5-氨基乙酰丙酸鹽、其制備方法及其用途的制作方法

專利名稱：5-氨基乙酰丙酸鹽、其制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及5_氨基乙酰丙酸鹽，其可用于微生物、發(fā)酵、動物、藥物、植物等領(lǐng)域 中；制備該鹽的方法；含有該鹽的藥物組合物；以及含有該鹽的植物活化劑組合物。
背景技術(shù)：
已知的是，5-氨基乙酰丙酸在微生物發(fā)酵領(lǐng)域中，可用于VB12和血紅素酶的制備、 微生物培養(yǎng)、嚇啉的制備等；在動物治療領(lǐng)域中，可用于感染性疾病的治療(參見非專利文 獻1)、殺菌、對由嗜血桿菌引發(fā)的疾病的診斷、作為衍生物的原材料、脫毛、風濕病治療(參 見非專利文獻2)、癌癥治療(參見非專利文獻3)、血栓治療(參見非專利文獻4)、癌癥手術(shù) 中的診斷(參見非專利文獻5)、動物細胞培養(yǎng)、UV切除、血紅素代謝研究、毛發(fā)護理、對由重 金屬中毒引發(fā)的卟啉癥的診斷、貧血癥的預防等；在植物領(lǐng)域中，可用作農(nóng)藥等。另一方面，在5-氨基乙酰丙酸中，只有其鹽酸鹽的制備方法是已知的，人們已經(jīng) 報道了使用馬尿酸(參見專利文獻1)、琥珀酸單酯酰氯(參見專利文獻2)、糠胺(參見專 利文獻3)、羥甲基糠醛(參見專利文獻4)、氧代戊酸甲酯(參見專利文獻5)、或琥珀酸酐 (參見專利文獻6)作為原料的方法。然而，由于5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽含有鹽酸，所以必須考慮在生產(chǎn)過程以及配制 和分裝過程中，由蒸發(fā)的氯化氫對裝置造成的腐蝕以及引起的刺激，因此最好是采取對策 來防止出現(xiàn)上述這些情況。此外，在將5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽口服給藥或應用于人的皮膚時，舌頭或皮膚會 感受到灼熱的刺激。因此，作為在醫(yī)藥領(lǐng)域中使用的5-氨基乙酰丙酸，人們關(guān)注的是刺激 性比5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽更小的5-氨基乙酰丙酸鹽。另外，由于5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽具有在130_156°C時部分分解、并且在156°C時 完全分解的性質(zhì)，所以存在著難以承受高溫加熱滅菌處理的問題。放射線照射殺菌方法已知是一種解決該問題的方法(參見專利文獻7)，但該方法 需要放射線照射裝置。因此，為了通過常規(guī)的、便利的加熱滅菌法來殺菌，就有必要改善5-氨基乙酰丙 酸的耐熱性。另外，盡管5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽被用于植物領(lǐng)域(參見專利文獻8)中，但當其 與植物常用的殺菌劑成分例如硝酸銀等混合使用時，在某些情況下，由5-氨基乙酰丙酸鹽 酸鹽與硝酸銀反應而產(chǎn)生氯化銀沉淀物，由于存在著噴霧器的噴嘴被堵塞而不能噴藥的可 能性，所以在操作上要十分小心。此外，在將5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的水溶液直接施加到 水果上的情況中，當存在氯離子時，水果的顏色有時變得不夠鮮艷。
另外，盡管人們已經(jīng)提出了含有5-氨基乙酰丙酸離子和硝酸根離子的水溶液，但 目前還沒有分離出5-氨基乙酰丙酸硝酸鹽(參見非專利文獻6)。專利文獻1 JP-A-48-92328專利文獻2 JP-A-62-111954專利文獻3 JP-A-2-76841專利文獻4 JP-A-6-172281專利文獻5 JP-A-7-188133專利文獻6 JP-A-9-316041專利文獻7 JP-T-2001-514243專利文獻8 JP-A-4-338305非專利文獻1 =Peter W.等人，J. Am. Acad. Dermatol.，31，678-680 (1994)非專利文獻2 :Kenneth Τ.，美國專利 5，368，841 (1994)非專利文獻3 =Hillemanns P.等人，Int. J. Cancer, 85,649-653 (2000)非專利文獻4 山田一郎等人，日本形成外科學會要旨集(1988)# # ^lJ ^； K 5 =Kamasaki N.等人，Journal of Japan Society for LaserMedicine,22,255-262(2001)非專禾O文獻 6 :Baxter C. S.等人，Toxicology And AppliedPharmacology,￡7, 477-482(1979)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題在這種情況下，本發(fā)明提供一種新型的5-氨基乙酰丙酸鹽，其具有低刺激性或 者能夠承受高溫加熱滅菌處理；制備該鹽的方法；使用含有該鹽的醫(yī)藥組合物；以及含有 該鹽的植物活化劑組合物。解決問題的方法通過考慮上述實際情況，本發(fā)明人進行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了一種滿足上述 要求的5-氨基乙酰丙酸鹽，該鹽可通過如下方法得到洗脫被吸附在陽離子交換樹脂上的 5-氨基乙酰丙酸，并將洗脫液與磷酸、硝酸或磺酸混合。即，本發(fā)明涉及下述(1)至(23)(1) 一種屬于氨基乙酰丙酸鹽類的5-氨基乙酰丙酸鹽，其中該鹽是選自磷酸鹽、 硝酸鹽和磺酸鹽中的至少一種。(2)根據(jù)上述⑴所述的5-氨基乙酰丙酸鹽，該鹽是由下式⑴表示的氨基乙酰 丙酸磷酸鹽H0C0CH2CH2C0CH2NH2 · HOP(O) (OR1) n(OH) 2_n(I)其中，R1表示氫原子、具有1-18個碳原子的烷基、具有2-18個碳原子的鏈烯基、具 有7-26個碳原子的芳烷基或苯基；η為0-2的整數(shù)；且其中當η為2時，兩個R1是相同的 或不同的。(3)根據(jù)上述(2)所述的5-氨基乙酰丙酸鹽，其中R1為氫原子、甲基、乙基、正丁 基、十六烷基、2-乙基己基、油烯基、芐基或苯基。
(4)根據(jù)上述(2)或(3)所述的5-氨基乙酰丙酸鹽，該鹽是水溶液形式的。(5)根據(jù)上述(2)或(3)所述的5-氨基乙酰丙酸鹽，該鹽是固體形式的。(6)根據(jù)上述(1)所述的5-氨基乙酰丙酸鹽，該鹽是5-氨基乙酰丙酸硝酸鹽。(7)根據(jù)上述(6)所述的5-氨基乙酰丙酸鹽，該鹽是固體。(8)根據(jù)上述(1)所述的5-氨基乙酰丙酸鹽，該鹽是由下式(II)表示的5-氨基 乙酰丙酸磺酸鹽H0C0CH2CH2C0CH2NH2 · HOSO2R2(II)其中，R2表示被低級烷基取代的苯基。(9)根據(jù)上述⑶所述的5-氨基乙酰丙酸鹽，其中被取代的苯基是4-甲基苯基、 2，4_ 二甲基苯基或2，5_ 二甲基苯基。(10)根據(jù)上述⑶或(9)所述的5-氨基乙酰丙酸鹽，該鹽是水溶液形式的。(11)根據(jù)上述⑶或(9)所述的5-氨基乙酰丙酸鹽，該鹽是固體形式的。(12) 一種制備根據(jù)上述(2)至(5)中的任意一項所述的5-氨基乙酰丙酸鹽的方 法，該方法包括洗脫被吸附在陽離子交換樹脂上的5-氨基乙酰丙酸，并將洗脫液與磷酸類 物質(zhì)混合。(13)根據(jù)上述(12)所述的方法，其中所述的5-氨基乙酰丙酸是用氨水洗脫的。(14) 一種制備根據(jù)上述(6)或(7)所述的5-氨基乙酰丙酸鹽的方法，該方法包括 洗脫被吸附在陽離子交換樹脂上的5-氨基乙酰丙酸，并將洗脫液與硝酸混合。(15)根據(jù)上述(14)所述的方法，其中所述的5-氨基乙酰丙酸是用氨水洗脫的。(16) 一種制備根據(jù)上述⑶或(9)的5-氨基乙酰丙酸磺酸鹽的方法，該方法包括 洗脫被吸附在陽離子交換樹脂上的5-氨基乙酰丙酸，并將洗脫液與磺酸類物質(zhì)混合。(17)根據(jù)上述(16)所述的方法，其中所述的5-氨基乙酰丙酸是用氨水洗脫的。(18) 一種用于光動力治療或光動力診斷的組合物，該組合物含有根據(jù)上述(1)至 (11)中的任意一項所述的5-氨基乙酰丙酸鹽。(19) 一種包含根據(jù)上述(1)至(11)中的任意一項所述的5-氨基乙酰丙酸鹽的植 物活化劑組合物。(20)根據(jù)上述(1)至(11)中的任意一項所述的5-氨基乙酰丙酸鹽在制備光動力 治療劑或光動力診斷試劑中的應用。(21)根據(jù)上述(1)至(11)中的任意一項所述的5-氨基乙酰丙酸鹽作為植物活化 劑的應用。本發(fā)明的效果本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽是一種易于操作的物質(zhì)，這是因為它不會發(fā)出難聞 的氣味或刺激性的氣味。而且，該鹽對皮膚和舌頭表現(xiàn)出低刺激性，并且對皮膚等具有優(yōu) 異的滲透性，因此，含有該鹽的組合物可用作光動力治療或光動力診斷所用的試劑。而且， 與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽相比而言，所述的5-氨基乙酰丙酸鹽具有高的分解溫度和優(yōu)異 的耐熱性。根據(jù)本發(fā)明的制備方法，可以方便有效地制成本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽。另 外，由于本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽在形成水溶液時具有低的氯離子濃度，因此在施用于 植物時幾乎不會發(fā)生由氯造成的損害。


圖1是示出5-氨基乙酰丙酸鹽水溶液的濃度和pH值之間的關(guān)系的圖。圖2是透析單元的示意圖。圖3是示出5-氨基乙酰丙酸的磷酸鹽和鹽酸鹽的豬皮膚滲透性試驗結(jié)果的圖。圖4是示出5-氨基乙酰丙酸的磷酸鹽和鹽酸鹽的洋蔥表皮滲透性試驗結(jié)果的圖。實施本發(fā)明的最佳方式在上述式(I)中，由R1表示的具有1-18個碳原子的烷基可以是直鏈的、支鏈的 或環(huán)狀的。直鏈或支鏈烷基包括例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁 基、正戊基、異戊基、新戊基、叔戊基、2-甲基丁基、正己基、異己基、3-甲基戊基、乙基丁基、 正庚基、2-甲基己基、正辛基、異辛基、叔辛基、2-乙基己基、3-甲基庚基、正壬基、異壬基、
1-甲基辛基、乙基庚基、正癸基、1-甲基壬基、正i^一烷基、1，1-二甲基壬基、正十二烷基、 正十三烷基、正十四烷基、正十五烷基、正十六烷基、正十七烷基、正十八烷基等。環(huán)烷基或 含有環(huán)狀基團的烷基包括例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、2-環(huán)丙 基乙基、2-環(huán)丁基乙基、2-環(huán)戊基乙基、環(huán)己基甲基、2-環(huán)己基乙基、環(huán)庚基甲基、2-環(huán)辛基 乙基、3-甲基環(huán)己基、4-甲基環(huán)己基、4-乙基環(huán)己基、2-甲基環(huán)辛基、3-(3_甲基環(huán)己基)丙 基、2-(4_甲基環(huán)己基)乙基、2-(4_乙基環(huán)己基)乙基、2-(2_甲基環(huán)辛基)乙基等。作為 上述的具有1-18個碳原子的烷基，優(yōu)選具有1-16個碳原子的烷基，特別優(yōu)選甲基、乙基、正 丁基、正十六烷基或2-乙基己基。具有2-18個碳原子的鏈烯基包括例如乙烯基、烯丙基、異丙烯基、2- 丁烯基、
2-甲基烯丙基、1，1-二甲基烯丙基、3-甲基-2-丁烯基、3-甲基-3- 丁烯基、4-戊烯基、己 烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、環(huán)丙烯基、環(huán)丁烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)庚烯基、環(huán)辛烯 基、4-甲基環(huán)己烯基、4-乙基環(huán)己烯基、2-環(huán)戊烯基乙基、環(huán)己烯基甲基、環(huán)庚烯基甲基、 2_環(huán)丁烯基乙基、2-環(huán)辛烯基乙基、3-(4_甲基環(huán)己烯基)丙基、5-(4_乙基環(huán)己烯基)戊 基、油烯基、11-十八烯基(vaccenyl)、9，12-十八二烯基(Iinoleyl)、9，12，15-十八烯基 (Iinolenyl)等，優(yōu)選油烯基。具有7-26個碳原子的芳烷基優(yōu)選為由具有1-6個碳原子的烷基和具有6_20個 碳原子的芳基所構(gòu)成的基團。具有1-6個碳原子的烷基包括例如甲基、乙基、正丙基、異丙 基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、正己基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)己基等，具有6-20個碳原 子的芳基包括例如苯基、萘基等。在具有7-26個碳原子的芳烷基中，優(yōu)選芐基或苯乙基， 特別優(yōu)選芐基。芳烷基中的芳基可以被1-3個取代基取代，所述取代基例如上述的具有 1-6個碳原子的烷基；具有1-6個碳原子的烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、正丁氧 基、異丁氧基和叔丁氧基；羥基；氨基；硝基；氰基；商素，例如氟、氯、溴和碘；羧基；等等。在式(II)中，取代由R2表示的苯基的低級烷基是具有1-6個碳原子的烷基。所 述的低級烷基可以是直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的。直鏈或支鏈烷基包括例如甲基、乙基、正丙 基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基、叔戊基、2-甲基丁基、正己基、 異己基、3-甲基戊基、乙基丁基等，優(yōu)選甲基、乙基或正丙基，特別優(yōu)選甲基。含有環(huán)狀鏈的 烷基包括例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、2-環(huán)丙基乙基、2-環(huán)丁基乙基等。對低級 烷基的取代位置和取代基的數(shù)量沒有特別限制，但低級烷基的數(shù)量優(yōu)選為1-3，更優(yōu)選為1 或2。
被低級烷基取代的苯基包括例如被具有1-6個碳原子的烷基取代的苯基，如 2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、2，3_ 二甲基苯基、2，4_ 二甲基苯基、2，5_ 二甲基苯 基、2，6-二甲基苯基、3，4-二甲基苯基、3，5-二甲基苯基、2，4，6-三甲基苯基、3，4，5-三甲 基苯基、2-乙基苯基、叔丁基苯基、戊基苯基、新戊基苯基和己基苯基，特別優(yōu)選4-甲基苯 基、2，4_ 二甲基苯基或2，5-二甲基苯基。本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽可以是固體或溶液。固體是指晶體，但也可以是水合 物。溶液是指該鹽溶解或分散在包括水在內(nèi)的溶劑中的狀態(tài)，溶液的PH值可用pH調(diào)節(jié)劑 等調(diào)節(jié)。此外，可以將包括水在內(nèi)的溶劑中的兩種或多種混合使用。PH調(diào)節(jié)劑包括例如使 用磷酸、硼酸、鄰苯二甲酸、檸檬酸、琥珀酸、Tris、乙酸、乳酸、酒石酸、鄰苯二甲酸、馬來酸、 及其鹽的緩沖液、或Good’ s緩沖液。優(yōu)選以水溶液作為5-氨基乙酰丙酸鹽的溶液形式。5-氨基乙酰丙酸鹽在水溶液 中的濃度優(yōu)選為0. 01重量ppm至10重量％，更優(yōu)選0. 1重量ppm至5重量％，最優(yōu)選1重 量ppm至1重量％。此外，水溶液的pH優(yōu)選3-7，更優(yōu)選3. 5-7，最優(yōu)選4-7。另外，所述的 水溶液中還可以含有除了本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽以外的鹽，在此情況下，氯離子的濃 度優(yōu)選為50mol%或更低，更優(yōu)選為10mol%或更低，最優(yōu)選為3mol%或更低。就此而論，術(shù) 語“不含氯離子”是指氯離子的濃度基本上為Omol %，S卩，優(yōu)選的是，該濃度等于或小于例如 用離子色譜法進行測量時的檢測極限(0. Ippm)。本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽可以通過如下方法來制備用含有離子的溶液洗 脫被吸附在陽離子交換樹脂上的5-氨基乙酰丙酸，并將洗脫液與磷酸、硝酸或磺酸混合。 另外，可以通過將不良溶劑加入到上述5-氨基乙酰丙酸鹽的混合液中使之結(jié)晶，從而獲 得固態(tài)的5-氨基乙酰丙酸鹽。對被吸附在陽離子交換樹脂上的5-氨基乙酰丙酸沒有 特別限制，對它的純度等也沒有特別限制。即，可以使用根據(jù)專利文獻JP-A-48-92328、 JP-A-62-111954、JP-A-2-76841、JP-A-6-172281、JP-A-7-188133 等、以及 JP-A-11-42083 中公開的方法制備的那些、純化前的化學反應溶液和發(fā)酵液、以及市售商品。就此而論，優(yōu) 選使用5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽。所述的陽離子交換樹脂可以是強酸性陽離子交換樹脂，也可以是弱酸性陽離子交 換樹脂。另外，螯合樹脂也適于使用。其中，優(yōu)選強酸性陽離子交換樹脂。作為強酸性陽離 子交換樹脂的種類，優(yōu)選那些與磺酸基鍵合的聚苯乙烯類樹脂。通過如下方法將5-氨基乙酰丙酸吸附在陽離子交換樹脂上將5-氨基乙酰丙酸 溶解在合適的溶劑中而制成溶液，使該溶液從陽離子交換樹脂中流過。對所述溶劑沒有特 別限制，只要其能夠溶解5-氨基乙酰丙酸即可，溶劑的實例包括水；二甲基亞砜；醇，例如 甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇和異丁醇；酰胺，例如N，N-二甲基甲酰胺和N，N-二甲基乙 酰胺；吡啶；等等。優(yōu)選水、二甲基亞砜、甲醇或乙醇，特別優(yōu)選的是水、甲醇或乙醇。此外， 可以將兩種或多種溶劑混合使用。另外，在使用純化前的化學反應溶液或發(fā)酵液時，可以除 去反應溶劑或者用合適的溶劑進行稀釋。就此而論，上述溶劑和純化前的化學反應溶液或 發(fā)酵液的PH都可以使用上述的pH調(diào)節(jié)劑來調(diào)節(jié)。雖然對洗提液中所用的含有離子的水溶液沒有特別限制，但優(yōu)選的是磷酸類物 質(zhì)、硝酸、磺酸類物質(zhì)、堿金屬或堿土金屬的氫氧化物或碳酸鹽、氨、胺以及含有氨基的化合 物溶解在水中而形成的溶液，更優(yōu)選的是氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鎂、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化銫、氫氧化鋇、碳酸銨、碳酸氫銨、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸鈉鉀、碳酸氫 鉀、氨、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、乙基胺、二乙基胺或三乙基胺溶解在水中而形成的溶 液，特別優(yōu)選的是氨溶解在水中而形成的溶液。這些水溶液可以兩種或多種結(jié)合使用。氨 水的濃度優(yōu)選為0. OlN至10N，更優(yōu)選為0. IN至3N。作為與5-氨基乙酰丙酸洗脫液混合的磷酸類物質(zhì)，可使用由式(III)表示的化合 物HOP(O) (OR1)n(OH)2_n(III)其中R1和η如上所述。該磷酸類物質(zhì)包括例如磷酸；磷酸單酯，如磷酸甲酯、磷酸乙酯、磷酸正丁酯、磷 酸2-乙基己酯、磷酸十六烷基酯、磷酸芐酯、磷酸油烯基酯和磷酸苯酯；以及磷酸二酯，如 磷酸二甲酯、磷酸二乙酯、磷酸二正丁酯、磷酸二(2-乙基己基)酯、磷酸二(十六烷基) 酯、磷酸二芐酯、磷酸二油烯基酯和磷酸二苯酯。特別優(yōu)選磷酸甲酯、磷酸乙酯、磷酸油烯基 酯、磷酸苯酯、磷酸二甲酯、磷酸二乙酯、磷酸二正丁酯、磷酸二(2-乙基己基)酯、磷酸二 (十六烷基)酯、磷酸二芐酯、磷酸二油烯基酯或磷酸二苯酯。另外，次磷酸或亞磷酸也適于 使用。磷酸類物質(zhì)可以是其水合物或鹽，溶解或分散在適當?shù)娜軇┲械哪切┮策m于使 用。基于通過由吸附的5-氨基乙酰丙酸的量所推定的5-氨基乙酰丙酸的洗脫量，磷酸類物 質(zhì)的混合量優(yōu)選為1-5000倍摩爾量，更優(yōu)選為1-500倍摩爾量，最優(yōu)選為1-50倍摩爾量。 就此而論，由吸附的5-氨基乙酰丙酸的量所推定的5-氨基乙酰丙酸的洗脫量隨著陽離子 交換樹脂和洗脫液的種類、以及洗脫液的流量而改變，但通常為5-氨基乙酰丙酸的吸附量 的 90-100% ο與5-氨基乙酰丙酸洗脫液混合的硝酸可以是其鹽，溶解在適當?shù)娜軇┲械哪切?也適于使用。硝酸的混合量與上文所述的磷酸類物質(zhì)的混合量相同。與5-氨基乙酰丙酸洗脫液混合的磺酸類物質(zhì)包括例如對甲苯磺酸、2，4_ 二甲基 苯磺酸、2，5-二甲基苯磺酸、3，5-二甲基苯磺酸、2，4，6_三甲基苯磺酸等，特別優(yōu)選對甲苯 磺酸、2，4_ 二甲基苯磺酸或2，5_ 二甲基苯磺酸。該磺酸類物質(zhì)可以是其水合物或鹽，溶解 或分散在適當?shù)娜軇┲械哪切┮策m于使用。該磺酸類物質(zhì)的混合量與上文所述的磷酸類物 質(zhì)的混合量相同。溶劑包括水；二甲基亞砜；醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇和異丁醇；酰 胺，例如N，N-二甲基甲酰胺和N，N-二甲基乙酰胺；吡啶等。優(yōu)選水、二甲基亞砜、甲醇或 乙醇，特別優(yōu)選水、甲醇或乙醇。同樣，可將兩種或多種溶劑混合使用。對上文所述的不良溶劑沒有特別限制，只要能在其中析出固體即可，所述溶劑的 實例包括醇，如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇和異丁醇；醚，如乙醚、二異丙基醚、二噁 烷、四氫呋喃和二甲氧基乙烷；酯，如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯和Y _ 丁 內(nèi)酯；酮，如丙酮和甲乙酮；腈，如乙腈和苯甲腈等，優(yōu)選乙酸甲酯、乙酸乙酯、Y-丁內(nèi)酯、 丙酮或乙腈。特別優(yōu)選乙酸甲酯、Y-丁內(nèi)酯、丙酮或乙腈。同樣，可將兩種或多種溶劑混 合使用。用含有離子的水溶液進行洗脫的洗脫溫度，以及磷酸類物質(zhì)、硝酸或磺酸類物質(zhì) 與洗脫液混合的混合溫度都優(yōu)選為_20°C至60°C，更優(yōu)選為-10°C至30°C，在這樣的條件下，洗脫液以及磷酸、硝酸或磺酸不會變成固體?？梢杂蛇@樣的5-氨基乙酰丙酸來制備本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽，在所述的 5-氨基乙酰丙酸中，氨基是用可水解的保護基(例如?；?來保護的，或者氨基上連接有能 夠形成1，3-二氧代-1，3-二氫異吲哚-2-基這種類型的分子骨架的保護基。另外，也可通 過不同于本發(fā)明的制備方法來制備本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽，S卩，使用所需的磷酸、硝 酸或磺酸使2-苯基-4- ( β -烷氧基羰基丙?；?噁唑啉-5-酮發(fā)生水解的方法，或者使不 同于磷酸鹽、硝酸鹽和磺酸鹽的鹽(例如5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽)在溶劑中與所需的磷酸 產(chǎn)生接觸的方法?？墒褂蒙衔淖鳛榱姿崴枋龅氖?III)所表示的化合物，并使用在上文 中作為硝酸、磺酸類物質(zhì)和反應溶劑描述的那些物質(zhì)。如下文中的實施例所示，與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽相比而言，本發(fā)明的5-氨基乙 酰丙酸鹽不會發(fā)出難聞的氣味，特別是，5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽對皮膚和舌頭的刺激性都 小，而且沒有發(fā)現(xiàn)它具有誘變性。另外，本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽對動物皮膚和植物表 皮都具有優(yōu)異的滲透性。因此，與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的情況相似，本發(fā)明的5-氨基乙 酰丙酸鹽(優(yōu)選5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽)可用作對動物(包括人)進行光動力治療或光 動力診斷所用的試劑。作為用于光動力治療或光動力診斷的試劑，可舉例為用于對癌癥、感 染性疾病、風濕病、血栓、丘疹等進行光動力治療或診斷的試劑。可以將本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽以公知的條件用于光動力治療或診斷 中，更具體地說，可根據(jù)專利文獻 JP-T-2001-501970(W098/30242)、JP-T-4-500770 (WO 91/01727)、JP-T-2005-501050 (W02003/011265)、JP-T-2004-506005 (W02002/013788)、 JP-T-2001-518498 (WO 99/17764)、和 JP-T-8-507755 (WO 94/17797)中所公開的處方和方 法來使用。具體地說，通過將有效量的本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽對動物(包括人類)給 藥，并進行光照射，可以對疾病進行光動力治療。此外，通過檢測病變部位的熒光可以對疾 病進行光動力診斷。本發(fā)明的用于光動力治療或光動力診斷的組合物(其含有本發(fā)明的5-氨基乙酰 丙酸鹽)，可以被制成諸如皮膚外用制劑、注射劑、口服制劑和栓劑之類的劑形。在制成這些 劑形時，可以使用可藥用的載體。作為該載體，可使用水、粘結(jié)劑、崩解劑、增溶劑、潤滑劑、 填充劑、填料等。給藥劑量隨著年齡、體重、癥狀、療效、給藥方法、治療時間等而改變，但通常，給藥 量為成人每人每次每公斤體重IOmg至10g，更優(yōu)選為IOOmg至lg，一天給藥一次或多次。另外，當把本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽用于例如植物應用中時，還可以加入 通常使用的肥料組分等。作為肥料組分，可舉例為專利文獻JP-A_4-338305(美國專利 5，298，482、EP-A-0514776)中公開的物質(zhì)。本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽也可用作植物活化劑。在用作植物活化劑時，可以以 公知的條件使用該鹽，更具體地說，可使用專利文獻JP-A-4-338305(美國專利5，298，482、 EP-A-0514776)中公開的方法將該鹽用于植物。更具體地說，作為植物活化劑，可舉例為莖葉處理劑、土壤處理劑等。另外，該試劑 可在種植植物或插枝之前被吸收到植物中，或者在水培時加入到水中。在本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽用作莖葉處理劑時，該處理劑中含有的5-氨基乙酰丙酸鹽的濃度優(yōu)選為1-1，OOOppm，特別是10-500ppm，并且以每10公畝10-100升、特別 是50-300升的量使用該處理劑。在本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽用作土壤處理劑時，優(yōu)選以每10公畝1-1，000g、特 別是10-500g的量使用5-氨基乙酰丙酸鹽。在種植前使用本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽作為莖葉處理劑時，該處理劑中含有 的5-氨基乙酰丙酸鹽的濃度優(yōu)選為1-1，OOOppm，特別是10-500ppm，并且以每10公畝 10-100升、特別是50-300升的量使用該處理劑。就此而論，水培時也優(yōu)選使用幾乎與此相
等的量。作為被處理的植物，可舉例為谷物、蔬菜、果樹、花和觀賞植物、樹木、豆類、馬鈴 薯、威爾士洋蔥、牧草等。實例以下基于實例對本發(fā)明進行更為詳細地描述，但是本發(fā)明并不局限于此。實施例15_氨基乙酰丙酸磷酸鹽的制備將180ml的強酸性離子交換樹脂(AMBERLITE IR 120B Na，由日本Organo株式會 社生產(chǎn))裝入柱中。所用的離子交換樹脂是經(jīng)過了鹽酸處理而從鈉離子型轉(zhuǎn)化成氫離子 型的離子交換樹脂。然后，將20.00g(119mmOl)的5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽溶解在1000ml 的離子交換水中，并將該溶液過柱，然后將1000ml的離子交換水過柱。接著，將IN的氨水 緩慢過柱，收集到346ml黃色的洗脫液。將收集到的洗脫液加入16ml、85%的磷酸(H3PO4, 238mmol)中，并使用蒸發(fā)器濃縮。向濃縮液中加入400ml的丙酮，并用攪拌器劇烈攪拌，然 后在4°C下靜置16小時。吸濾回收所析出的固體，并用500ml的丙酮洗滌。將所得固體減 壓干燥12小時，得到23.04g(101mmOl)的目標物質(zhì)。它的物理性能數(shù)據(jù)如下所示。熔點108-109°C1H-Wr(D2CMOOMHz) δ ppm :2· 67(t，2H，CH2), 2. 86(t，2H，CH2), 4. 08(s，2H，CH2)13C-NMR(D20,100MHz) δ ppm 30 (CH2)，37 (CH2)，50 (CH2)，180 (CO)，207 (C00)C5H9NO3 · H3PO4的元素分析數(shù)據(jù)計算值=C26. 21% ；H 5. 28% ；N 6. 11%實測值C25. 6% ;H 5. 2% ;N 6.由離子色譜分析得到的P043_含量計算值41.45%實測值43%離子色譜分析條件分離柱由日本Dionex株式會社制造的IonPaCAS12A ；洗提 液含有 Na2CO3 和 NaHCO3(Na2CC)3 3. 0mmol/l, NaHCO3 0. 5mmol/l)的水溶液，流速1. 5ml/ 分鐘，進樣量25μ 1，柱溫35°C，檢測器電導檢測器。實施例25-氨基乙酰丙酸(磷酸二正丁酯)鹽的制備將180ml的強酸性離子交換樹脂(AMBERLITE IR 120B Na,由日本Organo株式會 社生產(chǎn))裝入柱中。所用的離子交換樹脂是經(jīng)過了鹽酸處理而從鈉離子型轉(zhuǎn)化成氫離子型 的離子交換樹脂。然后，將20. 00g(119mmol)的5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽溶解在1000ml的離子交換水中，并將該溶液過柱，然后將IOOOml的離子交換水過柱。接著，將IN的氨水緩 慢過柱，收集到321ml黃色的洗脫液。將收集到的洗脫液加入50.00g(238mmol)的磷酸二 正丁酯中，并使用蒸發(fā)器濃縮。向濃縮液中加入400ml的丙酮，并用攪拌器劇烈攪拌，然后 將混合物在_25°C下靜置16小時。吸濾回收所析出的固體。將所得固體減壓干燥12小時， 得到14.67g(43mmol)的目標物質(zhì)。它的物理性能數(shù)據(jù)如下所示。1H-WR (D20,400MHz) δ ppm :0· 75 (6Η, CH3)，1· 23 (4Η, CH2)，1· 41 (4Η, CH2)，2. 46 (2Η, CH2)，2. 59 (2Η, CH2)，3. 66 (4Η, CH2)，3. 80 (2Η, CH2)13C-NMR (D2O, 100MHz) δ ppm 14 (CH3)，20 (CH2)，29 (CH2)，34. 2 (CH2)，34. 3 (CH2)， 36 (CH2)，67 (CH2O)，176 (COO)，204 (CO)實施例35-氨基乙酰丙酸磷酸鹽的氣味測定5個受試者直接聞實施例1制備的5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽的水溶液(柱洗脫液和 磷酸的混合液)及其固體的氣味，并根據(jù)下述標準來評價它們的氣味。結(jié)果示于表1中。評價標準0:沒有氣味。1:有氣味但不難聞。2:難聞的氣味。比較例1除了使用5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的水溶液及其固體以外，以與實施例3相同的方 式來評價氣味。就此而論，5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的水溶液是使用5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽 固體、鹽酸和離子交換水制備的，其中，使得5-氨基乙酰丙酸和氯離子的摩爾濃度分別與 實施例1中的5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽水溶液中的5-氨基乙酰丙酸和磷酸根離子的摩爾濃 度相同。結(jié)果示于表1中。表1 實施例4除了通過將0. 5g的5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽溶解在Iml水中而制成水溶液以外， 以與實施例3相同的方式來評價氣味。結(jié)果示于表2中。比較例2除了通過將0. 5g的5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽溶解在Iml水中而制成水溶液以外， 以與實施例3相同的方式來評價氣味。結(jié)果示于表2中。表2
基于表1和2，與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的水溶液相比，沒有聞到5-氨基乙酰丙 酸磷酸鹽的水溶液中有任何氣味。由于5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽水溶液的制備過程簡化了 5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽水溶液的制備過程中所必需的防臭措施和防腐蝕性氣體的措施，因 此前者的操作更為簡便。另外，與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的固體相比，5-氨基乙酰丙酸磷 酸鹽的固體也沒有發(fā)出任何氣味，因此諸如稱重和分裝之類的操作更為便利。實施例55-氨基乙酰丙酸磷酸鹽水溶液的酸度測量分別制備濃度為ImM至IOOOmM的5_氨基乙酰丙酸磷酸鹽的水溶液和5_氨基乙 酰丙酸鹽酸鹽的水溶液，在25°C下使用pH計測量酸度。結(jié)果示于圖1。從圖1中明顯可以 看出，在同樣的濃度條件下，5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽的水溶液的酸度低于5-氨基乙酰丙酸 鹽酸鹽的水溶液的酸度。實施例65-氨基乙酰丙酸磷酸鹽的刺激性試驗5個受試者分別將5mg的5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽固體直接放在舌頭上并根據(jù)下述 標準，對實施例1中得到的5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽的味道進行了評價。結(jié)果示于表3中。評價標準0 沒有感覺到刺激性。1 有刺激性但刺激性較弱。2:有強烈的刺激性。比較例3除了使用5mg的5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽固體以外，以與實施例6相同的方式來評 價味覺。結(jié)果示于表3中。表3 如表3所示，與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽相比，沒有感覺到5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽 具有強烈的刺激性。實施例7微生物(細菌)的誘變性試驗(回復突變試驗)根據(jù)“微生物&用^ 3変異原性試験O基準”(1988年勞動省告示第77號)(1997 年勞動省告示第67號頒布的部分修訂版)和“新規(guī)化學物質(zhì)等仁係石試験O方法仁ο^ T”(2003年11月21日頒布的薬食発1121002號、2003. 11. 13製局第2號、以及環(huán)保 企発第031121002號)中的「細菌&用^ 3復帰突然変異試験」進行試驗。將5% (重 量/體積)的5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽溶解在蒸餾水(由和光純藥工業(yè)株式會社生產(chǎn))中 制成溶液，向0. Iml的該溶液中加入0. 5ml的0. IM磷酸鈉緩沖液(pH 7. 4)(在代謝活性 試驗中加入0. 5ml的S9mix)，再加入0. Iml的各個試驗菌株的懸浮液(使用組氨酸缺陷 型的 Salmonellatyphimurium TA 100，TA 98，TA 1535 和 TA 1537 以及色氨酸缺陷型的 Escherichia coli WP2 uvrA(由日本生物分析研究中心提供)共5株細菌)，然后在37°C 下預培養(yǎng)20分鐘，同時進行振蕩。培養(yǎng)結(jié)束后，向培養(yǎng)液中加入2. Oml上層瓊脂(提前將 其在45°C下保溫)，并在葡萄糖瓊脂平板基本培養(yǎng)基上鋪層。在此情況下，將每種劑量的樣 品設(shè)置2塊平板。但是，將溶劑對照樣品設(shè)置3塊平板(陰性對照)。在37°C下培養(yǎng)48小 時，然后在立體顯微鏡下觀察每個試驗菌株的生長是否受到抑制，并計數(shù)出現(xiàn)回復突變的 菌落的數(shù)量。在測量中，使用自動菌落分析儀(CA-11:由System Science株式會社制造) 在86mm的直徑(內(nèi)徑84mm)的平板上對大約80mm的直徑內(nèi)的面積進行計數(shù)測量，并使用個 人計算機通過進行面積校正和計數(shù)損失校正而計算出上述菌落數(shù)。然而，當菌落數(shù)為1500 個或更多時，自動菌落分析儀的可靠性會降低，因此，在立體顯微鏡下對平板上的5個點進 行人工測量，從而對平均值進行面積校正。以如下方式進行劑量設(shè)定試驗使用5，000 μ g/ 平板的劑量作為最大劑量(這是試驗指南中規(guī)定的最大劑量)的樣品，以公比4對其進行 稀釋得到7種劑量的樣品，對這7種樣品進行劑量設(shè)定試驗。結(jié)果如下與溶劑對照樣品比 較，不管劑量設(shè)定試驗樣品中是否存在S9mix，在每個菌株中都沒有發(fā)現(xiàn)回復突變菌落數(shù)增 加2倍或更多的情況；沒有發(fā)現(xiàn)菌株的生長受到5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽這種被測物抑制的 情況；也沒有發(fā)現(xiàn)被測物中出現(xiàn)沉淀物的情況。使用5，OOOyg/平板的劑量作為最大劑量(這是上述指南中規(guī)定的最大劑量)的 樣品，以公比2對其進行稀釋得到5種劑量的樣品，也進行本試驗。結(jié)果如下與溶劑對照 樣品比較，不管劑量設(shè)定試驗樣品是否具有代謝活性，在每個菌株中都沒有發(fā)現(xiàn)回復突變 菌落數(shù)增加2倍或更多的情況(表4)。由此證實5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽不具有突變誘發(fā) 能力。
實施例8急性口服毒性試驗: 該試驗根據(jù)OE⑶指南No. 423 “急性經(jīng)口毒性-急性毒性等級法”(2001年12月 17日采用)進行。用5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽以300mg/kg體重的劑量、對一組3只禁食的 雌性大鼠(Sprague-Dawley⑶物種)進行處理。另外，以2000mg/kg體重的劑量對其它兩 組或多組禁食的雌性大鼠進行處理。給藥后進行2周的連續(xù)觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有的大鼠 都沒有死亡(表5)，沒有全身中毒的癥狀，整體而言，所有大鼠的體重都有所增加(表6)， 據(jù)推測，急性口服50%致死量(LD50)大于2，500mg/kg體重。表 5 表6 實施例9急性皮膚刺激性試驗根據(jù)OECD指南No. 404“急性皮膚刺激性/腐蝕性試驗”(1992年7月17日采用) 和EU委員會指令92/69/EEC B4法急性毒性(皮膚刺激性)的試驗方法進行本試驗。將 0. 5g的5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽溶解在0. 5ml蒸餾水中制成溶液(pH 3. 1)，使用三只新西 蘭白兔(雄性)進行試驗，將所述溶液在每只動物皮膚上的2. 5cm的、去毛但無傷的方形區(qū) 域上涂4小時，然后在1小時、24小時、48小時和72小時的時候進行觀察。結(jié)果在24小時 內(nèi)觀察到很輕微的紅斑，但48小時后達到正常(表7和8)。另外，將溶液(將0. 5g的5-氨 基乙酰丙酸磷酸鹽溶解在0. 5ml蒸餾水中而制成)(pH 3. 1)在一只新西蘭白兔(雄性)皮 膚上的2. 5cm的、去毛但無傷的方形區(qū)域上涂3分鐘或1小時，然后在1小時、24小時、48 小時和72小時的時候進行觀察，在這種情況中也沒有觀察到皮膚刺激性(表7和8)。因 為P. I. I.值(原發(fā)性皮膚刺激指數(shù))為0. 5，由此證實該鹽在現(xiàn)行的聯(lián)合國推薦的GHS中 的刺激性分類之外，不屬于刺激性物質(zhì)。在這一方面，將0. 5g的5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽溶 解在0. 5ml蒸餾水中，制成對比溶液，并根據(jù)OECD指南來判斷腐蝕性，由于該溶液的pH為 2. 0或更低，所以沒有進行試驗。表 7 表8 實施例10動物表皮滲透性試驗本試驗使用透析單元(有效面積1. 13m2，如圖2所示)，對受體層中17ml的pH為 6. 8的生理鹽水進行攪拌并保持在37°C。將經(jīng)過預處理的豬皮全層(表皮+真皮)放入膜 過濾器中，并將其設(shè)置在透析單元上。向供體層中加入ImM的5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽水溶 液0.5ml。在受體層中在預定的時間段采集到0.2ml的溶液后，用新鮮的生理鹽水補充該層。然后，將0.05ml的采集樣品或標準液與3.5ml的液體A(1升中含有4g氯化鈉的乙酰 丙酮/乙醇/水=15/10/75 (體積/體積/體積)的混合溶液)和0. 45ml的液體B (用水 將85ml的福爾馬林稀釋到1升所制得的溶液)混合，并對混合液加熱處理30分鐘，30分 鐘后，用水冷卻。隨后，用HPLC(分析條件為流速1. Oml/分鐘，溫度25°C，使用激發(fā)波長 為473nm和熒光波長為363nm的熒光檢測器，使用甲醇/2. 5%乙酸水溶液=40/60 (體積/ 體積)的混合溶液作為洗提液，并使用WakOSil-II5C18HG、4. 6mΦ X 150mm作為柱)進行測 量。由標準液的峰面積求出每個樣品的濃度。然后，使用洋蔥表皮代替豬皮進行同樣的試驗，但是將5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽水 溶液的濃度改為0. ImM。結(jié)果在圖3和4中示出。由圖3和4可以理解，5-氨基乙酰丙酸 鹽酸鹽和5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽在豬皮和洋蔥表皮中表現(xiàn)出相似的滲透性。比較例4除了用5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽代替5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽以外，以與實施例10 相同的方式測量滲透性。由上述試驗可以證實，雖然當5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽直接施于皮膚時，會產(chǎn)生刺 激性，但5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽沒有產(chǎn)生皮膚刺激(如實施例9所示)，而且它們對皮膚具 有相同的滲透性，由此表明5_氨基乙酰丙酸磷酸鹽是一種在某些醫(yī)療(光動力治療和光 動力診斷)和植物應用方面，比5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽更為有用的鹽。實施例11產(chǎn)生氯化銀沉淀物的試驗在IOml的離子交換水中，溶解0. 5g的5_氨基乙酰丙酸磷酸鹽和0. 5g硝酸銀，將 混合物靜置5分鐘，并觀察液體的狀態(tài)。沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生沉淀物。就此而論，將0.5g的5-氨 基乙酰丙酸鹽酸鹽和0. 5g硝酸銀溶解在IOml的離子交換水中，將混合物靜置5分鐘，并觀 察液體的狀態(tài)。發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了沉淀物。實施例12蘋果著色的試驗將實施例1中得到的5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽以下表所示的預定濃度溶解在離子 交換水中。將展布劑(由丸和物產(chǎn)株式會社制造的“ 了 口一f Bi”)以0. 1重量％的濃 度加入到上述液體中。用磷酸調(diào)節(jié)PH。除了將上述的5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽替換成5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽、并將調(diào)節(jié) PH的磷酸替換為鹽酸以外，以相同的方式制備5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的水溶液。將這樣制備的液體以2升/枝的比例噴到3個主枝上，其中“富士”蘋果的幼果已 經(jīng)掛果但還沒有變成紅色(9月15日)。大約2個月后(11月6日)，收獲蘋果并檢查它們 的色度。用MINOLTA CAMERA株式會社制造的色度計CR-200來測量色度。結(jié)果示于表9中。表9 “_”表示發(fā)現(xiàn)水果上有大量斑點。在表9所示的Lab值中，L表示亮度，a表示紅色，b表示黃色。因此，a值越高意 味著紅色越濃。噴施5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽情況中的紅色比噴施5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽 情況中的更濃。實施例13植物活化效果將600g火山灰土壤裝在內(nèi)徑為12cm的瓷罐中，一共準備12罐，每個罐中種有1 株長到15cm高度的紫露草屬的鴨跖草，將其放在20°C的恒溫環(huán)境下，用下述處理液進行一 天一次的莖葉施用處理。21天后觀察葉片的狀況。結(jié)果總結(jié)在表10中。表10 評價標準0 沒有發(fā)現(xiàn)樹葉表面上有任何異常1 發(fā)現(xiàn)樹葉表面上有變黃的區(qū)域2 發(fā)現(xiàn)樹葉表面上有壞死的區(qū)域基于表10所示的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽的植物活化效果類似于或者 大于5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的效果。實施例14植物生長調(diào)節(jié)效果將水稻種子(Akinishiki)^ Benlate (由 Sumika Takeda Engei 株式會社生產(chǎn)) (200倍)水溶液中浸泡一晝夜，然后在30°C、黑暗條件下進行培育以促進發(fā)芽。選擇破胸 期的種子，用鑷子將10粒種子挾到發(fā)泡聚乙烯板的溝槽(溝槽是用切斷刀切成的)中，使 該板漂浮在高型的皮氏培養(yǎng)皿(該培養(yǎng)皿中裝有150ml的濃度分別如表11所示的5-氨基 乙酰丙酸磷酸鹽溶液)中，并在5，000勒克斯持續(xù)光照的條件下在25°C下培育24小時。將 各濃度的重復數(shù)設(shè)定為3。三天后進行觀察，測量每個方案中第一個葉鞘的長度以及種子的 根的長度，計算它們與未處理方案的比值并計算出平均值。結(jié)果示于表11中。表11 5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽表現(xiàn)出與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽相似或更強的促進植物 生長的效果。實施例15耐鹽性改善效果向內(nèi)徑為12cm的瓷罐(沒有排水孔)中填充600g的旱地土壤，播種7_8粒棉花種 子(品種M-5Acala)，將種子上覆蓋Icm厚的土壤，并使種子在溫室中生長。隨后，進行常 規(guī)管理，在嫩葉展開的時候，制備含有待測化合物(其濃度分別如表12所示)以及0.05%(體積/體積)的展布劑(Neoesterin，由Kumiai化學工業(yè)株式會社制造)的耐鹽性改善 劑，并將其以每10公畝100升的體積用量施加到莖葉上。每種待測化合物被設(shè)置成表12 所示的濃度。四天后，將氯化鈉以表12所示的相當于土壤重量的0-1. 5%的量溶解在30ml 水中，并滴加到土壤中。再繼續(xù)進行常規(guī)栽培，23天后進行檢查。通過肉眼觀察來進行所述 檢查，并根據(jù)下述6個級別對鹽害的結(jié)果進行評價。結(jié)果示于表12中。評價級別0 完全沒有觀察到鹽害。1 觀察到非常輕微的鹽害。2:觀察到較輕微的鹽害。3:觀察到明顯的鹽害。4:觀察到嚴重的鹽害。5 由于鹽害，導致植物體枯萎。表12 如表12所示，5-氨基乙酰丙酸磷酸鹽表現(xiàn)出與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽相似或更 強的耐鹽性改善效果。當在下述條件下采用離子色譜柱，對上述實施例中使用的5-氨基乙酰丙酸磷酸 鹽水溶液中的氯離子的濃度進行測量時，各個樣品中的氯離子的濃度都等于或低于檢測極 限(0. Ippm)。測量條件如下A:分離柱(由日本Dionex株式會社制造的IonPaCAS12A)，B 保護柱(由日本Dionex株式會社制造的IonPac AG12A)，C 洗提液(含有Na2CO3和 NaHCO3(Na2CO3 3. Ommol/1, NaHCO3 0. 5mmol/l)的水溶液)，D 流速(1. 5ml/ 分鐘)，E 抑 制器(ASRS (再生型，電流值為50mA))，F(xiàn):進樣量(25 μ 1)，G 恒溫爐溫度(35°C)，以及H: 檢測器(電導檢測器)。實施例165-氨基乙酰丙酸硝酸鹽的制備將180ml的強酸性離子交換樹脂(AMBERLITE IR 120B Na，由日本Organo株式會 社生產(chǎn))裝入柱中。所用的離子交換樹脂是經(jīng)過了鹽酸處理而從鈉離子型轉(zhuǎn)化成氫離子型 的離子交換樹脂。然后，將36. 00g(214mmol)的5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽溶解在1800ml的離 子交換水中，并將該溶液過柱，然后將IOOOml的離子交換水過柱。接著，將IN的氨水緩慢過 柱，收集594ml黃色的洗脫液。將收集到的洗脫液加入33ml的60%的硝酸(HNO3 442mmol) 中，并使用蒸發(fā)器濃縮。向濃縮液中加入400ml的丙酮，并用攪拌器劇烈攪拌，然后使混合 物在4°C下靜置16小時。吸濾回收所析出的固體，并用500ml的乙酸甲酯洗滌。將所得固 體減壓干燥12小時，得到31.09g(160mmOl)的目標物質(zhì)。它的物理性能數(shù)據(jù)如下所示。熔點114°C1H-WR(D2OdOOMHz) δ ppm :2· 75(t，2H，CH2), 2. 93(t，2H，CH2), 4. 17(s，2H，CH2)13C-NMR(D20,100MHz) δ ppm 30 (CH2)，37 (CH2)，50 (CH2)，180 (CO)，207 (COO)C5H9NO3 · HNO3的元素分析數(shù)據(jù)計算值=C30. 93% ；H 5. 19% ；N 14. 43%實測值=C30. 1% ；H 5. 2% ；N 14. 7%由離子色譜分析得到的NO3-含量計算值31.94%實測值31%離子色譜分析條件分離柱由日本Dionex株式會社制造的IonPaCAS12A ；洗提 液含有 Na2CO3 和 NaHCO3 (Na2CO3 3. Ommol/1, NaHCO3 0. 5mmol)的水溶液，流速1. 5ml/ 分 鐘，進樣量25μ 1，柱溫35°C，檢測器電導檢測器。實施例175-氨基乙酰丙酸硝酸鹽的氣味測量5個受試者直接聞實施例16中制備的5-氨基乙酰丙酸硝酸鹽的水溶液(柱洗脫 液和硝酸的混合液)及其固體的氣味，并以與實施例3相同的方式來評價它們的氣味。結(jié) 果示于表13中。比較例5除了使用5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的水溶液及其固體以外，以與實施例17相同的 方式來評價氣味。就此而論，5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的水溶液是使用5-氨基乙酰丙酸鹽酸 鹽固體、鹽酸和離子交換水制備的，其中，使得5-氨基乙酰丙酸和氯離子的摩爾濃度分別 與實施例16中的5-氨基乙酰丙酸硝酸鹽水溶液中的5-氨基乙酰丙酸和硝酸根離子的摩 爾濃度相同。結(jié)果示于表13中。表 13 實施例18除了通過將0. 5g的5-氨基乙酰丙酸硝酸鹽溶解在Iml水中而制成水溶液以外， 以與實施例17相同的方式來評價氣味。結(jié)果示于表14中。比較例6除了通過將0. 5g的5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽溶解在Iml水中而制成水溶液以外， 以與實施例17相同的方式來評價氣味。結(jié)果示于表14中。表 14 表13和14說明，與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的水溶液相比，沒有聞到5-氨基乙 酰丙酸硝酸鹽的水溶液中有任何氣味。由于5-氨基乙酰丙酸硝酸鹽水溶液的制備過程簡 化了 5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽水溶液的制備過程中所必需的防臭措施和防腐蝕性氣體的措 施，因此前者的操作更為簡便。另外，與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的固體相比，5-氨基乙酰丙 酸硝酸鹽的固體也沒有發(fā)出任何氣味，所以諸如稱重和分裝之類的操作更為便利。實施例19產(chǎn)生氯化銀沉淀物的試驗在IOml的離子交換水中，溶解0. 5g的5_氨基乙酰丙酸硝酸鹽和0. 5g硝酸銀，將 混合物靜置5分鐘，并觀察液體的狀態(tài)。沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生沉淀物。就此而論，將0. 5g的5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽和0. 5g硝酸銀溶解在IOml的離子 交換水中，將混合物靜置5分鐘，并觀察液體的狀態(tài)。發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了沉淀物。實施例20植物活化效果將600g旱地土壤裝在內(nèi)徑為12cm的瓷罐中，然后播種12粒蘿卜種子，將種子上 覆蓋5mm厚的土壤，并使種子在溫室中生長。用下述處理液體進行一天一次的莖葉施用處 理。21天后觀察葉片的狀況。結(jié)果總結(jié)在表15中。評價標準與實施例13的相同。表15 由表15發(fā)現(xiàn)5_氨基乙酰丙酸硝酸鹽的植物活化效果與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽 的相似或者更強。實施例21蘋果著色的試驗將實施例16中得到的5-氨基乙酰丙酸硝酸鹽以表16所示的預定濃度溶解在離 子交換水中。將展布劑(由丸和物產(chǎn)株式會社制造的“ 了 口一f Bi”)以0. 1重量％的 濃度加入到上述液體中。用硝酸調(diào)節(jié)PH。除了將上述的5-氨基乙酰丙酸硝酸鹽替換成5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽、并將硝酸 替換為鹽酸以外，以與上述相同的方式制備溶液。將這樣制備的液體以2升/枝的比例噴在3個主枝上，其中“富士”蘋果的幼果已 經(jīng)掛果但還沒有變成紅色(9月15日)。大約2個月后(11月6日)，收獲蘋果并檢查它們 的色度。用MINOLTA CAMERA株式會社制造的色度計CR-200測量色度。結(jié)果示于表16中。表 16 “_”表示發(fā)現(xiàn)水果上有大量斑點。在表16所示的Lab值中，L表示亮度，a表示紅色，b表示黃色。因此，a值越高意 味著紅色越濃。噴施5-氨基乙酰丙酸硝酸鹽情況中的紅色比噴施5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽 情況中的紅色更濃。實施例22浮游生物的培養(yǎng)將濃度為lmM(194ppm)的5_氨基乙酰丙酸硝酸鹽加入到IOOml的表17 (培養(yǎng)液 組分)所示的滅菌培養(yǎng)液中，將Chlorella sp.接種到該培養(yǎng)液中，并在30°C、以及有氧和 黑暗的條件下在往復式搖床中進行培養(yǎng)，然后測定細胞數(shù)(0D 660)。將濃度為lmM(168ppm)的5_氨基乙酰丙酸鹽酸鹽加入到IOOml的表17 (培養(yǎng)液 組分)所示的滅菌培養(yǎng)液中，將Chlorella sp.接種到該培養(yǎng)液中，并在30°C、以及有氧和 黑暗的條件下在往復式搖床中進行培養(yǎng)，然后測定細胞數(shù)(0D 660)。將Chlorella sp.接種到IOOml的表17(培養(yǎng)液組分)所示的滅菌培養(yǎng)液中，并 在30°C、以及有氧和黑暗的條件下在往復式搖床中進行培養(yǎng)，然后測定細胞數(shù)(0D 660)。表17 表18結(jié)果(細胞數(shù)0D660nm) 由表18的結(jié)果明顯可見，5-氨基乙酰丙酸硝酸鹽表現(xiàn)出與5-氨基乙酰丙酸鹽酸 鹽相同的效果。當在下述條件下采用離子色譜柱，對上述實施例中使用的5-氨基乙酰丙酸硝酸 鹽水溶液中的氯離子的濃度進行測量時，各個樣品中的氯離子的濃度都等于或低于檢測極 限(0. Ippm)。
測量條件如下A:分離柱(由日本Dionex株式會社制造的IonPaCAS12A)，B 保護柱(由日本Dionex株式會社制造的IonPac AG12A)，C 洗提液(含有Na2CO3和 NaHCO3(Na2CO3 3. Ommol/1, NaHCO3 0. 5mmol/l)的水溶液)，D 流速(1. 5ml/ 分鐘)，E 抑 制器(ASRS (再生型，電流值為50mA))，F(xiàn):進樣量(25 μ 1)，G 恒溫爐溫度(35°C)，以及H: 檢測器(電導檢測器)。實施例23
5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽的制備將180ml的強酸性離子交換樹脂(AMBERLITE IR 120B Na，由日本Organo株式會 社生產(chǎn))裝入柱中。所用的離子交換樹脂是經(jīng)過了鹽酸處理而從鈉離子型轉(zhuǎn)化成氫離子型 的離子交換樹脂。然后，將36. 00g(215mmol)的5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽溶解在1800ml的離 子交換水中，并將該溶液過柱，然后將IOOOml的離子交換水過柱。接著，將IN的氨水緩慢 過柱，收集到555ml黃色的洗脫液。將收集到的洗脫液與81.72g(430mmOl)的對甲苯磺酸 一水合物混合，并使用蒸發(fā)器濃縮。向濃縮液中加入400ml的丙酮，并用攪拌器劇烈攪拌， 然后在4°C下靜置16小時。吸濾回收所析出的固體，并用400ml的丙酮洗滌。將所得固體 減壓干燥12小時，得到47.78g(158mm0l)的目標物質(zhì)。它的物理性能數(shù)據(jù)如下所示。熔點186°C1H-WR(D2OdOOMHz) δ ppm 2. 38(s,3H, CH3)，2· 67 (t，2H，CH2)，2· 84 (t，2H，CH2), 4. 10 (s，2H, CH2) 7. 34 (d, 2H,環(huán) H)，7. 69 (d, 2H,環(huán) H)13C-NMR (D2O, 100MHz) δ ppm :23 (CH3)，30 (CH2)，37 (CH2)，50 (CH2)，128 (環(huán) C)， 132 (環(huán) C)，142 (環(huán) C)，145 (環(huán) C)，180 (CO)，207 (COO)C5H9NO3 · C7H8SO3 的元素分析數(shù)據(jù)計算值=C47. 52% ；H 5. 65% ；N 4. 62%實測值=C47. 4% ；H 5. 6% ；N 4. 6%實施例245-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽的氣味測量5個受試者直接聞實施例23中制備的5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽的水溶液 (柱洗脫液和對甲苯磺酸的混合液)及其固體的氣味，并以與實施例3相同的方式來評價它 們的氣味。結(jié)果示于表19中。比較例7除了使用5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的水溶液及其固體以外，以與實施例24相同的 方式來評價氣味。就此而論，5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的水溶液是使用5-氨基乙酰丙酸鹽酸 鹽固體、鹽酸和離子交換水制備的，其中，使得5-氨基乙酰丙酸和氯離子的摩爾濃度分別 與實施例23中的5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽水溶液中的5-氨基乙酰丙酸和對甲苯磺 酸根離子的摩爾濃度相同。結(jié)果示于表19中。表 19 實施例25除了通過將0. 5g的5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽溶解在Iml水中而制成水溶液 以外，以與實施例24相同的方式來評價氣味。結(jié)果示于表20中。(比較例8)除了通過將0. 5g的5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽溶解在Iml水中而制成水溶液以外， 以與實施例24相同的方式來評價氣味。結(jié)果示于表20中。表 20 表19和20說明，與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的水溶液相比，沒有聞到5-氨基乙 酰丙酸對甲苯磺酸鹽的水溶液中有任何氣味。由于5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽水溶液 的制備過程簡化了 5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽水溶液的制備過程中所必需的防臭措施和防腐 蝕性氣體的措施，因此前者的操作更為簡便。另外，與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的固體相比， 5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽的固體也沒有發(fā)出任何氣味，所以諸如稱重和分裝之類的操 作更為便利。(實施例沈)結(jié)晶狀態(tài)的耐熱性使用熔點儀測量熔點。表 21 如表21所示，5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽的保持固態(tài)的能力優(yōu)于5-氨基乙酰 丙酸鹽酸鹽。
實施例27滅菌分解試驗首先，對50mg的5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽或者5_氨基乙酰丙酸鹽酸鹽進行 加熱滅菌(121 ，20分鐘，1.5kgf/cm2)。確認滅菌前后的重量沒有發(fā)生變化，然后采用文 獻(Clin. Chem.，36/8，1494(1990))中描述的方法，對5-氨基乙酰丙酸在滅菌前后的分解 度進行檢驗。結(jié)果示于表22中。表 22 如表22所示，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過高溫加熱滅菌處理后，5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽的分 解度低于5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽的分解度。實施例28產(chǎn)生氯化銀沉淀物的試驗在IOml的離子交換水中，溶解0. 5g的5_氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽和0. 5g硝 酸銀，將混合物靜置5分鐘，并觀察液體的狀態(tài)。沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生沉淀物。就此而論，將0. 5g的5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽和0. 5g硝酸銀溶解在IOml的離子 交換水中，將混合物靜置5分鐘，并觀察液體的狀態(tài)。發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了沉淀物。實施例29植物活化效果將600g旱地土壤裝在內(nèi)徑為12cm的瓷罐中，然后播種12粒蘿卜種子，將種子上 覆蓋5mm厚的土壤，并使種子在溫室中生長。用下述處理液體進行一天一次的莖葉施用處 理。21天后觀察葉片的狀況。結(jié)果總結(jié)在表23中。評價標準與實施例13相同。表 23 由表23發(fā)現(xiàn)，5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽的植物活化效果與5-氨基乙酰丙酸 鹽酸鹽的相似或者更強。實施例30蘋果著色的試驗將實施例23中得到的5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽以表24所示的預定濃度溶 解在離子交換水中。將展布劑(由丸和物產(chǎn)株式會社制造的“ 了 口一f Bi”)以0. 1重 量％的濃度加入到上述液體中。用對甲苯磺酸調(diào)節(jié)PH。除了將上述的5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽替換成5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽、并 將對甲苯磺酸替換為鹽酸以外，以與上述相同的方式制備溶液。將這樣制備的液體以2升/枝的比例噴到3個主枝上，其中“富士”蘋果的幼果已 經(jīng)掛果但還沒有變成紅色(9月15日)。大約2個月后(11月6日)，收獲蘋果并檢查它們 的色度。用MINOLTA CAMERA株式會社制造的色度計CR-200測量色度。結(jié)果示于表24中。表 24
“_”表示發(fā)現(xiàn)水果上有大量斑點。在表24的Lab值中，L表示亮度，a表示紅色，b表示黃色。因此，a值越高意味著 紅色越濃。噴施5-氨基乙酰丙酸對甲苯磺酸鹽的情況中的紅色比噴施5-氨基乙酰丙酸鹽 酸鹽情況中的更濃。當在下述條件下采用離子色譜柱，對上述實施例中使用的5-氨基乙酰丙酸對甲 苯磺酸鹽水溶液中的氯離子的濃度進行測量時，各個樣品中的氯離子的濃度都等于或低于 檢測極限(0. Ippm)。測量條件如下A:分離柱(由日本Dionex株式會社制造的IonPaCAS12A)，B 保護柱(由日本Dionex株式會社制造的IonPac AG12A)，C 洗提液(含有Na2CO3和 NaHCO3(Na2CO3 3. Ommol/1, NaHCO3 0. 5mmol/l)的水溶液)，D 流速(1. 5ml/ 分鐘)，E 抑 制器(ASRS (再生型，電流值為50mA))，F(xiàn):進樣量(25 μ 1)，G 恒溫爐溫度(35°C)，以及H: 檢測器(電導檢測器)。雖然本發(fā)明參照具體實施方式
進行了詳細的說明，但是對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來 說，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，顯然可以作出各種變化和改進。本申請基于2004年3月30日提交的日本專利申請(日本專利申請?zhí)?br> 2004-099670)、2004年3月30日提交的日本專利申請(日本專利申請?zhí)?004-099671)、 2004年3月30日提交的日本專利申請(日本專利申請?zhí)?004-099672)、2004年11月30 日提交的日本專利申請(日本專利申請?zhí)?004-345661)、2005年2月25日提交的日本專 利申請(日本專利申請?zhí)?005-051216)、2005年2月25日提交的日本專利申請(日本 專利申請?zhí)?005-051217)、和2005年2月25日提交的日本專利申請(日本專利申請?zhí)?br> 2005-051218)，上述專利申請的全部內(nèi)容以引用方式并入本文。工業(yè)實用性本發(fā)明的5_氨基乙酰丙酸鹽是一種便于操作的物質(zhì)，這是因為它不會釋放出難 聞的氣味或刺激性的氣味，而且，該鹽對皮膚和舌頭表現(xiàn)出低刺激性的特性，其對皮膚等也 具有優(yōu)異的滲透性，因此含有該鹽的組合物可用作光動力治療或光動力診斷所用的試劑。 而且，與5-氨基乙酰丙酸鹽酸鹽相比，本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽還具有高分解溫度和優(yōu)異的耐熱性。根據(jù)本發(fā)明的制備方法，可以方便有效地制備出本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸 鹽。另外，由于本發(fā)明的5-氨基乙酰丙酸鹽在形成水溶液時具有低的氯離子濃度，因此在 施用于植物時幾乎不會出現(xiàn)由氯造成的損害。
權(quán)利要求
由下式(II)表示的5-氨基乙酰丙酸磺酸鹽HOCOCH2CH2COCH2NH2·HOSO2R2(II)其中，R2表示被低級烷基取代的苯基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的5-氨基乙酰丙酸磺酸鹽，其中被取代的苯基是4-甲基苯基、 2，4_ 二甲基苯基或2，5_ 二甲基苯基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的5-氨基乙酰丙酸磺酸鹽，該鹽是水溶液形式的。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的5-氨基乙酰丙酸磺酸鹽，該鹽是水溶液形式的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的5-氨基乙酰丙酸磺酸鹽，該鹽是固體形式的。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的5-氨基乙酰丙酸磺酸鹽，該鹽是固體形式的。
7.一種制備權(quán)利要求1至6中任意一項所述的5-氨基乙酰丙酸磺酸鹽的方法，該方法 包括洗脫被吸附在陽離子交換樹脂上的5-氨基乙酰丙酸，并將洗脫液與磺酸類物質(zhì)混合。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的5-氨基乙酰丙酸是用磺酸類物質(zhì)、堿金屬 或堿土金屬的氫氧化物或碳酸鹽、氨、胺以及含有氨基的化合物溶解在水中而形成的溶液 洗脫的。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的5-氨基乙酰丙酸是用氨水洗脫的。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述氨水的濃度為0.OlN至10N。
11.一種用于光動力治療或光動力診斷的組合物，該組合物包含根據(jù)權(quán)利要求1至6中 任意一項所述的5-氨基乙酰丙酸磺酸鹽。
12.一種包含根據(jù)權(quán)利要求1至6中任意一項所述的5-氨基乙酰丙酸磺酸鹽的植物活 化劑組合物。
13.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任意一項所述的5-氨基乙酰丙酸磺酸鹽在制備光動力治療 劑或光動力診斷試劑中的應用。
14.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任意一項所述的5-氨基乙酰丙酸磺酸鹽作為植物活化劑的應用。
全文摘要
一種可用于微生物、發(fā)酵、動物、藥物、植物等領(lǐng)域的5-氨基乙酰丙酸鹽；一種制備該鹽的方法；一種含有該鹽的藥物組合物；以及一種含有該鹽的植物活化劑組合物。
文檔編號A01N25/02GK101885692SQ20101021546
公開日2010年11月17日 申請日期2005年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月30日
發(fā)明者岡田秀樹, 田中徹, 石塚昌宏, 立谷尚久, 肥后麻衣, 西川誠司 申請人:克斯莫石油株式會社