專利名稱：大蒜胚性懸浮培養系建立用的培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種大蒜組織培養技術，具體是一種大蒜胚性懸浮培養系建立用的培養基。特別適用于利用從大蒜莖尖分生組織誘導出的胚性愈傷組織進行懸浮培養。
背景技術：
大蒜(Allium sativumL.)是無性繁殖植物，具有較高的食用及藥用價值，利用生物工程技術改良其品質.抗病蟲害等性狀現已引起廣泛的重視，這些生物技術應用的關鍵環節是建立一個大蒜細胞組織培養、增殖的有效植株再生體系。懸浮培養技術可以在短時間內培養出大量同質的試驗材料，大幅度提高試驗效率，為大蒜生物工程提供理想的試驗材料。張毅等利用大蒜懸浮培養提取大蒜次生代謝物質有過報道(1993)；但利用大蒜懸浮培養技術，建立懸浮培養系及有效植株高頻率再生體系尚未報道。
發明內容
本發明提供一種大蒜胚性懸浮培養系建立用的培養基，目的是解決大蒜莖尖分生組織誘導出胚性愈傷組織懸浮培養時易喪失胚性，難以成系的技術難題，建立一個大蒜的胚性細胞培養系。
本發明的技術方案如下一種大蒜胚性懸浮培養系建立用的培養基，是將2，4二氯苯氧乙酸2，4-D、激動素KT、蔗糖和瓊脂溶解于基本培養基B5中，PH值調整至5.8-6.0制得，其各組份的用量為以1L基本培養基B5加入量計 B5 1L 2，4-D 2mg KT 0.5-2mg 蔗糖 30g。
優選為 B5 1L 2，4-D 2mg KT 0.5mg 蔗糖30g。
上述原料中，B5為基本培養基，提供培養組織生長發育所需的無機營養元素和部分有機營養元素；2，4-D、KT是植物生長調節劑，具有促進培養物愈傷組織形成和發育的作用；蔗糖提供培養組織生長發育所的碳素營養。
上述各組份的用量是發明人在理論分析的基礎上進行大量試驗摸索總結得出的，按上述比例配制培養基，具有形成優質胚性愈傷組織顆粒誘導效果。
上述培養基的制作方法是將2，4-D、KT和蔗糖溶解于基本培養基B5中，攪拌均勻，PH值調整為5.8-6.0即可。
本發明的積極效果是利用本培養基可以建立大蒜懸浮培養系，解決了大蒜莖尖分生組織誘導出胚性愈傷組織懸浮培養時易喪失胚性，難以成系的技術難題。
具體實施例方式 以下通過實施例和對照例進一步闡述本發明的有益效果。
實施例1 B51L 2，4-D2mg 6-BA 2mg 蔗糖 30g。
實施例2 B5 1L 2，4-D 2mg 6-BA 0.5mg NAA 0.2mg 蔗糖 30g。
實施例3 B51L 2，4-D2mg KT0.5mg 蔗糖 30g。
實施例4 B51L 2，4-D2mg KT2mg 蔗糖 30g。
試驗方法及結果 將上述實施例的培養基用于大蒜胚性懸浮培養系的建立試驗 材料大蒜徐州白蒜莖尖分生組織誘導出的胚性愈傷組織。
方法將大蒜徐州白蒜莖尖分生組織誘導出胚性愈傷組織破碎成小的細胞團，將其轉移到裝有上述實施例液體培養20ml(PH5.5)的三角瓶中，放在100r/min轉速的水平搖床上進行振蕩培養，培養條件為27±1℃，每日12h.1000lx光照。懸浮培養每隔2周繼代一次，培養10周。
結果將大蒜莖尖分生組織誘導得到的胚性愈傷組織轉管接種在上述4個實施例液體培養中進行振蕩培養。在實施例3中懸浮系形成率最高為86.7％，可以獲得增殖迅速.分散程度良好的胚性細胞懸浮培養系。實施例1中懸浮系形成率最低，為6.6％；實施例2中懸浮系形成率為40％；實施例4中懸浮系形成率為63.3％。在實施例1、2、4中，愈傷組織逐漸變白，最后喪失胚性，同時部分細胞團形成根狀組織。由此可見，在大蒜體胚形成過程中，過高的生長素不利于其體胚的發生，而導致向根的方向分化。在實施例3培養基中獲得的胚性細胞培養系每周繼代一次，每次繼代時，將堅硬.淡黃色.直徑大于3mm的細胞團破碎成0.1mm以下的小細胞團或單細胞，通過2周的懸浮培養，部分細胞團又可以發育成2-3mm的細胞團。通過上述方法，由一個莖尖分生組織誘導得到的胚性愈傷組織可以在短時間內得到大量的同質胚性愈傷組織。
統計結果見表1。
表1大蒜懸浮培養系誘導結果統計(10周)
綜合以上分析，得出大蒜胚性懸浮培養系誘導的最佳培養基為 B51L 2，4-D2mg KT0.5mg 蔗糖 30g。
權利要求
1.一種建立大蒜胚性懸浮培養系的培養基，其特征是將2，4二氯苯氧乙酸2，4-D、激動素KT、蔗糖、瓊脂溶解于基本培養基B5中，PH值調整至5.8-6.0制得，其各組份的用量為以1L基本培養基B5加入量計
B5 1L
2，4-D 2mg
KT 0.5-2mg
蔗糖30g。
2.一種建立大蒜胚性懸浮培養系的培養基，其特征是將2，4二氯苯氧乙酸2，4-D、激動素KT、蔗糖、瓊脂溶解于基本培養基B5中，PH值調整至5.8-6.0制得，其各組份的用量為以1L基本培養基B5加入量計
B5 1L
2，4-D 2mg
KT 0.5mg
蔗糖30g。
全文摘要
本發明公開了一種建立大蒜胚性懸浮培養系的培養基，屬大蒜組織培養技術。將2，4-D、KT、蔗糖、瓊脂溶解于基本培養基B5中，pH值調整至5.8-6.0制得，其各組份的用量為以1L基本培養基B5加入量計B5 1L，2，4-D 2mg，KT 0.5-2mg，蔗糖30g。有益效果是利用本培養基可以建立大蒜懸浮培養系，解決了大蒜莖尖分生組織誘導出胚性愈傷組織懸浮培養時易喪失胚性，難以成系的技術難題。
文檔編號A01H4/00GK101816288SQ201010169619
公開日2010年9月1日 申請日期2010年5月6日 優先權日2010年5月6日
發明者張允剛 申請人:江蘇徐淮地區徐州農業科學研究所