專利名稱：：微生物活菌飼用添加劑及制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種飼料添加劑，尤其涉及一種微生物活菌飼用添加劑及制作方法。
背景技術(shù)：
：目前，在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中廣泛地大量使用抗生素，用來(lái)治療牲畜疾病和提高其生產(chǎn)性能，然而，隨著抗生素使用量的的增加，諸如促進(jìn)耐藥菌抹增加，破壞了動(dòng)物體內(nèi)正常微生物群，導(dǎo)致微生態(tài)平衡失調(diào)；影響動(dòng)物的免疫功能，使機(jī)體抗病能力減弱；增加易感生境的敏感性，促進(jìn)機(jī)體的外源性感染和內(nèi)源性感染等弊病日益顯露。此外，抗生素等藥物會(huì)在畜產(chǎn)品(肉、蛋、奶)中的殘留，導(dǎo)致威脅人類的身體健康；對(duì)人和動(dòng)物致畸、致殘，甚至導(dǎo)致人畜中毒死亡。尤其是在1981年英國(guó)發(fā)生大量使用"三合一"針劑注射抗生素、激素引發(fā)的"瘋牛病"事件以來(lái)，世界各國(guó)，特別是歐美、日本等發(fā)達(dá)國(guó)家紛紛采取官方強(qiáng)硬措施，對(duì)飼用抗生素的種類、使用方法、劑量和配伍等方面嚴(yán)加限制。2005年以后，歐盟國(guó)家規(guī)定在動(dòng)物飼料中禁止添加任何抗生素，同時(shí)積極鼓勵(lì)大力開展研究藥用飼料添加劑的替代品和倡導(dǎo)綠色安全的飼料添加劑。從上個(gè)世紀(jì)初，人們就開始認(rèn)識(shí)到微生物及其產(chǎn)物能夠?qū)C(jī)體產(chǎn)生影響，并且從細(xì)菌、真菌、酵母等微生物中篩選得到了許多被認(rèn)為是益生菌的微生物。選擇適合的微生物種類并采用科學(xué)的比例作為活菌飼料添加劑，可達(dá)到維持動(dòng)物體內(nèi)微生態(tài)系統(tǒng)的平衡，使幼齡家畜建立起良好的腸道微生物區(qū)系，減少牲畜消化類型的疾病發(fā)生，降低動(dòng)物生產(chǎn)的損失，并具有通過(guò)幫助恢復(fù)動(dòng)物體內(nèi)^t生態(tài)系統(tǒng)的平衡部分替代抗菌藥物，達(dá)到治療動(dòng)物疾病的目的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的主要目的在于解決上述畜牧養(yǎng)殖業(yè)中的問題，提供一種預(yù)防動(dòng)物消化道疾病，增進(jìn)牲畜進(jìn)食量，提高飼料消化率的微生物活菌飼用添加劑及制作方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是由凝結(jié)芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、納豆芽孢桿菌、黑曲霉和產(chǎn)朊假絲酵母組成。本發(fā)明采用乳酸菌、芽孢桿菌、黑曲霉和酵母四類微生物，通過(guò)活菌增殖培養(yǎng)、低溫干燥制成活菌劑。乳酸菌可產(chǎn)生乳酸、乙酸、多種維生素、抗生物物質(zhì)和促生長(zhǎng)因子，為動(dòng)物提供營(yíng)養(yǎng)，調(diào)整菌群，抑制病原菌，增強(qiáng)抗病能力。乳酸菌產(chǎn)生的揮發(fā)性脂肪酸為大腸粘膜代謝提供了能源，也使腸道pH值和氧化還原電勢(shì)降低，有利于礦物質(zhì)鈣、鐵、鎂、鋅等的吸收。乳酸菌能產(chǎn)生類細(xì)菌素物質(zhì)，對(duì)病原菌有抑制作用。嗜酸乳桿菌產(chǎn)生的分子量為3500的肽，可以抑制大腸桿菌DNA的合成，可抑制一系列革蘭氏陽(yáng)性和陰性病原4體的生長(zhǎng)。嗜酸乳桿菌可以產(chǎn)生H202，抑制葡萄球菌等致病菌的生長(zhǎng)繁殖，還能產(chǎn)生雙乙酰，對(duì)許多病原菌有抑制作用。提高動(dòng)物免疫力，用乳酸桿菌發(fā)酵產(chǎn)物飼喂斷奶仔豬，仔豬血清中IgG水平明顯升高。芽孢桿菌是需氧菌，培養(yǎng)要求的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)簡(jiǎn)單，其產(chǎn)生內(nèi)生孢子，抗逆性強(qiáng)，能耐酸、堿和高溫、高壓，在飼料加工和儲(chǔ)存過(guò)程中不易失活。芽孢桿菌在生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中能產(chǎn)生多種酶，通常是畜禽類動(dòng)物所不具有的如果膠酶、纖維素酶、葡聚糖酶等，從而可補(bǔ)充畜禽類動(dòng)物腸道內(nèi)源酶的不足，提高飼料轉(zhuǎn)化率。還能產(chǎn)生植酸酶，促進(jìn)動(dòng)物對(duì)植酸磷的利用和對(duì)脂肪的消化吸收。產(chǎn)生的氨基氧化酶及分解硫化氫的酶類，可將吲咮類氧化成無(wú)毒、無(wú)害的物質(zhì)，從而降低畜禽舍內(nèi)氨氣、硫化氫的濃度和臭味，減少環(huán)境污染。此外，通過(guò)生物奪氧而扶持厭氧菌的生長(zhǎng)，為維持其腸道菌群的微生態(tài)平衡起重要作用。酵母只是零星存在于動(dòng)物腸道微生物群落中，主要調(diào)控胃腸內(nèi)容物發(fā)酵，減少乳酸鹽的產(chǎn)生，提高pH值的穩(wěn)定性，促進(jìn)乳酸菌、纖維素菌等有益菌群生長(zhǎng)繁殖，提高活力、增加胃腸道中酵母、乳酸菌、纖維分解菌的數(shù)量，促進(jìn)胃腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解、合成、消化、吸收和利用，從而增加采食量，提高飼料利用率和生產(chǎn)性能。黑曲霉菌是存在于土壤中的微生物，不是動(dòng)物腸道中的正常微生物，作為飼料的添加劑，可提高家禽、家畜的生產(chǎn)性能，尤其是反芻動(dòng)物。黑霉菌能產(chǎn)生纖維素酶，有利于反芻動(dòng)物對(duì)纖維素的消化和吸收，而且能透過(guò)植物表皮角質(zhì)層屏障，破壞纖維素的結(jié)構(gòu)完整性，降解含木質(zhì)素的植物細(xì)胞壁，使動(dòng)物更有效的消化。黑曲霉還能產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶和果膠酶，在飼料成分復(fù)雜或粗飼料成分較多的情況下，其作用更為明顯。凝結(jié)芽孢桿菌活菌粉1.5-2.5份、嗜酸乳桿菌活菌粉0.5-2.0份、植物乳桿菌活菌粉1.0-2.5份、納豆芽孢桿菌活菌粉0.5-2.5份、產(chǎn)朊假絲酵母活菌粉0.5-1.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉2-4.5份，每克活菌含量分別為凝結(jié)芽孢桿菌>1.0xl01Qcfu/g;嗜酸乳桿菌>1.0x108cfti/g;植物乳桿菌>1.0x108cfii/g;納豆芽孢桿菌>1.0x1010cfu/g;黑曲霉孢子>1.0x105cfU/g;產(chǎn)朊假絲酵母>1.0x108cfu/g。成品指標(biāo)產(chǎn)品活菌數(shù)凝結(jié)芽孢桿菌>1.0xio1GcfU/g;嗜酸乳桿菌>1.0><108cfli/g;植物乳桿菌>1.0x108cfU/g;納豆芽孢桿菌>1.0x101Gcfu/g;黑曲霉孢子>1.0x105cfU/g;產(chǎn)朊假絲酵母>1.0x108cfU/g。感官指標(biāo)產(chǎn)品為灰白色粉劑，色澤均一；理化指標(biāo)粒度制劑能通過(guò)40目篩；水分含水量低于8%。飼料添加劑的摻量為幼年牲畜每天食用糧食類飼料重量的0.12%-0.40%，成年牲畜每天食用糧食類飼料重量的0.015%-0.05%。本發(fā)明采用乳酸菌、芽孢桿菌、黑曲霉和酵母四類微生物，通過(guò)活菌增殖培養(yǎng)、低溫干燥制成活菌劑，再根據(jù)不同牲畜的生理特點(diǎn)配制成飼料添加劑，在預(yù)防動(dòng)物消化道疾病，增進(jìn)牲畜進(jìn)食量，提高飼料消化率的應(yīng)用效果顯著。幼年牲畜主要指仔豬、仔雞、幼年奶牛等，成年牲畜是指已成年的成豬、成雞、成年奶牛等。把凝結(jié)芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、納豆芽孢桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母的各菌體單菌抹斜面菌種培養(yǎng)各菌種使用相應(yīng)培養(yǎng)基并加入1.5-2.5%瓊脂，在30-40。C條件下靜止培養(yǎng)20-48小時(shí)，放入4。C水箱保存。液體一級(jí)種子培養(yǎng)為搖瓶培養(yǎng)，取250ml三角瓶加入種子培養(yǎng)基50-100ml，取斜面種子菌種接入培養(yǎng)基中30-40。C,100-220r/minpm，培養(yǎng)30h。液體二級(jí)培養(yǎng)10L自動(dòng)種子發(fā)酵罐，裝種子培養(yǎng)基5-8L,接重量5-10%,30-40°C，攪拌速度50-100轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)30h。發(fā)酵罐單菌林純?cè)鲋撑囵B(yǎng)各菌種的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基(按每升水中加入的原料克計(jì))凝結(jié)芽孢桿菌蛋白胨5-15g,酵母膏5-15g，葡萄糖3-9g，MgS04'711200.5-1.5g,K2HP04l-3g，MnSO450pg,pH7.0。嗜酸乳桿菌胰蛋白胨2.5-7.5g，蛋白胨5-15g，葡萄糖5-15g，乳糖2.5-7.5g,酵母浸出粉4-10gpH7.0。植物乳桿菌蛋白胨5-15g,牛肉膏5-15g,酵母膏3-7g，葡萄糖15-25g，杵檬酸二鈉1.5-3.5g,K2HP04l-3g,醋酸鈉2.5-7.5g，MgS04.7H20l-3g，MnSO4'4H2O0.01g，吐溫lOml。納豆辛孢桿菌胰蛋白胨3.5-6.5g，蛋白胨7.5-12.5g，葡萄糖7.5-12.5g,乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉5-9g,pH7.0。產(chǎn)朊假絲酵母葡萄糖15g-45g，酵母粉5g-15g，蛋白胨5g-15g，(NH4)2S045g-15g，pH6.5。各發(fā)酵罐單菌抹純培養(yǎng)條件溫度25-40°C，通風(fēng)量9-13m3/h,罐壓0.02-0.09MPa，接種量1.5-7.5%，時(shí)間19-72小時(shí)，發(fā)酵液活菌數(shù)達(dá)到101()-1013cfU/ml。黑曲霉斜面菌種培養(yǎng)黑曲霉菌種使用相應(yīng)培養(yǎng)基，并加入1.5-2.5%瓊脂，在28-30。C條件下靜止培養(yǎng)20-48小時(shí)，放入4'C水箱保存。搖瓶放大培養(yǎng)，培養(yǎng)基(按每升水中加入的原料克數(shù)計(jì))稻草粉1015克，麩皮1015克，葡萄糖58克，酵母粉13克，磷酸氫二鉀3.64.6克，七水硫酸鎂1.5-2.5克，pH5.0。培養(yǎng)基成份配比物料分裝入三角瓶中，每瓶100毫升，然后置于高壓滅菌鍋中，121°C，滅菌30分鐘，自然冷卻后接種黑曲霉菌種。取黑曲霉菌斜面孢子接種于500毫升三角瓶搖床振蕩培養(yǎng)，，溫度28-30。C，轉(zhuǎn)速180-250轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)48-60h。固體放大培養(yǎng)，茄子瓶或大錐形瓶固體放大培養(yǎng)培養(yǎng)基(按每升水中加入的原料克數(shù)計(jì))米糠120-150克，稻草粉70-100克，麩皮200-250克，磷酸氫二鉀3.6-4.6克，七水硫酸鎂1.5-2.5克，pH5.0。按培養(yǎng)基成份配比物料1升茄子瓶或2-3升的大錐形瓶中，每瓶裝150-250克，經(jīng)121。C，滅菌45分鐘，自然冷卻后接種黑曲霉菌種。取黑曲霉搖瓶培養(yǎng)好的種子液接種于1升茄子瓶或2-3升的大錐形瓶?jī)?nèi)增殖培養(yǎng)，培4溫度28-30。C，接種量3-5%(V/W),時(shí)間60-72小時(shí)，然后于50。C干燥箱干燥，粉碎過(guò)40目篩，每克干培養(yǎng)物(干曲)中孢子數(shù)目達(dá)到109"Q個(gè)。本發(fā)明所用菌種來(lái)源和菌種相應(yīng)使用的斜面培養(yǎng)基見下表，<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>把凝結(jié)芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、納豆芽孢桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母各單菌林發(fā)酵結(jié)束后的純培養(yǎng)液，經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)流化干燥造粒設(shè)備，以淀粉為載體制成固體菌粉；設(shè)備預(yù)熱，高溫干燥空氣(140°C)在系統(tǒng)內(nèi)循環(huán)，實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)內(nèi)的滅菌15分鐘，滅菌達(dá)到工作要求后啟動(dòng)原料輸送系統(tǒng)，原料經(jīng)霧化器噴入干燥器內(nèi)，同時(shí)高速吹入溫度45-55。C的熱氣流，直接干燥成粉，每1噸單菌林純培養(yǎng)物(液體)干燥時(shí)加入10-20公斤載體，經(jīng)干燥后得60-70公斤菌粉，每克干菌粉活菌數(shù)達(dá)到101G-1013cfii/g;黑曲霉固態(tài)發(fā)酵擴(kuò)大培養(yǎng)后，于干燥箱內(nèi)5(TC干燥，粉碎過(guò)40目篩，每克干培養(yǎng)物(干曲)中孢子數(shù)目達(dá)到109—1()個(gè)；將凝結(jié)芽孢桿菌活菌粉1.5-2.5份、嗜酸乳桿菌活菌粉0.5-2.0份、植物乳桿菌活菌粉1.0-2.5份、納豆芽孢桿菌活菌粉0.5-2.5份、產(chǎn)朊假絲酵母活菌粉0.5-1.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉2-4.5份，按比例混合均勻，制成成品，包裝入庫(kù)。根據(jù)不同種類的牲畜以及其體質(zhì)生理狀態(tài)配置微生物活菌制劑，見下表。牲畜飼料微生物活菌制劑配比表凝結(jié)芽嗜酸乳植物乳納豆芽黑曲霉產(chǎn)朊假絲共計(jì)動(dòng)物孢桿菌桿菌粉桿菌粉孢桿菌干曲粉酵母菌粉(克)粉(份)(份)(份)粉(份)(份)(份)仔豬1.51.51.52.52110成年豬2111.531.510仔雞212.5220.510成雞1.50.511.541.510牛犢2,511.50.540.510成年奶牛1.5210.54.50.510本發(fā)明作為飼料添加劑預(yù)防幼畜腹瀉和增加抵抗力方面的應(yīng)用進(jìn)行了對(duì)比實(shí)驗(yàn)。作為飼料添加劑的用法仔雞以每日食用飼料重量的0.2-0.4%加入到仔雞日糧中，仔雞出殼后第2-3天開始伺喂至20天停止。成雞以每日食用飼料重量的0.04-0.05%加入飼料中。仔豬以i日食用飼料重量的0.12-0.25%加入到仔豬日糧中，仔豬出生后第五天開始飼喂，連續(xù)飼喂服用20-35天。成豬以每日食用飼料重量的0.02-0.025%加入飼料中。牛犢以每日食用伺料中粉狀精飼料重量的0.13-0.26%加入到牛犢精飼料中，從牛犢出生后第7天開始，連續(xù)服用35至50天。成年牛以每日食用飼料中粉狀精飼料重量的0.015-0.02%加入飼料中。實(shí)驗(yàn)結(jié)果i明，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比較，實(shí)驗(yàn)組顯著提高幼畜體質(zhì)，腹渴癥狀和白痢等患病率明顯降低。參見下列對(duì)照表。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組喂養(yǎng)效果表項(xiàng)目幼畜種類試驗(yàn)頭數(shù)(只數(shù))試驗(yàn)時(shí)間(天)腹瀉發(fā)病率％平均曰增重(克)平均曰增中提高率％料肉比料肉比降低率%對(duì)照組仔雞3002033.6534.1702.460實(shí)驗(yàn)組仔雞3002016.7041.7622.211.9819.51對(duì)照組仔豬1003023467.4602.380實(shí)驗(yàn)組仔豬100307503,737.761.9617.65對(duì)照組牛犢304019967.8602.730實(shí)驗(yàn)組牛犢304081006.854.022.2318.32本發(fā)明是微生物活菌飼用添加劑及制作方法。組方合理，制作方法科學(xué)，使用范圍廣泛，操作簡(jiǎn)單，容易掌握，成本低，可用于各種畜禽作為祠用添加劑，提高伺料添加劑的利用率，具有增強(qiáng)畜禽抗病的作用。目前，活菌劑的生產(chǎn)均采用離心冷凍干燥的方式，生產(chǎn)成本高，能耗大，排放大量離心后8廢棄的發(fā)酵液，并且產(chǎn)品的活菌數(shù)最高達(dá)到109-101QcfU/g。本發(fā)明采用旋轉(zhuǎn)流化干燥造粒設(shè)備，在40-5(TC條件制備活菌粉，菌粉易保存，溶解性好，生產(chǎn)效率高，損失小，無(wú)殘留液體排放，實(shí)現(xiàn)潔凈化生產(chǎn)，產(chǎn)品的活菌數(shù)高達(dá)到1010-1013cfU/g。以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明詳細(xì)說(shuō)明。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1(高劑量按重量比每份以lg計(jì))凝結(jié)芽孢桿菌活菌粉2.5份、嗜酸乳桿菌活菌粉2.0份、植物乳桿菌活菌粉2.5份、納豆芽孢桿菌活菌粉2.5份、產(chǎn)朊假絲酵母活菌粉1.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉4.5份，每克活菌含量分別為凝結(jié)芽孢桿菌》1.0x101GcfU/g;嗜酸乳桿菌》1.0xl08cfu/g;植物乳桿菌>1.0x108cfu/g;納豆芽孢桿菌>1.0xl010cfu/g;黑曲霉孢子>1.0x105cfii/g;產(chǎn)朊假絲酵母>1.0x108cfii/g，每克干菌粉活菌數(shù)達(dá)到10"-10"cfU/g。成品指標(biāo)產(chǎn)品活菌數(shù)凝結(jié)芽孢桿菌>1.0xio1Gcfii/g;嗜酸乳桿菌》1.0x108cfii/g;植物乳桿菌>1.0x108cfu/g;納豆芽孢桿菌>1.0x101Gcfu/g;黑曲霉孢子>1.0x105cfU/g;產(chǎn)朊假絲酵母>1.0x108cfii/g。感官指標(biāo)產(chǎn)品為灰白色粉劑，色澤均一；理化指標(biāo)粒度制劑能通過(guò)40目篩；水分含水量低于8%。實(shí)施例2(低劑量按重量比每份以lg計(jì))凝結(jié)芽孢桿菌活菌粉1.5份、嗜酸乳桿菌活菌粉0.5份、植物乳桿菌活菌粉1.0份、納豆芽孢桿菌活菌粉0.5份、產(chǎn)朊假絲酵母活菌粉0.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉2份，每克活菌含量分別為凝結(jié)芽孢桿菌》1.0x1010cfti/g;嗜酸乳桿菌>1.0xl08cfU/g;植物乳桿菌>1.0xl08cfii/g;納豆芽孢桿菌>1.0xl010cfU/g;黑曲霉孢子>1.0x105cfu/g;產(chǎn)朊假絲酵母>1.0x108cfU/g，每克干菌粉活菌數(shù)達(dá)到10"-10"cfU/g。成品指標(biāo)產(chǎn)品活菌數(shù)凝結(jié)芽孢桿菌>1.0xio1Qcfii/g;嗜酸乳桿菌》1.0x108cfU/g;植物乳桿菌>1.0x108cfu/g;納豆芽孢桿菌>1.0x101Qcfu/g;黑曲霉孢子>1.0x105cfU/g;產(chǎn)朊假絲酵母>1.0x108cfii/g。感官指標(biāo)產(chǎn)品為灰白色粉劑，色澤均一；理化指標(biāo)粒度制劑能通過(guò)40目篩；水分含水量低于8%。實(shí)施例3(中等劑量按重量比每份以lg計(jì))凝結(jié)芽孢桿菌活菌粉-2.0份、嗜酸乳桿菌活菌粉1.25-.0份、植物乳桿菌活菌粉1.75份、納豆芽孢桿菌活菌粉1.5份、產(chǎn)朊假絲酵母活茵粉l.O份和黑曲霉活菌粉活菌粉3.25份，每克活菌含量分別為凝結(jié)芽孢桿菌>1.0xl01()cfU/g;嗜酸乳桿菌》1.0xi()8cfii/g;植物乳桿菌>1.0xi08cfU/g;納豆芽孢桿菌〉1.0xio1Gcfu/g;黑曲霉孢子>l.Oxio5cfU/g;產(chǎn)朊假絲酵母>1.0xl08cfu/g，每克干菌粉活菌數(shù)達(dá)到10"-10"cfU/g。成品指標(biāo)產(chǎn)品活菌數(shù)凝結(jié)芽孢桿菌>1.0xlo1Gcfii/g;嗜酸乳桿菌》1.0x108cf\i/g;植物乳桿菌>1.0><l08cfu/g;納豆芽孢桿菌>1.0xlo'°cfu/g;黑曲霉孢子>1.0x105cfu/g;產(chǎn)朊假絲酵母>1.0x108cfu/g。感官指標(biāo)產(chǎn)品為灰白色粉劑，色澤均一；理化指標(biāo)粒度制劑能通過(guò)40目篩；水分含水量低于8%。實(shí)施例4幼年牲畜飼料添加劑的摻量為每天食用糧食類飼料重量的0.12%-0.40%實(shí)施例5成年牲畜飼料添加劑的摻量為每天食用糧食類飼料重量的0.015%-0.05%。實(shí)施例6把凝結(jié)芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、納豆芽孢桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母的各菌體單菌抹斜面菌種培養(yǎng)各菌種使用相應(yīng)培養(yǎng)基并加入1.5-2.5%瓊脂，在30-40'C條件下靜止培養(yǎng)20-48小時(shí)，放入4。C冰箱保存。液體一級(jí)種子培養(yǎng)為搖瓶培養(yǎng)，取250ml三角瓶加入種子培養(yǎng)基50-100ml，取斜面種子菌種接入培養(yǎng)基中30-40°C，100-220r/minpm，培養(yǎng)30h。液體二級(jí)培養(yǎng)10L自動(dòng)種子發(fā)酵罐，裝種子培養(yǎng)基5-8L，接重量5-10%,30-4CTC,攪拌速度50-100轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)30h。發(fā)酵罐單菌抹純?cè)鲋撑囵B(yǎng)各菌種的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基(按每升水中加入的原料克計(jì))凝結(jié)芽孢桿菌蛋白胨5-15g，酵母膏5-15g，葡萄糖3-9g，MgS04'7H200.5-1.5g,K2HP04l-3g,MnSO450/xg，pH7.0。嗜酸乳桿菌胰蛋白胨2.5-7.5g，蛋白胨5-15g,葡萄糖5-15g,乳糖2.5-7.5g,酵母浸出粉4-10gpH7.0。植物乳桿菌蛋白胨5-15g,牛肉膏5-15g,酵母膏3-7g，葡萄糖15-25g,檸檬酸二鈉1.5-3.5g，K2HP04l-3g，醋酸鈉2.5-7.5g,MgS04'7H20l-3g，MnSO4'4H2O0.01g,吐溫10ml。納豆芽孢桿菌胰蛋白胨3.5-6.5g，蛋白胨7.5-12.5g，葡萄糖7.5-12.5g,乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉5-9g,pH7.0。產(chǎn)朊假絲酵母葡萄糖15g-45g，酵母粉5g-15g，蛋白胨5g-15g，(NH4)2S045g-15g，pH6.5。各發(fā)酵罐單菌林純培養(yǎng)條件溫度25-40°C,通風(fēng)量9-13m3/h，罐壓0.02-0.09MPa，接種量1.5-7.5%,時(shí)間19-72小時(shí)，發(fā)酵液活菌數(shù)達(dá)到1010-1013cfii/ml。實(shí)施例7黑曲霉斜面菌種培養(yǎng)黑曲霉菌種使用相應(yīng)培養(yǎng)基，并加入1.5-2.5%瓊脂，在28-30'C條件下靜止培養(yǎng)20-48小時(shí)，放入4。C冰箱保存。搖瓶放大培養(yǎng)，培養(yǎng)基(按每升水中加入的原料克數(shù)計(jì))10稻草粉1015克，麩皮1015克，葡萄糖58克，酵母粉13克，磷酸氫二鉀3.64.6克，七水硫酸鎂1.5~2.5克，pH5.0。培養(yǎng)基成份配比物料分裝入三角瓶中，每瓶100毫升，然后置于高壓滅菌鍋中，121匸，滅菌30分鐘，自然冷卻后接種黑曲霉菌種。取黑曲霉菌斜面孢子接種于500毫升三角瓶搖床振蕩培養(yǎng)，溫度28-30。C,轉(zhuǎn)速180-250轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)48-60h。固體放大培養(yǎng)，茄子瓶或大錐形瓶固體放大培養(yǎng)培養(yǎng)基(按每升水中加入的原料克數(shù)計(jì))米糠120-150克，稻草粉70-100克，麩皮200-250克，磷酸氫二鉀3.6-4.6克，七水硫酸鎂1.5-2.5克，pH5.0。按培養(yǎng)基成份配比物料1升茄子瓶或2-3升的大錐形瓶中，每瓶裝150-250克，經(jīng)121'C，滅菌45分鐘，自然冷卻后接種黑曲霉菌種。取黑曲霉搖瓶培養(yǎng)好的種子液接種于1升茄子瓶或2-3升的大錐形瓶?jī)?nèi)增殖培養(yǎng)，培沭溫度28-30。C，接種量3-5%(V/W)，時(shí)間60-72小時(shí)，然后于50'C干燥箱干燥，粉碎過(guò)40目篩，每克干培養(yǎng)物(干曲)中孢子數(shù)目達(dá)到109-1Q個(gè)。實(shí)施例8把凝結(jié)芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、納豆芽孢桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母各單菌林發(fā)酵結(jié)束后的純培養(yǎng)液，經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)流化干燥造粒設(shè)備，以淀粉為載體制成固體菌粉；設(shè)備預(yù)熱，高溫干燥空氣(14(TC)在系統(tǒng)內(nèi)循環(huán)，實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)內(nèi)的滅菌15分鐘，滅菌達(dá)到工作要求后啟動(dòng)原料輸送系統(tǒng)，原料經(jīng)霧化器噴入干燥器內(nèi)，同時(shí)高速吹入溫度45-55'C的熱氣流，直接干燥成粉，每1噸單菌株純培養(yǎng)物(液體)干燥時(shí)加入10-20公斤栽體，經(jīng)干燥后得60-70公斤菌粉，每克干菌粉活菌數(shù)達(dá)到101G-1013cfU/g;黑曲霉固態(tài)發(fā)酵擴(kuò)大培養(yǎng)后，于干燥箱內(nèi)50匸干燥，粉碎過(guò)40目篩，每克干培養(yǎng)物(干曲)中孢子數(shù)目達(dá)到109'1()個(gè)；將凝結(jié)芽孢桿菌活菌粉1.5-2.5份、嗜酸乳桿菌活菌粉0.5-2.0份、植物乳桿菌活菌粉1.0-2.5份、納豆芽孢桿菌活菌粉0.5-2.5份、產(chǎn)朊假絲酵母活菌粉0.5-1.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉24.5份，按比例混合均勻，制成成品，包裝入庫(kù)。附困說(shuō)明圖1微生物活菌飼用添加劑的工藝流程示意圖。權(quán)利要求1、一種微生物活菌飼用添加劑，其特征是由凝結(jié)芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、納豆芽孢桿菌、黑曲霉和產(chǎn)朊假絲酵母組成，凝結(jié)芽孢桿菌活菌粉1.5-2.5份、嗜酸乳桿菌活菌粉0.5-2.0份、植物乳桿菌活菌粉1.0-2.5份、納豆芽孢桿菌活菌粉0.5-2.5份、產(chǎn)朊假絲酵母活菌粉0.5-1.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉2-4.5份，每克活菌含量分別為凝結(jié)芽孢桿菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳桿菌≥1.0×108cfu/g；植物乳桿菌≥1.0×108cfu/g；納豆芽孢桿菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；產(chǎn)朊假絲酵母≥1.0×108cfu/g，每克干菌粉活菌數(shù)達(dá)到1011-1014cfu/g；成品指標(biāo)產(chǎn)品活菌數(shù)凝結(jié)芽孢桿菌≥1.0×1010cfu/g；嗜酸乳桿菌≥1.0×108cfu/g；植物乳桿菌≥1.0×108cfu/g；納豆芽孢桿菌≥1.0×1010cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×105cfu/g；產(chǎn)朊假絲酵母≥1.0×108cfu/g；感官指標(biāo)產(chǎn)品為灰白色粉劑，色澤均一；理化指標(biāo)粒度制劑能通過(guò)40目篩；水分含水量低于8％；飼用添加劑的摻量為幼年牲畜每天食用糧食類飼料重量的0.12％-0.40％，成年牲畜每天食用糧食類飼料重量的0.015％-0.05％。2、一種微生物活菌飼料用添加劑的制作方法，其特征是把凝結(jié)芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、納豆芽孢桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母的各單菌林斜面菌種培養(yǎng)各菌種使用相應(yīng)培養(yǎng)基并加入1.5-2.5%瓊脂，在30-40。C條件下靜止培養(yǎng)20-48小時(shí)，放入4。C冰箱保存；液體一級(jí)種子培養(yǎng)為搖瓶培養(yǎng)，取250ml三角瓶加入種子培養(yǎng)基50-100ml，取斜面種子菌種接入培養(yǎng)基中30-40。C,100-220r/minpm，培養(yǎng)30h;液體二級(jí)培養(yǎng)10L自動(dòng)種子發(fā)酵罐，裝種子培養(yǎng)基5-8L，接重量5-10%,30-40°C，攪拌速度50-100轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)30h;發(fā)酵罐單菌林純?cè)鲋撑囵B(yǎng)各菌種的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基(按每升水中加入的原料克計(jì))凝結(jié)芽孢桿菌蛋白胨5-15g，酵母膏5-15g，葡萄糖3-9g，MgS04'7H200.5畫1.5g，K2HP04l-3g，MnSO450pg,pH7.0;嗜酸乳桿菌胰蛋白胨2.5-7.5g，蛋白胨5-15g，葡萄糖5-15g,乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉4-10gpH7.0;植物乳桿菌蛋白胨5-15g，牛肉膏5-15g,酵母膏3-7g，葡萄糖15-25g，檸檬酸二鈉1.5-3.5g，K2HP04l-3g，醋酸鈉2.5-7.5g,MgS04'7H20l-3g,MnS04'4H20O.Olg,吐溫10ml;納豆芽孢桿菌胰蛋白胨3.5-6.5g，蛋白胨7.5-12.5g，葡萄糖7.5-12.5g，乳糖2.5-7.5g，酵母浸出粉5-9g，pH7.0;產(chǎn)朊假絲酵母葡萄糖15g-45g,酵母粉5g-15g，蛋白胨5g-15g,(NH4)2S045g-15g，pH6.5;各發(fā)酵罐單菌抹純培養(yǎng)條件溫度25-40°C，通風(fēng)量9-13mVh，罐壓0.02-0.09MPa，接種量1.5-7.5%，時(shí)間19-72小時(shí)，發(fā)酵液活菌數(shù)達(dá)到10lu-10"cfii/ml;黑曲霉斜面菌種培養(yǎng)黑曲霉菌種使用相應(yīng)培養(yǎng)基，并加入1.5-2.5%瓊脂，在28-30。C條件下靜止培養(yǎng)20-48小時(shí)，放入4。C冰箱保存；搖瓶放大培養(yǎng)，培養(yǎng)基(按每升水中加入的原料克數(shù)計(jì))稻草粉1015克，麩皮1015克，葡萄糖58克，酵母粉13克，磷酸氫二鉀3.6~4.6克，七水疏酸鎂1.5~2.5克，pH5.0;培養(yǎng)基成份配比物料分裝入三角瓶中，每瓶100毫升，然后置于高壓滅菌鍋中，121°C,滅菌30分鐘，自然冷卻后接種黑曲霉菌種；取黑曲霉菌斜面孢子接種于500毫升三角瓶搖床振蕩培養(yǎng)，溫度28-30。C,轉(zhuǎn)速180-250轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)48-60h;固體放大培養(yǎng)，茄子瓶或大錐形瓶固體放大培養(yǎng)培養(yǎng)基(按每升水中加入的原料克數(shù)計(jì))米糠120-150克，稻草粉70-100克，麩皮200-250克，磷酸氫二鉀3.6-4.6克，七水硫酸鎂1.5-2.5克，pH5.0。按培養(yǎng)基成份配比物料1升茄子瓶或2-3升的大錐形瓶中，每瓶裝150-250克，經(jīng)121。C,滅菌45分鐘，自然冷卻后接種黑曲霉菌種；取黑曲霉搖瓶培養(yǎng)好的種子液接種于l升茄子瓶或2-3升的大錐形瓶?jī)?nèi)增殖培養(yǎng)，培i溫度28-30°C，接種量3-5%(V/W)，時(shí)間60-72小時(shí)，然后于50。C干燥箱干燥，粉碎過(guò)40目篩，每克干培養(yǎng)物(干曲)中孢子數(shù)目達(dá)到109—1()個(gè)；'把凝結(jié)芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、納豆芽孢桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母各單菌抹發(fā)酵結(jié)束后的純培養(yǎng)液，經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)流化干燥造粒設(shè)備，以淀粉為載體制成固體菌粉；設(shè)備預(yù)熱，高溫干燥空氣(140'C)在系統(tǒng)內(nèi)循環(huán)，實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)內(nèi)的滅菌15分鐘，滅菌達(dá)到工作要求后啟動(dòng)原料輸送系統(tǒng)，原料經(jīng)霧化器噴入干燥器內(nèi)，同時(shí)高速吹入溫度45-55。C的熱氣流，直接干燥成粉，每1噸單菌抹純培養(yǎng)物(液體)干燥時(shí)加入10-20公斤載體，經(jīng)干燥后得60-70公斤菌粉，每克干菌粉活菌數(shù)達(dá)到101Q-1013cfU/g;黑曲霉固態(tài)發(fā)酵擴(kuò)大培養(yǎng)后，于干燥箱內(nèi)50。C干燥，粉碎過(guò)40目篩，每克干培養(yǎng)物(干曲)中孢子數(shù)目達(dá)到109-1()個(gè)；將凝結(jié)芽孢桿菌活菌粉1.5-2.5份、嗜酸乳桿菌活菌粉0.5-2.0份、植物乳桿菌活菌粉1.0-2.5份、納豆芽孢桿菌活菌粉0.5-2.5份、產(chǎn)朊假絲酵母活菌粉0.5-1.5份和黑曲霉活菌粉活菌粉2-4.5份，按比例混合均勻，制成成品，包裝入庫(kù)。全文摘要本發(fā)明是微生物活菌飼用添加劑及制作方法。是由凝結(jié)芽孢桿菌活菌粉1.5-2.5份、嗜酸乳桿菌活菌粉0.5-2.0份、植物乳桿菌活菌粉1.0-2.5份、納豆芽孢桿菌活菌粉0.5-2.5份、產(chǎn)朊假絲酵母活菌粉0.5-1.5份和黑曲霉活菌粉2-4.5份組成，每克活菌含量分別為凝結(jié)芽孢桿菌≥1.0×10<sup>10</sup>cfu/g；嗜酸乳桿菌≥1.0×10<sup>8</sup>cfu/g；植物乳桿菌≥1.0×10<sup>8</sup>cfu/g；納豆芽孢桿菌≥1.0×10<sup>10</sup>cfu/g；黑曲霉孢子≥1.0×10<sup>5</sup>cfu/g；產(chǎn)朊假絲酵母≥1.0×10<sup>8</sup>cfu/g。本發(fā)明組方合理，制作方法科學(xué)，使用范圍廣泛，操作簡(jiǎn)單，容易掌握，成本低，可用于各種畜禽作為飼料添加劑，提高飼料添加劑的利用率，具有增強(qiáng)畜禽抗病的作用。飼用微生物活菌添加劑及制作方法。文檔編號(hào)A23K1/16GK101473896SQ200910067649公開日2009年7月8日申請(qǐng)日期2009年1月9日優(yōu)先權(quán)日2009年1月9日發(fā)明者丁友昉,李桂祥,李愛波,王德培申請(qǐng)人:北京闊利達(dá)生物技術(shù)開發(fā)有限公司;天津科技大學(xué)