專利名稱：誘導貝類多倍體的生物方法
技術領域：
本發明公開了一種誘導貝類多倍體的生物方法，該方法是一種在規模化誘導鮑
魚、牡蠣、扇貝等貝類多倍體時使用的誘導方法，屬于多倍體誘導技術領域。
背景技術：
人工誘導產生的貝類三倍體具有個體大、生長快、育性低、抗逆性強、肉質好等顯 著的經濟性狀，可大大提高其商品價值。目前多倍體研究中使用的誘導方法有三種采用 溫差、靜水壓等處理的物理方法；使用細胞松弛素B(CB)、秋水仙素、6_ 二甲基氨基嘌呤 (6-DMAP)等藥物處理的化學方法；誘導產生的四倍體與普通的二倍體雜交得到三倍體的 生物方法。物理方法設備簡單、價格低廉，可有效節約誘導成本，但一直未能解決誘導效 果不穩定的難題，無法在大規模生產中應用。化學方法誘導效果較穩定，尤以細胞松弛素 B(CB)處理最佳，CB處理對不同時期的細胞都有效且對細胞核和細胞器影響較小，具有作 用時間長、誘導率高、畸形率低的優點，是目前多倍體誘導研究中運用最為廣泛的方法。但 由于每次育苗都需使用價格昂貴的藥品，且對人體健康存在潛在的危害，投入到實際生產 中的成本會很高。生物方法一般是用四倍體與二倍體雜交來生產100%三倍體，高效、安全、 簡便，可以規模化生產應用，但目前培育出存活的四倍體還有很大的難度，還未具有實際應 用意義。所以，上述多倍體的誘導方法都無法真正滿足規模化貝類多倍體育苗生產在誘導 效果和成本方面的要求。
發明內容
本發明的目的在于提供一種操作簡單、容易掌握、成本低、在規模化多倍體育苗生
產中誘導貝類多倍體的生物方法。 為實現上述目的，本發明的解決方案是 本發明是一種誘導貝類多倍體的生物方法，其具體操作步驟如下(l)對于第 一群體雌鮑和第二群體雄鮑雜交的受精卵，用濃度為0. 70mg/L-l. 00mg/L的細胞松弛素 B(CB)抑制其第二極體的釋放而獲得雜交三倍體試驗群體；(2)雜交三倍體試驗群體培育 養成后，用倍體分析儀進行一一鑒定，經鑒定為三倍體的雌鮑(即雜交三倍體雌鮑)作為母 本并與第二群體雄鮑作為父本進行受精，直接誘導三倍體。
所述的第一群體雌鮑為鈹紋盤鮑大連群體雌鮑。
所述的第二群體雄鮑為盤鮑日本群體雄鮑。 本發明是一種將同一物種中兩個不同亞種間雜交的受精卵用藥物處理并將培育 的雜交雌性三倍體群體作為母本，與普通群體的雄性作為父本進行受精，從而直接誘導三 倍體的方法。 采用上述方案后，本發明具有以下優點 (1)由于本發明用誘導獲得的雜交三倍體雌鮑作為母本，與誘導獲得四倍體雌鮑 作為母本相比，誘導難度大為降低，而且三倍體的存活率大大高于四倍體，能更容易地獲得足夠數量的親貝用于規模化育苗生產。
(2)由于本發明雜交三倍體的誘導處理與普通三倍體的誘導處理相同，而雜交三
倍體雌鮑與盤鮑日本群體雄鮑雜交，無需任何處理可直接生產三倍體。這種與普通二倍體
雌雄親貝誘導三倍體時每次都需要誘導處理相比，可大大降低生產成本，提高效率。
(3)由于本發明使用雜交三倍體雌鮑作為母本與盤鮑日本群體雄鮑作為父本進行
受精來誘導三倍體的操作方法與普通育苗生產方法一樣，一般的育苗技術工人就能掌握，
所以在生產中的可操作性更強。 (4)由于本發明使用雜交三倍體雌鮑作為母本與盤鮑日本群體雄鮑作為父本來直 接誘導三倍體，可獲得相對較高的三倍體率，而且效果穩定，更適合在規模化育苗生產中運 用。 綜上所述，本發明與目前使用的貝類多倍體誘導方法相比，操作簡單，可節省大量 藥物，大大降低了生產成本，能夠直接且有效地誘導出三倍體，有利于貝類多倍體大規模推 廣應用。 下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。
具體實施例方式
本發明是一種將同一物種中兩個不同亞種間雜交的受精卵用藥物處理并將培育 的雜交三倍體雌鮑作為母本，與普通群體的雄性作為父本進行受精，從而直接誘導三倍體 的生物方法。 其具體操作步驟如下 (1)對于鈹紋盤鮑大連群體雌鮑和盤鮑日本群體雄鮑雜交的受精卵，用濃度為所 述的雜交三倍體雌鮑，即在水溫23-25°CT，收取含有40萬-50萬個受精卵 一 皺紋盤鮑 大連群體雌鮑的卵子與盤鮑日本群體雄鮑的精子受精后的受精卵于3L塑料容器中，用細 胞松弛素B(CB)抑制受精卵第二極體的釋放誘導三倍體，水溶液終體積為2L，細胞松弛素 B(CB)濃度為0. 70mg/L-l. 00mg/L，誘導處理10分鐘。誘導結束后，用含有0. 1% (V/V) 二 甲亞砜(DMSO)的水溶液洗卵2次，每次約15分鐘。 (2)將受精卵進行培育，待鮑苗養成至殼長約4. 0-5. Ocm時，用倍體分析儀分別 一一進行檢測，鑒定和篩選出得雜交三倍體鮑繼續培養；當從性腺外觀可明顯鑒別雌雄性 別時，再次篩選出雜交三倍體雌鮑，繼續培養作為母本，并與盤鮑日本群體雄鮑作為父本進 行受精，直接誘導三倍體。
權利要求
一種誘導貝類多倍體的生物方法，其特征在于其具體操作步驟如下(1)對于第一群體雌鮑和第二群體雄鮑雜交的受精卵，用濃度為0.70mg/L-1.00mg/L的細胞松弛素B(CB)抑制其第二極體的釋放而獲得雜交三倍體試驗群體；(2)雜交三倍體試驗群體培育養成后，用倍體分析儀進行一一鑒定，經鑒定為三倍體的雌鮑作為母本并與第二群體雄鮑作為父本進行受精，直接誘導三倍體。
2. 根據權利要求1所述的誘導貝類多倍體的生物方法，其特征在于所述的第一群體 雌鮑為鈹紋盤鮑大連群體雌鮑。
3. 根據權利要求1所述的誘導貝類多倍體的生物方法，其特征在于所述的第二群體 雄鮑為盤鮑日本群體雄鮑。
全文摘要
本發明公開了一種誘導貝類多倍體的生物方法。由于本發明中親貝培育相對容易，存活力較強，雜交三倍體雌鮑作為母本與普通群體雄鮑受精的操作與普通鮑魚育苗方法一樣，且三倍體率較高。所以，采用此生物誘導方法能更容易地獲得足夠數量的親貝，可節省大量藥物，大大降低了生產成本，技術要求低，誘導效果穩定，更適合在多倍體規模化育苗生產中運用。
文檔編號A01K61/00GK101773080SQ201010044829
公開日2010年7月14日 申請日期2010年1月5日 優先權日2010年1月5日
發明者嚴正凜, 姜永華, 胡家財 申請人:集美大學