專利名稱：一種適于蕨類植物孢子萌發與育苗的培養基的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物工程技術領域，具體涉及一種蕨類植物的工廠化育苗過程中的培養基。
背景技術：
蕨類植物又名羊齒植物，具獨立生活的配子體(原葉體)和孢子體，其孢子體具維 管，為低等維管植物。我國具有豐富的蕨類植物資源，被譽為“蕨類王國”。蕨類植物在生態 系統、污染場地的生物修復、社會經濟、科學研究等諸多方面具重要的意義。因此，本發明具 有廣泛的應用前景，現舉例說明如下許多蕨類植物具有食用價值，有些是著名的山珍，如薇菜(包括紫萁Osmimda japonicThunb.禾口分株紫萁 Osmunda cinnamomea L.)、藏菜、莢果藏[Matteuccia struthiopteris (L.) Todaro，別名黃瓜香、廣東菜]、猴腿(學名猴腿蹄蓋蕨Athyrium multidentatum)等是我國重要的出口創匯山野菜。僅薇菜一項，我國每年出口創匯額高達 上億美元，被譽為“山珍之王”。由于上述山野菜營養豐富，鮮美可口，風味獨特，國際行情不 斷上漲，導致野生資源的過度采摘，不僅使野生資源遭到破壞，而且高強度的采收也導致品 質的嚴重下降。許多蕨類植物是著名的園林綠化和觀賞植物，如鹿角蕨、鳳尾蕨(井欄邊草)、狗 脊蕨、華南紫萁、腎蕨、莢果蕨、觀音坐蓮、金毛狗、蜈蚣草(作為花卉銷售的“蜈蚣草”不僅 包括鳳尾蕨科的Pteris vittata L.，還包括其他許多葉形類似蜈蚣的蕨類植物)等等。目 前世界范圍內成功栽培的蕨類植物總數大約為700種，其中絕大多數是作為觀賞植物用于 園林、賓館、家居裝飾和美化，已經成為花卉市場中的重要組成部分。資料表明，僅歐美市 場，每年的銷售量就達到了 5000萬盆。砷具有很強的毒性，對人類健康和環境造成重大危害，可引發癌癥等多種嚴重的 健康問題。近年的研究發現，蜈蚣草(Pteris vittata L.)等蕨類植物對砷具有超富集能 力，其葉片中砷的富集量高達3000mg · kg—1，可作為生物修復物種用于砷污染場地的修復。 同時，井欄邊草等蕨類植物還能富集鉛等重金屬有毒物質，對于被重金屬污染的土壤的生 物修復具重要價值。許多蕨類植物具有生物活性物質，可作為重要的制藥原料。如蛇足石杉 (LycopodiumserratumThunb.)中含有一種稱為石杉堿甲的生物堿，為一種高效、可逆、選擇 性強的乙酰膽酯酶抑制劑，是治療老年性癡呆癥和少兒學習障礙的新藥。但石杉堿甲結構 復雜，難于用化學的手段合成，只能從蛇足石杉中提取。還有一些蕨類植物是國家級保護的珍稀物種，如桫欏、水韭、荷葉鐵線蕨、鹿角蕨 等，它們在科學研究中具有重要的意義。由于蕨類植物是低等的維管植物，主要依靠孢子繁殖。天然情況下，孢子萌發率極 低，因而限制了蕨類植物的開發利用和科學研究。本發明正是為了解決上述問題而提出的。
發明內容
本發明的目的是提供一種適于蕨類植物孢子萌發與育苗的培養基，該培養基用于 蕨類植物孢子萌發與育苗，可提高孢子的萌發率。為了實現上述目的，本發明所采取的技術方案是一種適于蕨類植物孢子萌發與 育苗的培養基，其特征在于培養基由包含以下營養組份組成硝酸根離子(硝態氮)2 60mmol .廠1，銨離子(銨態氮)1 3Ommol · Γ1，磷酸根離子0. 3 8mmol ·Ι^，鉀離子 2. 7 66mmol · Γ1，鈣離子 0. 37 12. Ommol · Γ1，鎂離子 0. 18 1. 8mmol · Γ1，硫酸根 離子0. 173 1. 73mmol · Λ螯合鐵鹽(或螯合亞鐵鹽)10 100 μ mol · Λ硼酸10 200 μ mo 1 ·Ι^，二價錳離子10 100 μ mol ·Ι^，鋅離子3 30 μ mol ·Ι^，二價銅離子(或二 價銅離子的絡合物)0.5 8μ mol ·Ι^，鉬酸根離子0. 1 Ιμπιο ·Ι^，二價鈷離子0. 01 0. 1 μ mol · L—1，二價鎳離子 0. 1 μ mol · L—1，碘離子 1. 2 μ mol · L—1，氯離子 0. 05 12讓ol · ΙΛ鹽酸硫胺素0. 3 30 μ mol · L—1，其余成分為水，培養基ρΗ值為4. 0 9. 0。所述培養基的營養組份組成為ΝΗ4Ν035. 15mmol · Λ KN034. 70mmol · Λ CaCl2 · 2Η20 0. 75mmol · Λ MgSO4 · 7Η20 0. 375mmol · Λ KH2PO4O. 735 1· 47mmol · Λ 螯合鐵鹽或螯合亞鐵鹽 25 μ mol · ΙΛ Η3Β0325 μ mol · Λ MnSO4 · H2O 25 μ mol · Λ ZnSO4 · 7Η20 7· 5 μ mol · Λ Na2MoO4 · 2Η200· 25 μ mol · Λ CuSO4 · 5Η20 0· 5 4 μ mol · Λ CoCl2 · 6Η20 0. 025 μ mol · Λ NiCl2 · 6Η20 0. 025 μ mol · Λ KIO 0· 3 μ mol · Λ 鹽酸硫 胺素1. 48 μ mol · L—1，其余成分為水，培養基ρΗ值為6. 0 士0. 5 (即5. 5 6. 5)。所述培養基的營養組份組成為NH4N033. 50mmol · Λ KNO3Il. 5mmol · Λ Ca(NO3)2 ·4Η201· 25mmol · Γ1，MgSO4 · 7Η20 0. 50mmol .Γ1，KH2PO4O. 735 1· 47mmol 'T1jKCI 0. 27mmol · Λ 螯合鐵或螯合亞鐵 25 μ mol · Λ Η3Β0325 μ mol 'T1jMnSO4 ·Η20 25 μ mol · Λ ZnSO4 · 7Η20 7· 5 μ mol · Λ Na2MoO4 · 2Η20 0. 25 μ mol ‘ Λ CuSO4 · 5Η20 0· 5 4 μ mol · Λ CoCl2 · 6Η20 0. 025 μ mol · Λ NiCl2 · 6Η200· 025 μ mol · Λ KIO 0· 3 μ mol · Λ 鹽酸硫 胺素1. 48 μ mol · L—1，其余成分為水，培養基ρΗ值為6. 0 士0. 5 (即5. 5 6. 5)。所述螯合鐵鹽(或螯合亞鐵鹽)是指用下列一種或任意兩種以上的螯合劑(為兩 種以上時為任意配比)，與三價或二價鐵鹽所形成的螯合物(包括這些螯合物的復合鹽類， 如EDTA鐵鈉鹽、EDTA鐵氨鹽、DTPA鐵鈉鹽、DTPA鐵氨鹽等)乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙 撐三胺五乙酸(DTPA)、N-羥乙基乙胺三乙酸(HEDTA)、環己烷二胺四乙酸(DCTA)、反式-1， 2-環己二胺四乙酸(CyDTA)、乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)、1，3-丙二胺四乙酸(PDTA)、 氨基三乙酸(NTA)、二乙三胺(DETA)、三乙基四胺六乙酸(TTHA)、乙二胺四丙酸(EDTP)、 EDDHA[ethylenediamine-N, N’ -bis (2-hydroxyphenylacetic acid)，Zj二月安-N, N’ 一雙I臨 尹圣基苯乙酸]^EDDHMA[ethylendiamine di (2-hydroxy-4-methylphenylacetic) acid,乙二 胺雙臨羥基-4-甲基苯乙酸],EDDHSA[ethylenediamine di (2-hydroxy-5_sulfophenylac etic)acid,乙二胺雙臨羥基-5-磺基苯乙酸]等。所述二價銅離子的絡合物是指用下列一種或任意兩種以上的離子絡合劑(為兩 種以上時為任意配比)，與二價銅鹽所形成的絡合物，包括這些絡合物的復合鹽類乙二胺 四乙酸(EDTA)、二乙撐三胺五乙酸(DTPA)、N-羥乙基乙胺三乙酸(HEDTA)、環己烷二胺四 乙酸(DCTA)、反式-1，2-環己二胺四乙酸(CyDTA)、乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)、1， 3_丙二胺四乙酸(PDTA)、氨基三乙酸(NTA)、二乙三胺(DETA)、三乙基四胺六乙酸(TTHA)、乙二胺四丙酸(EDTP)、EDDHA[乙二胺-N，N，-雙臨羥基苯乙酸，ethylenediamine-N, N' -bis(2-hydroxyphenylacetic acid)]>EDDHMA[ethylendiaminedi(2-hydroxy-4-methy lphenylacetic) acid,乙二胺雙臨羥基 ~4~ 甲基苯乙酸]、EDDHSA[ethylenediamine di (2-hydroxy-5-sulfophenylacetic)acid,乙二胺雙臨羥基_5_磺基苯乙酸]、氨基酸及蛋白水 解物等。所述氨基酸是指甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、 酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、賴氨酸、羥賴氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、絲氨酸、蘇氨 酸、胱氨酸、半胱氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、組氨酸、精氨酸、茶氨酸中的任意一種或任意二種 以上的混合，任意二種以上混合時為任意配比。所述蛋白質水解物是指水解酪蛋白、水解乳蛋白、水解魚蛋白、水解大豆蛋白、水 解花生蛋白、酸解酪蛋白、酸解乳蛋白、酸解魚蛋白、酸解大豆蛋白、酸解花生蛋白、酶解酪 蛋白、酶解乳蛋白、酶解魚蛋白、酶解大豆蛋白、酶解花生蛋白、胰蛋白胨、酪蛋白胨、乳蛋白 胨、牛肉蛋白胨、魚蛋白胨、骨蛋白胨、大豆蛋白胨、花生蛋白胨中的任意一種或任意二種以 上的混合，任意二種以上混合時為任意配比。所述培養基的中雖然只使用了一些物質的某一種結晶水狀態，但改用這些物質的 其它結晶水狀態同樣能實現本發明，如用CaCl2或CaCl2 · 6H20等替代CaCl2 · 2H20,因為同 一種化合物的不同結晶水狀態的鹽類在溶液中是一樣的。所述培養基的中的H3BO3可以用Na2B4O7 · IOH2O替代，Na2MoO4 · 2H20可以用其它鉬 酸鹽(如鉬酸銨)代替，錳、鋅、銅、鈷、鎳等可以用其它種類的酸根(或配體)組成的相應 鹽類代替，而不影響整個培養基效果。所述培養基中還可添加植物生長調節物質(或激素)、肌醇、煙酸(也稱為維生素 B3或維生素PP)、鹽酸吡哆醇(也稱為維生素B6)、生物素(也稱為維生素H)、甘氨酸等培 養基常見的組分[雖然上述配方不包含植物生長調節物質(或激素)、肌醇、煙酸(也稱為 維生素B3或維生素PP)、鹽酸吡哆醇(也稱為維生素B6)、生物素(也稱為維生素H)、甘氨 酸等培養基常見的組分，因為上述物質并非孢子萌發所必需]。所述培養基中還可添加培養基凝固劑(雖然上述配方沒有包含培養基凝固劑，但 并不意味著因添加培養基凝固劑，改變培養基的物理性狀后，而不能實現本發明，因為固體 培養或液體培養等只是培養方法的問題，而非配方問題)。所述培養基中還可添加碳源(雖然上述配方沒有添加蔗糖等碳源，但本發明可補 充碳源，因為碳源可以通過培養物自身的光合作用而解決，也可以因不同的研究目的而改 變，如用葡萄糖替換蔗糖等)。本發明中，培養基的總離子強度大約是標準MS培養基的1/2 1/4，但大幅度地 提高了 KH2PO4和CuSO4 · 5H20的濃度，補充了微量的NiCl2 · 6H20，大幅度降低了原配方中的 KI的濃度，并去掉了對孢子萌發影響不大的肌醇、煙酸、鹽酸吡哆醇、甘氨酸等有機物質，代 之以1. 48 μ mo 1 · 相當于0. 5mg · Γ1)的鹽酸硫胺素，最終形成了本發明的最佳配方。本發明提出的培養基不僅可以用于蕨類植物孢子的帶菌萌發，也可用于無菌萌 發。針對部份蕨類植物孢子存在休眠的問題，可以向培養基中添加一定濃度的赤霉素(如 GA3等)，以解除休眠。解除休眠的GA3濃度可以通過設置單因子濃度梯度試驗確定；也可 以用一定濃度的GA3水溶液對孢子進行預處理，以打破其休眠，預處理的強度同樣可以通過簡單的對比試驗加以確認。同時，不同蕨類植物的孢子需要的最佳接種密度可能不盡相 同，需要事先摸索。進行孢子的帶菌萌發時，為了抑制雜菌生長，培養基中不宜添加碳源，應利用孢子 萌發物自身的光合作用滿足其生長的需求。為了滿足光合作用的要求，對培養的光照強度、 光照周期、光質等有一定的要求，最佳光照條件可用通過設置簡單的系列比較試驗加以確 認。如果進行無菌萌發，則既可添加一定濃度的碳源，如30g · L—1的蔗糖等，以促進孢 子萌發物的快速生長，也可不添加碳源，依照上述帶菌萌發最佳的光照條件進行培養，不過 要注意培養容器的透氣狀態，滿足光合作用對二氧化碳的需求。同時，本發明還可用于蕨類植物快速繁殖的需求。在進行快速繁殖時，可向培養基 中添加一定濃度的碳源，如30g · Γ1的蔗糖等，以促進孢子萌發物的快速生長，并添加一定 濃度的生長素類物質和細胞分裂素類物質，以提高繁殖的效率。本發明不限制采用固體培養、液體培養、紙橋培養、沙基培養等培養方式，應用者 可根據不同的目的和條件加以正確選擇。實驗表明，蕨類植物的孢子在本發明所提出的培養基上不僅萌發率高，而且所萌 發的原葉體及其再生的孢子體的生長速度、長勢均明顯優于對照。該配方用于蕨類植物的 工廠化育苗、快速繁殖和育種工作，滿足人們對蕨類植物幼苗的需求。本發明的有益效果是該培養基用于蕨類植物孢子萌發與育苗，可提高孢子的萌 發率，獲得健壯的原葉體和再生的孢子體。與目前報道的常見培養基，如MS培養基、Knop氏液等相比，蕨類植物孢子在本培 養基上不僅萌發率高，而且所萌發的原葉體(配子體)及其再生的孢子體的生長速度、長勢 均明顯優于對照。孢子接種最快2 3天即可萌發，萌發率可高達95%，孢子體誘導率可高 達30%，且原葉體、孢子體色澤深綠，生長健壯。該培養基用于蕨類植物的育苗、快速繁殖和 育種工作，滿足工廠化育苗的需求。
具體實施例方式為了更好地理解本發明，下面結合實施例進一步闡明本發明的內容，但本發明的 內容不僅僅局限于下面的實施例。實施例1 實施例7 一種適于蕨類植物孢子萌發與育苗的培養基，由包含以下營養組份組成，見表1。表1 (除pH值外，其余成份的單位均為mmol · L—1)
具體配置方法在IL水中，加入上述成份，調整pH值。可根據研究目的添加蔗糖 或瓊脂等。如果是做無菌萌發，則需要將配制好的培養基在121°C條件下濕熱滅菌20分鐘。 上述實施例中，實施例1 4適合大多數蕨類植物孢子的萌發。實施例5則適合于一些嗜 堿性環境的蕨類孢子的萌發。實施例6則適合一些耐鹽蕨類的孢子的萌發。實施例7適于 一些對鹽分比較敏感蕨類孢子的萌發。應用實例1 薇菜孢子的帶菌萌發1)培養基準備按實施例1 4的要求配制培養基，并添加6g · L—1的瓊脂固化。 培養基無需高壓滅菌，直接分裝于250mL的錐形瓶中，每瓶大約分裝50mL，待培養基凝固后 備用。同時按MS培養基和Knop氏液的配方配制相應培養基作為對照。所有培養基均不添 加蔗糖。2)孢子接種取少許薇菜的孢子，均勻地撒在培養基的表面，將錐形瓶瓶口用帶 透氣濾芯的塑料封口膜封住，防止培養過程中的水份蒸發。3)培養條件將接種后的錐形瓶置于20 25°C，光強為2000 40001x，光照周 期為16h光照/8h黑暗的條件下培養。4)孢子萌發效果接種在上述培養基上的孢子均能萌發，其中在本發明的培養基 上，孢子接種3天即可觀察到萌發，4 5天后進入萌發高峰期，利用體視顯微鏡在第10天 統計的萌發率可高達95%。孢子在MS培養基上的萌發時間一股要比本發明的培養基上的 晚3 5天，統計萌發率僅60%左右，有些批次的萌發率甚至不足30%。孢子在Knop氏液 上的萌發速度與萌發率與本發明的培養基相似。表明本發明的培養基適宜于薇菜孢子的萌 發，效果優于普通MS培養基。5)原葉體(配子體)生長情況接種在本發明的培養基上的孢子經20天左右的培 養，配子體的平均大小可達0. 5mm左右，50天可達5mm，且原葉體色澤深綠，生長旺盛，多數 原葉體甚至以40 80°的傾斜角度向空間生長(而不是貼于培養基的表面)。接種在MS 培養基上的孢子萌發后，生長速度與本發明上的相似。接種在Knop氏液上的孢子萌發后生 長較慢，長勢也較弱，30天后許多原葉體出現生長停滯，發育緩慢，多數原葉體的色澤較淡。 表明本發明的培養基十分適于薇菜原葉體的生長，效果優于Knop氏液。6)孢子體生長情況在本發明的培養基上經50 60天左右的培養，原葉體可鋪 滿整個培養基的表面，大小可達5mm以上，此時原葉體發育成熟。向錐形瓶中添加本發明的 液體培養基(或者自來水)，使培養基表面濕潤，但又不淹沒原葉體，30分鐘后用吸管小心 吸走液體，1周后重復上述處理過程。自接種3 4個月后，可見整個培養基表面均被孢子 體的第一片葉所覆蓋，色澤深綠，生長旺盛。統計表明，大約20 30%的配子體均萌出了 第一片孢子體葉。第一片孢子體葉萌出后再經1個月左右即可長出如三葉草狀的第二片孢 子體葉，并可見大量拳卷葉萌出。從培養基下方觀察，可見大量棕色的根狀物。而對照培養 基上孢子體顯著少于本發明的，孢子體葉不能完全覆蓋培養基表面。統計表明，對照組中僅 10%左右的配子體能形成孢子體。尤其是Knop氏液上的孢子體不僅長勢瘦弱，而且色澤發 黃，甚至呈乳黃色，經過4 5個月的培養，多數孢子體生長停滯。表明本發明的培養基非 常適于誘導薇菜孢子體的形成和生長，且孢子體長勢旺盛，發育迅速，效果優于MS培養基 和Knop氏液。應用實例2 鳳尾蕨(井欄邊草)孢子的無菌萌發
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1)按實施例1 4的要求配制培養基，并補充30g · L—1的蔗糖作為碳源，添加 6g · Γ1的瓊脂作為固化劑。培養基分裝于250mL的錐形瓶中，121°C濕熱滅菌20分鐘，冷 卻后備用。2)在鳳尾蕨的孢子囊群呈棕褐色且囊群尚未開裂時，剪取孢子葉，將其切成Icm 左右的葉段。3)在超凈工作臺上，將葉段用70%的乙醇作表面消毒30s，然后用1%。的升汞溶液 消毒6 8min，無菌水反復沖洗(一股為4 5次)。4)將表面消毒后的孢子葉段置于一無菌、直徑為7. 5cm的培養皿中，加入少量無 菌水，按無菌操作規范，用小型手術刀小心將孢子囊刮下，并用玻璃棒或小鑷子將其搗碎， 制成孢子懸浮液。5)用一無菌的滴管吸取孢子懸浮液，將其接種在培養基的表面。如果水分過多，可 以用滴管小心吸去多余的水分，以無明顯積水為宜。6)將錐形瓶瓶口用帶透氣濾芯的塑料封口膜封住，置于20°C，光強為40001x，光 照周期為16h光照/8h黑暗的條件下培養。7)大約1個月左右即可萌發大量的原葉體，3個月后即可得到大量再生的孢子體本發明所列舉的各原料，以及本發明各原料的上下限、區間取值，都能實現本發 明，在此不一一列舉實施例。
權利要求
一種適于蕨類植物孢子萌發與育苗的培養基，其特征在于培養基由包含以下營養組份組成硝酸根離子2～60mmol·L 1，銨離子1～30mmol·L 1，磷酸根離子0.3～8mmol·L 1，鉀離子2.7～66mmol·L 1，鈣離子0.37～12.0mmol·L 1，鎂離子0.18～1.8mmol·L 1，硫酸根離子0.173～1.73mmol·L 1，螯合鐵鹽或螯合亞鐵鹽10～100μmol·L 1，硼酸10～200μmol·L 1，二價錳離子10～100μmol·L 1，鋅離子3～30μmol·L 1，二價銅離子或二價銅離子的絡合物0.5～8μmol·L 1，鉬酸根離子0.1～1μmol·L 1，二價鈷離子0.01～0.1μmol·L 1，二價鎳離子0～0.1μmol·L 1，碘離子0～1.2μmol·L 1，氯離子0.05～12mmol·L 1，鹽酸硫胺素0.3～30μmol·L 1，其余成分為水，培養基pH值為4.0～9.0。
2.根據權利要求1所述的一種適于蕨類植物孢子萌發與育苗的培養基，其特征在于 所述培養基的營養組份組成為NH4NO3 5. 15mmol · Λ KNO3 4. 70mmol · Λ CaCl2 · 2Η20 0. 75mmol · Λ MgSO4 · 7Η20 0. 375mmol · Λ KH2PO4 0. 735 1. 47mmol · Λ 螯合鐵鹽 或螯合亞鐵鹽 25 μ mol · ΙΛ H3BO3 25 μ mol · Λ MnSO4 · H2O 25 μ mol · Λ ZnSO4 · 7Η20 7. 5 μ mol ‘ ΙΛ Na2MoO4 · 2Η20 0. 25 μ mol ‘ Λ CuSO4 · 5Η20 0· 5 4 μ mol · Λ CoCl2 · 6Η20 0. 025 μ mol · ΙΛ NiCl2 · 6Η20 0. 025 μ mol · Λ KI 0 0· 3 μ mol · Λ 鹽酸硫胺素 1.48 μ mol · Γ1,其余成分為水，培養基PH值為6. 0 士0. 5。
3.根據權利要求1所述的一種適于蕨類植物孢子萌發與育苗的培養基，其特征 在于所述培養基的營養組份組成為=NH4NO3 3. 50mmol · L—1，KNO3 11. 5mmol · L—1， Ca (NO3) 2 · 4H20 1. 25mmol · L-1，MgSO4 · 7H20 0. 50mmol · L-1，KH2PO4 0. 735 1. 47mmol · L-1， KCl 0. 27mmol · Λ 螯合鐵或螯合亞鐵 25 μ mol · Λ H3BO3 25 μ mol · Λ MnSO4 · H2O 25 μ mol · ΙΛ ZnSO4 · 7Η20 7. 5 μ mol · Λ Na2MoO4 · 2Η20 0. 25 μ mol · Λ CuSO4 · 5Η20 0· 5 4 μ mol · ΙΛ CoCl2 · 6Η20 0. 025 μ mol · Λ NiCl2 · 6Η200· 025 μ mol · Λ KI 0 0.3 μ mol · ΙΛ鹽酸硫胺素1.48 μ mol · L—1，其余成分為水，培養基ρΗ值為6.0士0.5。
4.根據權利要求1、2或3所述的一種適于蕨類植物孢子萌發與育苗的培養基，其特征 在于所述螯合鐵鹽或螯合亞鐵鹽是指用下列一種或兩種以上的螯合劑，與三價或二價鐵 鹽所形成的螯合物乙二胺四乙酸、二乙撐三胺五乙酸、N-羥乙基乙胺三乙酸、環己烷二胺 四乙酸、反式-1，2-環己二胺四乙酸、乙二醇二乙醚二胺四乙酸、1，3-丙二胺四乙酸、氨基 三乙酸、二乙三胺、三乙基四胺六乙酸、乙二胺四丙酸、乙二胺-N，N’ -雙臨羥基苯乙酸、乙 二胺雙臨羥基-4-甲基苯乙酸、乙二胺雙臨羥基-5-磺基苯乙酸。
5.根據權利要求1、2或3所述的一種適于蕨類植物孢子萌發與育苗的培養基，其特征 在于所述二價銅離子的絡合物是指用下列一種或兩種以上的離子絡合劑，與二價銅鹽所 形成的絡合物，包括這些絡合物的復合鹽類乙二胺四乙酸、二乙撐三胺五乙酸、N-羥乙基 乙胺三乙酸、環己烷二胺四乙酸、反式-1，2-環己二胺四乙酸、乙二醇二乙醚二胺四乙酸、 1，3_丙二胺四乙酸、氨基三乙酸、二乙三胺、三乙基四胺六乙酸、乙二胺四丙酸、乙二胺-N， N’ -雙臨羥基苯乙酸、乙二胺雙臨羥基-4-甲基苯乙酸、乙二胺雙臨羥基-5-磺基苯乙酸、 氨基酸、蛋白水解物。
6.根據權利要求5所述的一種適于蕨類植物孢子萌發與育苗的培養基，其特征在于 所述氨基酸是指甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、 天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、賴氨酸、羥賴氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、組氨酸、精氨酸、茶氨酸中的任意一種或任意二種以上的 混合，任意二種以上混合時為任意配比。
7.根據權利要求5所述的一種適于蕨類植物孢子萌發與育苗的培養基，其特征在于 所述蛋白質水解物是指水解酪蛋白、水解乳蛋白、水解魚蛋白、水解大豆蛋白、水解花生蛋 白、酸解酪蛋白、酸解乳蛋白、酸解魚蛋白、酸解大豆蛋白、酸解花生蛋白、酶解酪蛋白、酶解 乳蛋白、酶解魚蛋白、酶解大豆蛋白、酶解花生蛋白、胰蛋白胨、酪蛋白胨、乳蛋白胨、牛肉蛋 白胨、魚蛋白胨、骨蛋白胨、大豆蛋白胨、花生蛋白胨中的任意一種或任意二種以上的混合， 任意二種以上混合時為任意配比。
全文摘要
本發明屬于生物工程技術領域。一種適于蕨類植物孢子萌發與育苗的培養基，其特征在于培養基由包含以下營養組份組成硝酸根離子2～60mmol·L-1，銨離子1～30mmol·L-1，磷酸根離子0.3～8mmol·L-1，鉀離子2.7～66mmol·L-1，鈣離子0.37～12.0mmol·L-1，鎂離子0.18～1.8mmol·L-1，硫酸根離子0.173～1.73mmol·L-1，螯合鐵鹽或螯合亞鐵鹽10～100μmol·L-1，硼酸10～200μmol·L-1，二價錳離子10～100μmol·L-1，鋅離子3～30μmol·L-1，二價銅離子或二價銅離子的絡合物0.5～8μmol·L-1，鉬酸根離子0.1～1μmol·L-1，二價鈷離子0.01～0.1μmol·L-1，氯離子0.05～12mmol·L-1，鹽酸硫胺素0.3～30μmol·L-1，其余成分為水，培養基pH值為4.0～9.0。可提高孢子的萌發率。
文檔編號A01H4/00GK101911914SQ20101026905
公開日2010年12月15日 申請日期2010年9月1日 優先權日2010年9月1日
發明者李繼紅, 王焰新, 葛臺明, 鄭敏 申請人:中國地質大學(武漢)