。
目前，原位膀胱癌動物模型的建立方法有多種，其中以切割損傷后種植效果最佳。建立裸鼠胱癌原位模型的一般過程，首先是對裸鼠進行深度麻醉，然后手術切開腹腔， 用無齒鑷子夾住膀胱壁固定膀胱，以細針穿刺入膀胱腔，在膀胱內壁劃割劃傷內膜，再注入人膀胱癌細胞懸液保留一定時間，將臟器復位，縫合關閉腹腔。也有的在直視下切開膀胱腔，用電灼法使裸鼠膀胱內膜形成創面，再灌注人膀胱癌細胞懸液保持一定時間，使腫瘤細胞種植在創面上。以上建立原位模型的方法，其最大危害是要手術打開裸鼠腹腔及縫合臟器及皮膚，創傷大，容易造成傷口感染或麻醉過度死亡。術后要常規使用抗感染藥物預防感染，增加了試驗成本。即使不開腹，應用經尿道注入化學藥品的腐蝕法，因為其損傷是彌漫性的，包括全部的膀胱粘膜和尿道粘膜，腫瘤種植成瘤率低，且生長位置具有不確定性，更重要的是易出現感染、尿道狹窄等嚴重的并發癥，裸鼠的死亡率明顯增高。
公開文獻報道了一些裸鼠臟器接種癌細胞的方法，例如中國專利名稱人癌組織塊裸鼠臟器壁膠粘接種新技術申請(專利)號CN99105062.2申請日1999.04.09公開(公告)號CN1270064公開(公告)日2000. 10. 18申請(專利權)人浙江大學，地址浙江省杭州延安路353號發明(設計)人魚達摘要一種人癌組織塊裸鼠臟器壁膠粘接新技術，是將人癌組織塊用醫用粘合劑粘接于裸鼠臟器壁。該技術解決了人類腫瘤組織塊在裸鼠臟器壁的接種，即原位接種的技術難點。使用該技術將腫瘤組織接種于臟器壁與原有用無創縫線將組織縫合纏掛在臟器壁完全不同，腫瘤與臟器壁結合簡便有效，經原位接種后可出現腫瘤的淋巴結和肝組織轉移，操作簡便，成瘤率高，能大大節約時間， 便于動物成批量實驗，較易達到技術操作的規范化，從而達到節約人力、物力、財力的目的。主權項1. 一種人癌組織塊裸鼠臟器壁膠粘接新技術，其特征在于將用于建立模型的人癌組織切成均勻小塊，將裸鼠麻醉后暴露待接臟器，將已切好的人癌組織塊直接置于已劃破臟器外壁漿膜層表面，然后在腫瘤塊表面滴入醫用粘合劑，使膠液覆蓋瘤塊并延伸至臟器表面，待粘合劑干后，將臟器復位，縫合皮膚。
該上述公開的專利方法的不足之處首先，它也同樣需要將裸鼠完全麻醉后手術切開腹腔暴露待接種臟器，覆蓋瘤塊后再將臟器復位，縫合關閉腹腔，造成的后果與前面所述的情況一樣，需要深度麻醉和較大的手術打擊，不小心就會使得裸鼠死亡，術后注射抗生素預防感染，增加了試驗成本；其次，它只是適用于種植在臟器外表面的原位腫瘤建立方法，不適合用在腔內表面建立原位腫瘤。然而，更重要的是，大多數臟器的腫瘤都是原發于腔內的粘膜層，進一步發展浸潤肌層，最后才到達臟器的最外的漿膜層。因此，本發明在臟器腔內建立的原位腫瘤更符合人類腫瘤的發生、發展過程，對于臨床疾病治療的科學研究具有更大的價值。再次，它在接種前先劃破臟器外壁漿膜層，因為沒有劃割器衡量劃割的深度標準，劃割過淺可明顯降低成瘤率，過深會出現臟器穿孔，造成污染種植癌組織塊失敗。 由于滴入的OB膠在數秒鐘內凝固，且3 4周后才開始降解吸收。將人癌組織塊放入被劃破的臟器外壁漿膜層，如癌組織塊與劃破的臟器外壁接觸不完全及臟器蠕動使之間出現孔隙，滴入的OB吻合膠會進入癌組織塊與劃破的臟器外壁之間凝固，使它們之間失去接觸， 結果會造成癌組織塊因失去營養供應而壞死。當腫瘤塊種植成功后，外層凝固的OB膠醫用粘合劑層可阻擋腫瘤細胞向外生長，而只能向周邊粘膜下層浸潤，有人曾對多種人腫瘤細胞做過實驗，人腫瘤細胞很難浸潤穿破裸鼠臟器的漿膜層，不符合人類腫瘤穿破漿膜層向外生長，當腫瘤組織脫落后形成腹腔種植的特點。發明內容
本發明的目的是為了克服現有技術的不足之處，采用經雌性裸鼠尿道進入膀胱的內切割操作，將人膀胱癌細胞懸液種植到裸鼠膀胱壁內，又可以調整導尿管側孔的位置，實現定位種植腫瘤細胞，可高效建立人膀胱癌細胞裸鼠原位淺表膀胱癌動物模型。本方法和裝置操作簡單，無需切開腹腔，時間短，裸鼠痛苦小，可在淺度麻醉下進行，明顯降低裸鼠因麻醉、手術打擊和切口感染造成的死亡，對提高臨床膀胱癌的治療具有十分重要的實際意義。
本發明的另一個目的是通過提供人惡性腫瘤細胞裸鼠臟器腔內原位腫瘤模型建立新技術并進行擴展應用。該技術包括制備簡單有效的裝置和簡便易行的操作方法，可明顯提供裸鼠薄壁臟器人腫瘤細胞腔內接種的成功率。除了膀胱癌的原位模型建立，還可應用于人惡性腫瘤裸鼠食道、結腸、子宮等器官的原位種植。
本發明的技術解決方案是裸鼠膀胱癌原位模型建立方法，其特征在于首先將雌性裸鼠淺度麻醉，用帶側孔導尿管通過尿道插入膀胱，使導尿管內持續形成負壓，然后將切割器由輸血膠管穿入導尿管腔， 調整切割斜面和導尿管側孔的位置，在保持負壓情況下進行切割，切割掉部分粘膜層，使膀胱粘膜下層暴露形成局部創面，再灌注呈對數生長期的人膀胱癌細胞懸液到裸鼠膀胱腔內保留一段時間后排出體外，7天后就能夠達到淺表膀胱癌的建立效果。
以上所述的使膀胱粘膜形成局部創面的切割為若干次，選擇適宜導尿管的管徑和側孔孔徑，可確保內切割形成創面而不刺穿膀胱壁。
以上所述的使導尿管內持續形成負壓，是采用抽吸注射針筒對導尿管進行抽吸。 用帶側孔導尿管通過尿道插入膀胱，調節側孔位置，可定向選擇性地貼近要切割損傷的膀胱內壁，抽吸針筒負壓拉桿使導尿管腔內持續形成負壓，將欲切割的膀胱內壁粘膜吸入導尿管側孔內，然后將切割器穿入輸血膠管，由于膠管有良好的彈性，加之負壓力使膠管穿刺針孔和切割器針壁密切接觸，穿刺點閉合緊密無漏氣，調整切割斜面和導尿管側孔的位置， 在保持持續負壓的情況下進行切割，使吸入側孔的膀胱粘膜形成局部創面，再灌注呈對數生長期的人膀胱癌細胞懸液到裸鼠膀胱腔內保留一段時間后排出體外，7天后就能夠達到淺表膀胱癌的建立效果。
以上所述的經尿道灌注呈對數生長期人膀胱癌細胞懸液到裸鼠膀胱腔內，并保留 0.5-2小時，使生長活躍的腫瘤細胞與損傷的膀胱組織密切接觸，進而浸潤生長，種植成瘤。
以上所述的裸鼠膀胱癌原位模型建立方法采用的裝置，包括抽吸注射器、輸血膠管、帶側孔的導尿管、接頭和切割器等部件，抽吸注射器由針筒和針筒負壓拉桿構成，針筒的前段與輸血膠管配合緊密連接，同時抽吸形成負壓后可加強其密閉性；帶側孔的導尿管通過接頭和輸血膠管緊密連接針筒，抽吸針筒負壓拉桿使導尿管腔內形成負壓；所述的切割器是能夠穿過輸血膠管，通過接頭進入導尿管腔內，末端切割斜面與側孔相對運動，進行切割吸入側孔內的裸鼠膀胱壁粘膜，形成局部創面的金屬針。
所述的帶側孔的導尿管可以用注射針頭改制而成，針尖保留裸鼠尿道到膀胱底部的適當長度切割后，用酒精燈燒灼末端封閉并打磨圓頓光滑，側孔用微型銼刀打磨在針頭的前端。
上述的裝置的特點是注射器抽吸可持續形成負壓，切割針遠端在顯微鏡下打磨成銳角斜面，穿入乳膠管，因切割針很細，穿刺孔徑微小，在持續的負壓下可嚴密閉合無漏氣，牽拉針筒負壓拉桿，可同時觀察輸血導管的管壁回縮到原直徑的2/3，即停止繼續抽吸，可保證持續恒定的負壓。由0.6/32號注射針頭自制的硬質膀胱導尿管，末端閉合打磨圓頓光滑，可保證進入時不會損傷尿道及膀胱粘膜。其遠端側面打磨成側孔，在負壓下吸住側孔大小面積的膀胱粘膜，保持持續恒定負壓下切割若干次，可使膀胱粘膜形成創面，再灌注人膀胱癌細胞保持1小時后排出體外，7天后就能夠達到淺表膀胱癌的建立效果。
以上所述的各種裝置的材料均可從醫院臨床上找到，價格低廉，硬質導尿管由 0. 6/32號注射針頭制成，切割裝置采用中醫上使用的沈號針灸針改制而成。
以上所述的裝置可簡單拆卸組裝，并可以在高壓蒸汽下滅菌消毒，操作中每個環節可確保無菌。
本發明裸鼠原位膀胱癌建立裝置的工作原理和過程如下注射器抽吸可持續形成負壓，切割針遠端打磨成銳角斜面，穿入輸血膠管，穿刺孔在負壓下可嚴密閉合無漏氣，且注射器可持續抽吸保證恒定的負壓；由0. 6/32號注射針頭自制的硬質膀胱導尿管，遠端閉合并打磨光滑，可保證進導尿管時對尿道和膀胱粘膜無損傷；旋轉調節角度，在負壓下定位吸入側孔面積大小的膀胱粘膜，在保持恒定負壓下上下運動切割器若干次，可切割掉吸入側孔內的膀胱粘膜，暴露膀胱粘膜下層，使膀胱粘膜形成創面。再灌注生長活躍的人膀胱癌細胞懸液保持0. 5-2小時后排出體外，7天后就能夠達到淺表膀胱癌的建立效果。
本發明的有益效果當前，通過移植細胞或組織塊方法，在正常解剖部位達到快速建立動物膀胱癌原位模型的研究主要集中在移植方法改進上。因為裸鼠很小，其空腔臟器體積更小，在腔內接種人腫瘤細胞技術要求高。與現有的電灼法、化學藥物(酸性液體等)腐蝕法、切開腹腔穿刺膀胱腔內劃割法的方法和裝置相比，本發明的接種新技術，解決了人類腫瘤細胞在裸鼠臟器腔內接種，即原位接種的技術難點。發明制備了簡單有效的腔內切割裝置，化復雜為簡單， 是一種簡便高效的原位腫瘤建立方法，其突出的實質性特點和顯著的進步是1、本發明裸鼠原位膀胱癌建立裝置操作簡單，時間短，可在淺度麻醉下進行，明顯降低裸鼠因麻醉造成的死亡。
2、因欲切割的膀胱粘膜已經被吸入側孔腔內，切割器與側孔邊緣相對運動，切割效率高，切割若干次即可達到目的，不會產生因為摩擦而產生的熱量，不會對泌尿道及膀胱粘膜造成灼熱損傷。
3、本發明裸鼠原位膀胱癌建立裝置操作簡單，非直視下進行，減少了操作者的工作量，在體外擺好方位，抽吸負壓后反復切割幾次，操作即結束，可便于動物的批量實驗。
4、本裝置由尿道進入膀胱，不會產生由于穿刺膀胱壁的針眼種植腫瘤細胞，或流入腹腔形成的腹腔腫瘤種植。因為注射針頭自制的硬質膀胱導尿管，末端閉合打磨圓頓光滑，可保證進入時不會損傷尿道及膀胱粘膜。
5、切割器每次造模前進行切割斜面打磨，切緣鋒利，可高效切割吸入側孔的膀胱粘膜組織。
6、導尿管由裸鼠尿道進入膀胱腔，無須進行開腹腔等手術操作，對裸鼠打擊小，無膀胱粘膜粘連及感染的副作用發生，明顯降低因麻醉、手術打擊和切口感染造成的死亡。
7、以往的損傷方法，因為膀胱體部活動度大，難以固定來控制切割位置和深度，易穿孔。本裝置在抽吸負壓時，輸血膠管變扁，操作者可觀測輸血膠管最小直徑為原來的2/3， 可保證負壓恒定，且硬質導尿管的管徑及側孔大小可控制吸入的膀胱粘膜的多少，達到技術操作的規范化，腔內切割深度適宜，不會發生膀胱穿孔。
8、因本裝置負壓吸引住膀胱內壁，起到固定膀胱的作用，再實施定位切割，可大大降低操作難度。
9、可轉動硬質導尿管，由側孔定位膀胱癌的種植位置。與以往的稀鹽酸腐蝕法相比，膀胱癌可準確定位，定向種植在腫瘤好發部位，模擬人類膀胱癌多發于膀胱兩側壁和三角區。
10、其整個切割裝置的尖端是在導尿管官腔密閉的環境下上下移動進行切割的， 不會損傷裸鼠的除吸入側孔的膀胱粘膜以外的任何組織和器官；同時也大大減少對操作者的損傷，因為操作者手被扎傷后有被種植膀胱癌的可能。對實驗者和裸鼠都有具有高度的安全性。
11、本裸鼠原位膀胱癌的建立方法操作簡單，時間短，裸鼠痛苦小，符合實驗動物倫理學要求。
12、其造模組件生產成本低，各組件可以快速裝卸，連接簡便，且本裝置經過沖洗消毒后可重復利用，經濟環保，可大大節約人力、物力、財力。
13、本發明的裸鼠膀胱癌原位模型建立裝置操做建立的裸鼠原位膀胱癌，腫瘤細胞種植在粘膜破損處，呈菜花樣向腔內生長，最外層壁為腫瘤細胞壁，同時腫瘤基底部向肌層和漿膜層浸潤，完全符合人膀胱癌真實的發生發展過程，用于科學研究，其實驗結果具有很強的說服力。總之，本發明在淺度麻醉下完成，無需開腹，用統一的切割器，在恒定持續的負壓下切割標準的深度，灌注的腫瘤細胞懸液密切與創面接觸0. 5-2小時，可大大增加腫瘤種植的成功率，完全模擬人類腫瘤發生發展過程。本發明的方法還可以在制備治療食道癌、子宮內膜癌、宮頸癌、結腸癌等有管腔與體外相通能夠將切割器插入的器官，進行切割后試驗人腫瘤細胞原位模型建立的醫療器械方面的應用。本發明除了能夠應用于與體外相通臟器腔內造模以外，經微創穿刺后，也同樣能夠應用于肝囊，陰囊及其他具有小囊內腔粘膜層腫瘤細胞的原位種植等。
圖1是本發明的裸鼠膀胱癌原位模型建立裝置結構示意圖。圖2是切割裝置裝置結構圖。圖3是帶側孔導尿管的結構示意圖。圖4是裸鼠膀胱癌原位模型建立裝置使用狀態圖。圖5是切割掉裸鼠膀胱粘膜層后膀胱壁病理切片顯微鏡圖像(低倍鏡)。圖6是裸鼠膀胱粘膜層切割處灌注人膀胱癌懸液7天后膀胱癌細胞生長病理切片顯微鏡圖像(高倍鏡)。圖中序號和部件名稱
1、針筒負壓拉桿，2、針筒，3、輸血膠管，4、接頭，5、導尿管，6、側孔，7、切割器，8、裸鼠膀胱壁粘膜下層，9、裸鼠膀胱壁粘膜層，10、裸鼠膀胱壁肌層，11、淺表膀胱癌，12、正常膀胱壁粘膜層。
具體實施例方式以下結合附圖對本發明作進一步地說明
如圖1、2、3所示，本發明裝置包括抽吸注射器(1)、針筒(2)、輸血膠管(3)、帶側孔的導尿管通過接頭(4)、帶側孔的導尿管(5)、切割器(7)。帶側孔的導尿管通過接頭(4)和輸血膠管(3)連接抽吸注射器。所述的切割器(7)是能夠穿過輸血膠管(3)和接頭(4)進入導尿管管腔內切割吸入側孔的裸鼠膀胱粘膜形成局部創面的金屬針。抽吸注射器可持續形成負壓，切割針遠端打磨成銳角斜面切緣鋒利，穿入輸血膠管，穿刺孔在負壓下可嚴密閉合無漏氣，且抽吸形成的負壓進一步加強了穿刺點的氣密性，由0. 6/32號注射針頭自制的硬質膀胱導尿管，遠端閉合并打磨成恰當孔徑的側孔，在負壓下吸住側孔面積大小的膀胱粘膜層，在保持恒定負壓下切割若干次，使膀胱粘膜形成創面。所述的抽吸注射器由針筒(2)和針筒負壓拉桿(1)構成，針筒(2)的前段與輸血膠管(3)配合連接。所述的帶側孔的導尿管可以用注射針頭改制而成，針尖保留裸鼠尿道到膀胱底部的適當長度切割后，用酒精燈燒灼末端封閉并打磨圓頓光滑，側孔用微型銼刀打磨在針頭的前端。
切割裝置采用沈號針灸不銹鋼針制成，質硬耐磨，且有良好的韌性。側孔硬質導尿管(3)的結構示意如圖3所示，切割裝置采用沈號針灸針直徑和 0. 6/32注射器針頭管徑相配套，可均勻切割吸入側孔的膀胱粘膜。圖4是裸鼠膀胱癌原位模型建立裝置使用狀態圖，圖中可見，輸血膠管(3)可以彎曲，切割器(7 )可以穿過輸血膠管(3 )壁，經過接頭4進入導尿管5內，對吸進側孔的膀胱粘膜進行切割。從圖5中的顯微鏡圖像(低倍鏡)左上角可見膀胱粘膜層(移行細胞層)被切割器切割掉，粘膜下層、肌層保存完整；右側為未切割的膀胱壁，可見粘膜層、粘膜下層及肌層保存完整。圖6顯微鏡圖像(高倍鏡)中可見，左側為被切割器切割掉裸鼠膀胱粘膜層(移行細胞層)后，再灌注呈對數生長期的人膀胱癌細胞EJ到裸鼠膀胱腔內保留1小時后排出體外， 7天后病理切片可見原位淺表膀胱癌生長，并向粘膜下層浸潤；右側為未切割的膀胱壁，可見正常膀胱粘膜層、粘膜下層。裝置的具體制作過程膀胱癌原位模型建立裝置的負壓裝置可以由截斷0.6/32 注射器針頭遠端至只剩下1. 5cm,由小號的輸血膠管和玻璃管做成的接頭使導尿管與長約 5cm的膠管連接，連接處用絲線扎緊，膠管另一端連接20ml注射器，連接處絲線扎緊。切割器用26號針灸針制成，遠端在顯微鏡下打磨成銳角斜面，在膠管上穿刺并將針尖插入注射器針頭至封閉的尖端，可在側孔看到切割活動的針灸針。裝配完成后，將硬質導尿管由裸鼠尿道緩緩插入進入膀胱腔內，體外調整側孔的方向，使之朝向預先設計好種植腫瘤的膀胱內壁粘膜，在負壓吸引下，將裸鼠膀胱壁粘膜層吸到側孔內，由帶有銳角斜面的切割器穿入腔內，與側孔相對運動進行切割，使膀胱內壁形成創面，再灌入生長活躍的人膀胱癌細胞懸液保留一段時間，使之與切割掉膀胱粘膜層的粘膜下層密切接觸、種植生長，形成淺表性膀胱癌。具體裸鼠原位模型的建立效果
體外試驗我們的試驗方法是將裸鼠淺度麻醉后，插入硬質導尿管，抽吸注射器可使導尿管腔內持續形成恒定的負壓，術者在輸血軟管上選擇與導尿管腔成一直線處為進針點，穿入由針灸針制成的切割器，透過透明塑料針頭處，可順利穿入導尿管，調整切割斜面和導尿管側孔的位置，在保持持續恒定的負壓下進行垂直切割若干次，可使膀胱粘膜形成深淺適宜的創面。再灌注人膀胱癌細胞保持1小時后排出體外，7天后就能夠達到淺表膀胱癌的建立效果。將人膀胱癌細胞株EJ進行裸鼠原位模型的建立試驗，一組用手術切開腹腔劃割的裝置處理，另一組用本發明裝置處理，結果經切開腹腔劃割的裝置處理的死亡3只， 應用本裝置裸鼠全部成活，成瘤率是開腹腔劃割的兩倍。試驗1、膀胱癌原位模型的建立
本發明人于2011年5月購自廣西醫科大學實驗動物中心養殖，4 - 6周齡雌性BALB/ c裸鼠M只，體重16 - 20g,在無特定病原體SPF環境飼養(實驗動物質量合格證號 SCXK (桂)2009-0002),隨機分成兩組進行人膀胱癌細胞EJ的裸鼠原位膀胱癌模型建立試驗。第一組12只使用本發明裝置進行操作，用戊巴比妥裸鼠腹腔淺度麻醉后，緩慢插入自制硬質導尿管，調整好側孔所對的切割點后，抽吸注射器同時觀察輸血導管的管壁回縮到原直徑的2/3，使導尿管腔內持續形成負壓，并維持恒定的負壓值。選擇與導尿管成一直線的乳膠軟管處為進針點，斜穿入由針灸針制成的切割器。透過透明塑料針頭處，順利穿入導尿管。調整切割斜面和導尿管側孔的位置，在保持持續恒定的負壓下進行垂直切割若干次，可使膀胱粘膜形成創面。再灌注呈對數生長期的人膀胱癌細胞EJ懸液，保留1小時后排出體外，7天后觀察淺表膀胱癌的建立效果；第二組12只按文獻報道的方法，用戊巴比妥裸鼠腹腔深度麻醉后，腹壁皮膚常規碘酒及酒精消毒，作腹正中1. 5cm縱向切口，用無齒鑷子夾住膀胱頂將膀胱鉗出切口固定膀胱，直視下用細穿刺針穿入膀胱腔內劃割黏膜5 次，因膀胱過度充盈或完全空虛均明顯增加劃割造模操作難度，過度充盈膀胱壁菲薄，劃割時容易膀胱穿孔，膀胱腔空虛，膀胱壁厚體積過小，進針后無法觀察劃割深度。過度充盈可擠壓排出適當尿液，膀胱腔空虛，要等待尿液生成脹起膀胱，明顯延長了手術時間。劃割黏膜后將膀胱放回腹腔，分層縫合腹壁。灌注及保瘤留人膀胱癌細胞懸液同前。結果第一組 12只用本發明裝置進行操作的裸鼠全部成活，7天后膀胱癌成瘤率91. 7% (11/12)；第二組開腹腔劃割的裝置處理的因麻醉死亡2只，術后切口感染死亡1只，7天后膀胱癌成瘤率 55. 6%(5/9)。應用本發明裝置操作方法簡單高效，膀胱癌惡性腫瘤生長的情況良好，成瘤率高，建立的膀胱癌原位模型完全符合人膀胱癌發生及生長特性。試驗2、食道癌原位模型的建立經裸鼠口腔插入本裝置，遠端側孔接觸食道的內壁黏膜進行負壓吸引，保持持續恒定的負壓下垂直切割食道癌粘膜若干次，可使其粘膜形成創面。再灌注人食道癌細胞Eca-109保留1小時，期間調整裸鼠頭高下腹壓低體位，壓迫胃的賁門區以阻止人食道癌細胞流入胃腔，后吸出體外，7天后解剖可觀察到凸向腔內的食道癌腫瘤。試驗3、直腸癌原位模型的建立術前進行充分的腸道準備，由肛門灌入灌腸液反復沖洗若干次，再灌入慶大霉素保留10分鐘。裸鼠淺度麻醉裸鼠后，通過肛門緩慢將本裝置插入，側孔對應貼緊直腸壁12點處的黏膜，保持持續恒定的負壓下進行垂直切割5次，可使其粘膜形成創面。再灌注人直腸癌細胞株Colo 320，夾閉肛門，取直立位，同時壓迫降結腸防止結腸內容物進入直腸腔內，保留1小時后吸出，8天后解剖可觀察到凸向腔內的直腸癌腫瘤。試驗4、子宮內膜癌原位模型的建立淺度麻醉裸鼠后，通過裸鼠陰道、子宮頸口緩慢將本裝置插入裸鼠的一側子宮腔(雌性裸鼠為雙角子宮)，遠端側孔接觸子宮內膜進行負壓吸引，保持持續恒定的負壓下進行垂直切割若干次，使其粘膜形成創面。再灌注人子宮內膜癌細胞株HEC-1B，取直立位，夾閉陰道，同時壓迫兩側子宮的遠端，保留1小時后吸出， 7天后解剖可觀察到凸向子宮腔內的子宮內膜癌腫瘤。試驗5、子宮頸癌原位模型的建立方法同上，將導尿管緩慢插入裸鼠兩側子宮匯合處，再后退約2mm，使導尿管側孔貼近子宮頸口處的黏膜進行負壓吸引，保持持續恒定的負壓下進行垂直切割若干次，使其粘膜形成創面。再灌注人子宮頸癌HeLa細胞株，取直立位，夾閉陰道，同時壓兩側子宮匯合處，保留1小時后吸出，7天后解剖可觀察到凸向陰道腔內的子宮頸癌腫瘤。
權利要求
1.一種裸鼠膀胱癌原位模型建立方法，其特征在于首先將雌性裸鼠淺度麻醉，用帶側孔導尿管通過尿道插入膀胱，使導尿管內持續形成負壓，然后將切割器穿入，調整切割斜面和導尿管側孔的位置，在保持負壓情況下進行切割，切割掉部分粘膜層，使膀胱粘膜下層暴露形成局部創面，再灌注呈對數生長期的人膀胱癌細胞懸液到裸鼠膀胱腔內保留一段時間后排出體外，7天后就能夠達到淺表膀胱癌的建立效果。
2.根據權利要求1所述的裸鼠膀胱癌原位模型建立方法，其特征在于使膀胱粘膜形成局部創面的切割為若干次，選擇適宜導尿管的管徑和側孔孔徑，可確保內切割形成創面而不刺穿膀胱壁。
3.根據權利要求1所述的裸鼠膀胱癌原位模型建立方法，其特征在于使導尿管內持續形成負壓，是采用抽吸注射針筒對導尿管進行抽吸。
4.根據權利要求1所述的裸鼠膀胱癌原位模型建立方法，其特征在于經尿道灌注呈對數生長期人膀胱癌細胞懸液到裸鼠膀胱腔內，其保留的時間是0. 5 - 2小時，可使生長活躍的腫瘤細胞與損傷的膀胱組織密切接觸，進而浸潤生長，種植成瘤。
5.如權利要求1所述的裸鼠膀胱癌原位模型建立方法采用的裝置，其特征在于包括抽吸注射器、輸血膠管(3)、帶側孔的導尿管(5)、接頭(4)和切割器(7)，抽吸注射器由針筒 (2)和針筒負壓拉桿(1)構成，針筒(2)的前段與輸血膠管(3)配合緊密連接，同時抽吸形成負壓后可加強其密閉性；帶側孔的導尿管(5)通過接頭(4)和輸血膠管(3)緊密連接針筒(1)，抽吸針筒負壓拉桿(1)使導尿管腔內形成負壓；所述的切割器(7)是能夠穿過輸血膠管(3)，通過接頭(4)進入導尿管(5)腔內，進行切割吸入側孔內的裸鼠膀胱壁粘膜，形成局部創面的金屬針。
6.根據權利要求4所述的裝置，其特征在于帶側孔的導尿管(5)可以用注射針頭改制而成，側孔設在針頭的前端，切割掉針尖并遠端封閉，保留裸鼠尿道到膀胱頂的適當長度。
7.如權利要求1所述的裸鼠膀胱癌原位模型建立方法在制備治療食道癌、結腸癌、子宮內膜癌和宮頸癌的醫療器械方面的應用。
全文摘要
本發明公開了一種裸鼠膀胱癌原位模型建立方法，其特征在于首先將雌性裸鼠淺度麻醉，用帶側孔導尿管通過尿道插入膀胱，使導尿管內持續形成負壓，然后將切割器穿入，調整切割斜面和導尿管側孔的位置，在保持負壓情況下進行切割，切割掉部分粘膜層，使膀胱粘膜下層暴露形成局部創面，再灌注呈對數生長期的人膀胱癌細胞懸液到裸鼠膀胱腔內保留一段時間后排出體外，7天后就能夠達到淺表膀胱癌的建立效果。與其它現有的電灼法、化學藥物腐蝕法、穿刺膀胱腔內劃割法的方法相比，本發明造模組件生產成本低，膀胱癌建立方法效果好，裝置操作簡單，時間短，裸鼠痛苦小，明顯降低因麻醉、手術打擊及感染造成的死亡。
文檔編號A61D7/00GK102499784SQ20111032557
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月24日 優先權日2011年10月24日
發明者李云龍 申請人:李云龍