專利名稱：暗褐網柄牛肝菌人工栽培方法
技術領域：
本發明涉及食用真菌栽培技術領域，尤其是暗褐網柄牛肝菌在菇房、溫室大棚及田間、 圃地的人工栽培方法。
背景技術：
暗褐網柄牛肝菌(州7e6c^"sporz^/7Z^幼s)，最早描述見于斯里蘭卡(Peglerl986)， 現在斯里蘭卡、越南、印度尼西亞、泰國、巴西、墨西哥、澳大利亞，新西蘭都有分布 (Maria2007, Bandala2004， Watling2001， Barbara 1987， Heinemann1982 )。在我國分布 于云南、廣西和海南等地(臧穆等1986， 2006;楊祝良和臧穆2003)，是一種味道鮮美， 營養價值豐富，深受產地消費者喜愛的美味食用菌。
多數牛肝菌為菌根食用菌。許多菌根食用菌半人工模擬栽培的過程相當長，需要4 5 年，甚至6 7年才能完成(弓明欽等2006)。在實驗室條件下5o/eto菌絲在鋸末和麥粒組 成的培養基上生長良好，避光條件下培養90天產生具擔孢子的成熟子實體(OhtaA等2003)。 目前世界菌根食用栽培最為成功的是黑孢塊菌(n/力er歷^a/7ospor，)。在新西蘭，黑孢 塊菌人工栽培從種植園的建立到有塊菌子囊果收獲需要6-7年時間(譚著明等2002)。國 內菌根食用菌栽培研究相對較晚。松乳菇(Zscteri^ AWc/os"s)人工栽培，菌根苗合 成需5 8個月時間，用菌根合成苗繼續原地栽培或移植到普通土壤中培養出菇需2 3年時 間(譚著明等2000)。采用合成的褐環粘蓋牛肝菌(&iW"s "&"s)濕地松菌根苗密植 于經過消毒的圍地實現人工栽培,菌根苗栽植至褐環粘蓋牛肝菌子實體生長需12個月時間
(應國華等2007)。綜上所述，目前僅有少數種類的菌根食用菌可進行半人工模擬栽培及 人工模擬栽培，或處于實驗室栽培研究狀態。暗褐網柄牛肝菌人工栽培未見報道。
暗褐網柄牛肝菌味道鮮美，營養價值豐富，有較好的食用及藥用價值，是一種較好的 保建食品，深受產地消費者喜愛。目前市場上銷售的暗褐網柄牛肝菌均采自野生自然生長。 由于受氣候季節條件的限制產量有限。加上不注重對野生自然生長資源的保護，人為過度 采摘導致數量越來越少。
參考文獻Pegler DN, Agaric Flora of Sri Lanka.Sw〃W JcM"o加/ Sen'es, 1986， 12: 1-519.[2]Barbara P， Segedin. An annotated checklist of Agarics and Boleti recorded from New Zealand. /Vew Zea/aw/Jcwwa/o/丑otaMy， 1987， 25 (2) : 185-215. Watling R. The relationships and possible distributional patterns of Boletes in South-East Asia. M戸/ogZra/i e，rc/z， 2001， 105 ( 12 ) : 1440-1448.Bandala VM， Montoya L, Jarvio D. Two interesting records of Boletes found in coffee plantations in Eastern Mexico. Persoow'a, 2004， 18(3); 365-380.Maria alice neves, Marina capelari. A preliminary checklist of Boletales from Brazil and notes on Boletales specimens at the Instituto de BotSnica (SP) Herbarium, S3o Paulo， SP, Brazil. S"/e""6us seWe c/e"c/ay 6油g/ms， 2007, 7(2); 163-169.Heinemann P, Rammeloo J. Observations sur le genre尸/z/e6o/ws (Boletineae).歸cotoco", 1982， 15: 384-404.臧穆.我國東喜馬拉雅及其鄰區牛肝菌目的研究(續).云南植物研究，1986,8(1): 1-22. [8]臧穆，2006.中國真菌志第22巻.北京科學出版，pp.1-215.楊祝良，臧穆.中國南部高等真菌的熱帶親緣.云南植物研究，2003,25 (2): 129-144. [10]弓明欽仲崇祿陳羽.2006.菌根食用菌及其半人工栽培.廣東廣東科學出版 社，pp.H47. Ohta A， Fujiwara N. Fruit-body production of an ectomycorrhizal fungus in genus丑o/e加 in pure culture .Afycosc/ewce， 2003,44(4):295~"30.譚著明，傅少春，劉曉紅.新西蘭菌根性食用菌研究開發現狀與啟示.湖南林業科技， 2002,29 (3) :72-74.譚著明.松乳菇母種培養基及人工栽培方法，中華人民共和國專利，ZL98112527丄 [14]應國華，呂明亮，李伶俐.褐黃粘蓋牛肝菌人工栽培方法，中華人民共和國專利，申請 專利號,200710164731.X.
發明內容
本發明的目的是提供一種暗褐網柄牛肝菌人工栽培方法。可極大地滿足人們對該種美 味食用菌的需求，緩解了對野生自然資源的壓力，保護了生態。
本發明的技術方案為暗褐網柄牛肝菌人工栽培方法按以下步驟進行 1)菌棒培養
用以下固體培養基培養暗褐網柄牛肝菌菌棒，菌棒的制備由下述原料及方法配制而成
a. 原料組成
橡膠木鋸木屑或其他雜木屑 10. 0 20.0 kg
谷粒 1.0 10.0kg 面粉 1.0 5.0kg MgS04 10. 0 20.0 g
KH2P04 10.0 20.0g pH 4.0 6.0
b. 配制方法將谷粒稱量后放入容器中，加水浸泡10 12h，然后濾除多余水份待用； 準確稱量面粉的量，均勻拌入橡膠木鋸木屑或雜木屑料中，然后加入浸泡濾水后的谷粒，
將MgS04 、 KH2P04用適量的水溶解后噴灑入鋸木屑料堆，水的用量以料堆含水量60.0% 為準，最后將各種原料均勻拌勻混合，培養基PH 4.0 6.0，即得固體培養基；將配制好 的固體培養基分裝于聚丙烯菌種袋中，12(TC滅菌60分鐘，待冷卻后備用；
C.接種培養將預先培養好的暗褐網柄牛肝菌液體菌種接種于步驟b中的袋裝培養基
質中，接種后將培養袋置于26 3(TC的培養室中暗光培養40 60天，菌絲體長滿菌袋， 得菌棒；
2)人工栽培
a.菌棒覆土培養出菇
① 覆土材料制備菜園土、果園土、稻田土等作均可作覆土材料，取表層20-30 cm的 土層，將取出的土壤在烈日下曝曬至干燥，然后打碎，去雜質，用孔徑1.5cm的篩網過篩， 去除粗土粒，調土壤含水量40-50%，拌入10%的農家肥，堆放于曬場中40-60天，面上覆 蓋雙層塑料薄膜自然發酵及殺菌，每間隔15—20天翻堆1次，每次翻堆時調足土壤含水 量40-50%，連續翻堆2-3次即得覆土材料；
② 覆土培養出菇
打開上述步驟l) a.培養好的菌棒袋口，將步驟①制備好的覆土材料覆蓋在菌棒的表 面，覆土層厚3-8cm，覆土后的菌棒放于塑料泡沫板菇房、磚混菇房以及溫室大棚中培養 出菇；保持菇房、溫室大棚的溫度26-32'C，相對濕度75-95%，光照度50-800LX，保持覆 土層表面濕潤，覆土后10-15天，菌棒覆土層的面上即長出暗褐網柄牛肝菌子實體幼蕾， 繼續生長5-6天子實體發育成熟，每個菌棒生長的子實體幼蕾數1-20個不等，成熟數1-2個.
b. 菌棒脫袋覆土培養出菇
① 培養地田間、圃地熱帶植物樹的行間或溫室大棚；
② 覆土方法在田間、圃地熱帶植物樹的行間及溫室大棚中，挖20-30 cra深，長、寬 隨需求而定的淺溝，溝中澆透水，待土壤充分吸水，土壤濕度60-80%時備用；將上述步驟 1) c.培養好的菌棒脫去塑料薄膜袋后排放于淺溝中，菌棒間間隔2-3cm，中間填入土壤， 然后在菌棒的面上覆土，覆土層厚3-8cm，覆土材料用田間、圃地的細土或上述步驟①制 備的土壤均可，覆土培養出菇的栽培畦上方用塑料膜、竹片搭成小拱棚遮擋雨水并進行遮 蔭；
③ 培養出菇保持覆土層潮濕、疏松，棚內溫度26-32'C，相對濕度70-95%，光照度 100-800LX培養出菇，覆土后20天栽培畦的土面即生長子實體并發育成熟；
c. 接種熱帶經濟作物根系及熱帶花卉植物根系培養出燕
① 接種方法在雨季或其他季節對田間、圃地的土壤澆透水后，挖開菠蘿蜜樹、柚子 樹熱帶作物根部的土壤，露出根系的部分主、側根；挖開南美蟛蜞菊、花生草熱帶花丼植 物根部的土壤，露出根系的部分主、側根；然后將預先培養好的固體菌種掰成團塊狀，接 入主根及側根部，每株接入菌種50 — 500.0g，接種時菌種盡量與植物的莖基及主、側根部 緊密接觸；
② 磁養出菇保持接種樹的根部土壤潮濕，接種后30-60天接種植物根部周圍土壤中 即生長暗褐網柄牛肝菌子實體并發明成熟。
本發明暗褐網柄牛肝菌人工栽培方法，為菌根食用菌人工栽培方法的首創，其特點及 優點如下 '
1、 用純培養菌絲體培養成菌棒，然后對菌棒直接覆土或脫袋覆土后培養出燕，脫離 宿主樹實現了真正意義的人工栽培。
2、 菌棒培養基成份簡單，培養方法簡便，培養時間短培養基配方中只用了簡單的 碳氮源(谷粒、面粉)， 一般的無機鹽(MgS04、 KH2P04 )及橡膠木或其他雜木的鋸木屑 即可進行菌棒培養；用菌袋、 一般培養室(可加溫)可進行菌棒培養；培養需60天菌絲 即長滿菌袋。
3、 子實體培養方法簡便，且出菇整齊出菇率高a、在塑料泡沫板燕及磚混恭房、溫 室大棚中即可進行菌棒覆土培養出菇；b、在田間、圃地及溫室大棚中即可進行菌棒脫袋覆土培養出菇；C、用固體菌種接種熱帶經濟作物及花卉植物根系即可培養出燕。
4、培養出菇時間短菌棒覆土培養出菇僅需10-15天；菌棒脫袋覆土培養出燕2'0天;
用固體菌種接種熱帶經濟作物及花卉植物根系培養出燕30 — 60天。
本發明直接將菌棒覆土后放于菇房或溫室大棚中培養出菇，以及將菌棒脫袋后在田
間、圃地、溫室大棚中覆土培養出菇的方法適用于牛肝菌其他種。本發明將暗褐網柄牛肝
固體菌種接種在田間栽培的菠蘿蜜樹、柚子樹等經濟作物的根系上培養出菇的方法適用于
接種于其他任何熱帶經濟作物及花卉植物的根系培養出燕。
具體實施方式
實施例1:
1. 菌棒培養
用以下固體培養基培養暗褐網柄牛肝菌菌棒，菌棒的制備由下述原料及方法配制而成。
1.1原料組成
橡膠木鋸木屑或其他雜木屑 10. 0 kg
谷粒 5. 0 kg
面粉 1.0 kg
MeS04 10. 0 g
KH2P04 lO.Og pH 4.0
1.2配制方法將谷粒稱量放入容器中，加水浸泡10 12h，然后濾除多余水份待用。 準確稱量面粉的量，均勻拌入橡膠木鋸木屑或雜木屑料中，然后加入浸泡濾水后的谷粒， 將MgS04 、 KH2P04用適量的水溶解后噴灑入鋸木屑料堆，水的用量以料堆含水量60.0% 為準，最后將各種原料均勻拌勻混合，培養基自然PH4.0 6.0，得固體培養基。將配制好 的固體培養基分裝于17X30 cm的聚丙烯菌種袋中，每袋700ml， 12(TC滅菌60分鐘，.待冷 卻后備用；
1.3接種培養將預先培養好的暗褐網柄牛肝菌液體菌種接種于步驟"1.2"中的袋裝 培養料基質中，接種后將培養袋置于26 3(TC的培養室中暗光培養40 60天，菌絲體長 滿菌袋，得菌棒。
2. 人工栽培2.1菌棒覆土培養出菇
2丄1覆土材料制備取表土層20cm-30cm， 土壤團粒結構性好，富含腐殖質的菜園土 作覆土材料，將取出的土壤在烈日下曝曬至干燥，然后打碎，去雜質，用孔徑1.5cm的篩 網過篩，去除粗土粒，拌入20%的農家肥，調土壤含水量40%-60%，面上覆蓋雙層塑料薄 膜，然后堆放于曬場中自然發酵及殺菌，時間40-60天，間隔15天進行1次翻堆，連續 2-3次，每次翻堆時調足土壤含水量40%-60%覆土材料。
2丄2菌棒覆土培養出菇
打開上述步驟"1.3"培養好的菌棒袋口，將步驟"2.2.1"制備的菜園土覆土材料覆 蓋于菌棒的表面，覆土層厚4-6cm，覆土后的菌棒放于塑料泡沫板菇房中培養出菇。保持 菇房溫度26-3(TC，相對濕度85%-95%，光照度100-300LX，保持覆土層表面濕潤。覆土后 10 —12天，菌棒覆土層面上即生長暗褐網柄牛肝菌子實體幼蕾，繼續生長5-6天子實體 發育成熟。每個菌袋生長的子實體幼蕾數l-20個不等，成熟數l-2個。
2丄3人工培養子實體種的鑒定
2丄3.1形態鑒定人工培養的子實體形態，其特征如下菌蓋黃褐色，黑褐色，5-14 cm，蓋中央凸起，成熟后平展，無裂紋，蓋緣多上翹。蓋肉厚2-6cm，松軟，海綿質，淡黃 色，傷后很少呈現淡藍色。菌孔單孔型，黃色。菌管長1.0-2.0cm，孔口近圓型至多角型， 黃色或黑褐色。菌柄粗壯，基部往往膨大呈臼狀，2-3X6-9cm，幾與菌蓋同色。擔孢子長 梨型，長橢圓型，7.5-13.0umX5.0-7.45um，橄欖綠色。綜上所述，人工培養的子實體與野 生子實體型態特征一致，可鑒定為同一個種。人工培養的子實體憑證標本放在中國科學院 昆明植物研究所真菌標本室，編號為HKAS 49706。
2丄3.2分子鑒定分子鑒定人工培養的子實體，其ITS序列與野生暗褐網柄牛肝菌子實 體的同源性在99%以上，可以鑒定為同一個種。
2.2菌棒脫袋覆土培養出菇
2.2.1培養地田間菠蘿蜜樹的行間
2.2.2覆土方法在田間菠蘿蜜樹的行間，挖20-30 cm深，長5m、寬60cra的淺溝，溝 中澆透水，待土壤充分吸水，土壤濕度為60-80%備用。將上述步驟"1.3"培養好的菌棒 脫去塑料薄膜袋后排放于淺溝中，菌棒間間隔2-3cm，中間填入土壤，然后在菌棒的面上 覆土，覆土層厚4-6cm。覆土材料用菠蘿蜜樹行間的細土。覆土培養出菇的栽培畦上方用 塑料膜、竹片搭成小拱棚遮擋雨水并進行遮蔭。
92.2.3培養出燕保持覆土層潮濕、疏松，棚內溫度26-32'C，相對濕度80-90%，光照 度10O-300LX培養出菇。覆土后20d栽培畦土面生長子實體并發育成熟。 2.3接種田間栽培的菠蘿蜜樹根系培養出菇
2.3.1接種方法在雨季田間土壤濕透后，挖開菠蘿蜜樹的根部土壤，露出根系的部分 主、側根；然后將預先培養好的固體菌種掰成團塊狀，接入主根及側根部。每株接入菌種 200.0 g，接種時菌種盡量與菠蘿蜜樹的莖基及主、側根緊密接觸。
2.3.2培養出燕保持接種樹的根部土壤潮濕，接種后30天菠蘿蜜樹根部周圍土壤中 即生長暗褐網柄牛肝菌子實體并發育成熟。
實施例2:
1. 菌棒培養
'用以下固體培養基培養暗褐網柄牛肝菌菌棒，菌棒的制備由下述原料及方法配制而成。
1.1原料組成
橡膠木鋸木屑或其他雜木屑 15.0 kg
谷粒 8.0 kg
面粉 3.0 kg
MsS04 15.0 g
KH2P04 15.0g pH 5.0 以下配制方法及接種培養同實施例1。
2. 人工栽培
2.1菌棒覆土培養出菇
2丄1覆土材料制備以果園土作覆土材料，制備方法同實施例l。 2丄2菌棒覆土培養出菇
將培養好的菌棒打開袋口，將制備好的覆土材料直接覆蓋于菌棒的表面，覆土層厚4-6 cm，覆土后的菌棒放于磚混菇房中培養出菇。其余管理方法同實施例l。 2.2菌棒脫袋覆土培養出菇 2.2.1培養地田間柚子樹的行間。
2.2.2覆土方法在田間柚子樹的行間，挖20-30 cm深，長5m、寬60cm的淺溝，溝中澆透水，待土壤充分吸水后將培養好的菌棒脫去塑料薄膜袋后排放于淺溝中，菌棒間間隔 2-3 cm，中間填入土壤，然后在菌棒的面上覆土，覆土層厚6 cra。覆土材料用柚子樹行間 的細土。栽培畦上方用塑料膜、竹片搭成小拱棚遮擋雨水并進行遮蔭。
2.2.3培養出菇同實施例l。
2.3接種田間鳳凰樹根系培養出燕
每株接入菌種100.0 g，其余接種方法與培養出燕同實施例1。 實施例3
1. 菌棒培養
用以下固體培養基培養暗褐網柄牛肝菌菌棒，菌棒的制備由下述原料及方法配制而成。
1.1原料組成
橡膠木鋸木屑或其他雜木屑 20.0 kg
谷粒 10.0 kg
面粉 5.0 kg
M^S04 20.0 g
KH2P04 20.0g pH 5.0 以下配制方法及接種培養同實施例1。
2. 人工栽培
2.1菌棒覆土培養出菇
2丄1覆土材料制備以稻田土作覆土材料，制備方法同實施例l。 2丄2菌棒覆土培養出菇
將培養好的菌棒打開袋口，將制備好的覆土材料直接覆蓋于菌棒的表面，覆土層厚6 cm，覆土后的菌棒放于溫室大棚中培養出菇。其余管理方法同實施例l。 2.2菌棒脫袋覆土培養出菇 2.2.1培養地溫室大棚。
2.2.2覆土方法在溫室大棚的地面上，挖10 cm-20 cm深，長不限、寬60 cm-80 cm的 淺溝，溝中澆透水，待土壤充分吸水后將培養好的菌棒脫去塑料薄膜袋后排放于淺溝中， 菌棒間間隔2 cm-3 on，中間填入土壤，然后在菌棒的面上及四周覆土，覆土層厚4 cm-6 cm。覆土材料用預先制備的覆土材料。
2.2.3培養出菇方法同實施例一。
2.3接種熱帶花卉南美蟛蜞菊根系培養出菇
每株接入菌種100.0 g,其余接種方法與培養出菇同實施例1。
權利要求
1.一種暗褐網柄牛肝菌人工栽培方法，其特征在于按以下步驟及方法進行1)菌棒培養用以下固體培養基培養暗褐網柄牛肝菌菌棒，菌棒的制備由下述原料及方法配制而成a.原料組成橡膠木鋸木屑或其他雜木屑 10.0～20.0kg谷粒 1.0～10.0kg面粉 1.0～5.0kgMgSO4 10.0～20.0gKH2PO4 10.0～20.0gpH 4.0～6.0b.配制方法將谷粒稱量后放入容器中，加水浸泡10～12h，然后濾除多余水份待用；準確稱量面粉的量，均勻拌入橡膠木鋸木屑或雜木屑料中，然后加入浸泡濾水后的谷粒，將MgSO4、KH2PO4用適量的水溶解后噴灑入鋸木屑料堆，水的用量以料堆含水量60.0％為準，最后將各種原料均勻拌勻混合，培養基PH 4.0～6.0，即得固體培養基；將配制好的固體培養基分裝于聚丙烯菌種袋中，120℃滅菌60分鐘，待冷卻后備用；c.接種培養將預先培養好的暗褐網柄牛肝菌液體菌種接種于步驟b中的袋裝培養基質中，接種后將培養袋置于26～30℃的培養室中暗光培養40天～60天，菌絲體長滿菌袋，得菌棒；2)人工栽培a.菌棒覆土培養出菇①覆土材料制備菜園土、果園土、稻田土等作均可作覆土材料，取表層20-30cm的土層，將取出的土壤在烈日下曝曬至干燥，然后打碎，去雜質，用孔徑1.5cm的篩網過篩，去除粗土粒，調土壤含水量40-50％，拌入10％的農家肥，堆放于曬場中40-60天，面上覆蓋雙層塑料薄膜自然發酵及殺菌，每間隔15-20天翻堆1次，每次翻堆時調足土壤含水量40-50％，連續翻堆2-3次即得覆土材料；②覆土培養出菇打開上述步驟1)a.培養好的菌棒袋口，將步驟①制備好的覆土材料覆蓋在菌棒的表面，覆土層厚3-8cm，覆土后的菌棒放于塑料泡沫板菇房、磚混菇房以及溫室大棚中培養出菇；保持菇房、溫室大棚的溫度26-32℃，相對濕度75-95％，光照度50-800LX，保持覆土層表面濕潤，覆土后10-15天，菌棒覆土層的面上即長出暗褐網柄牛肝菌子實體幼蕾，繼續生長5-6天子實體發育成熟；b.菌棒脫袋覆土培養出菇①培養地田間、圃地熱帶植物樹的行間或溫室大棚；②覆土方法在田間、圃地熱帶植物樹的行間及溫室大棚中，挖20-30cm深，長、寬隨需求而定的淺溝，溝中澆透水，待土壤充分吸水，土壤濕度60-80％時備用；將上述步驟1)c.培養好的菌棒脫去塑料薄膜袋后排放于淺溝中，菌棒間間隔2-3cm，中間填入土壤，然后在菌棒的面上覆土，覆土層厚3-8cm，覆土材料用田間、圃地的細土或上述步驟①制備的土壤均可，覆土培養出菇的栽培畦上方用拱棚遮擋雨水并進行遮蔭；③培養出菇保持覆土層潮濕、疏松，棚內溫度26-32℃，相對濕度70-95％，光照度100-800LX培養出菇，覆土后20天栽培畦的土面即生長子實體并發育成熟；c.接種熱帶經濟作物根系及熱帶花卉植物根系培養出菇①接種方法在雨季或其他季節對田間、圃地的土壤澆透水后，挖開菠蘿蜜樹、柚子樹等熱帶作物根部的土壤，露出根系的部分主、側根；挖開南美蟛蜞菊、花生草等熱帶花卉植物根部的土壤，露出根系的部分主、側根；然后將預先培養好的固體菌種掰成團塊狀，接入主根及側根部，每株接入菌種50-500.0g，接種時菌種盡量與植物的莖基及主、側根部緊密接觸；②培養出菇保持接種樹的根部土壤潮濕，接種后30-60天接種植物根部周圍土壤中即生長暗褐網柄牛肝菌子實體并發明成熟。
全文摘要
本發明涉及暗褐網柄牛肝菌在菇房、溫室大棚及田間、圃地的人工栽培方法。其特征在于先培養菌棒，然后，①菌棒覆土后在菇房、溫室大棚培養出菇，覆土10-15天即生長暗褐網柄牛肝菌子實體并發育成熟；②菌棒脫袋后在田間、圃地及溫室大棚中覆土培養出菇，覆土20-25天生長暗褐網柄牛肝菌子實體并發育成熟；③將固體菌種接種在田間栽培的熱帶經濟作物及花卉植物根系上培養出菇，接種30-60天即生長暗褐網柄牛肝菌子實體并發育成熟，通過以上方法實現暗褐網柄牛肝人工栽培并快速實現產業化的目的。其培養方法簡便，培養時間短，且出菇整齊出菇率高。
文檔編號C05G3/00GK101524035SQ200910094390
公開日2009年9月9日 申請日期2009年4月23日 優先權日2009年4月23日
發明者何明霞, 靜 劉, 張春霞, 旸 曹, 王文兵, 紀開萍 申請人:云南省熱帶作物科學研究所