專利名稱：：增進成長中的動物的發育的組合物和方法
技術領域：
：本發明涉及增進成長中的動物的發育的組合物和方法。
背景技術：
：市售的犬和貓食包括針對許多不同的營養需求專門配制的組合物。這些包括，例如，為不同品種類型、大小和身體狀況設計的配方。它們也包括針對動物在其生命周期不同階段的營養需求設計的配方。通常，這些階段包括生命的成長期、成年期和老年期。例如，美國專利5,851,573公開了大型幼犬的寵物食品組合物；US6,426,100公開了為成長中的動物提供改進的骨骼塑建和軟骨細胞機能的組合物；US6，582，752公開了性別專用的幼犬食品。盡管這類寵物食品配方可得，但是，仍然需要開發包含用于增進成長中的動物的發育的創新成分和營養素的其它配方。骨骼是代謝活躍的，始終在進行鉀的再吸收和再沉積。這要求破骨細胞的連續和協調作用以除去骨(再吸收)并用成骨細胞(osteblasts)替代其(沉積)。這一般被稱作"骨轉換，，。在正常骨頭中，在動物的骨骼生長后，礦物沉積與礦物再吸收平衡；但是，在某些情況下，骨再吸收作用超過骨沉積，以致骨礦物質含量損失。具有提高的骨再吸收作用的高的骨轉換會危害骨強度，造成骨結構稀疏。這可能造成異常的骨微結構和降低的骨礦化。動物通常隨年齡增加而損失骨礦物質含量，造成骨質減少并且是骨質疏松癥的主要起因，這可能造成更高的骨折傾向。動物也可能有骨礦物質含量損失的傾向，因為骨礦物質含量損失與各種疾病和狀況相關聯。已經開發出延緩骨損失或有助于骨的復釣的食品和增補劑。但是，始終需要開發這樣的組合物，包括促進成長中的動物的骨形成以在動物成熟時避免這類狀況的組合物。本領域公知的是，骨解吸伴隨著骨堿性磷酸酶("BAP，，)的增加，4因為從骨中釋放出鈣和磷。各種材料的使用可能影響骨養護或骨形成中涉及的基因的表達，包括骨形態發生蛋白和基質金屬蛋白酶。例如，肉毒堿在骨形成中的用途是已知的。但是，需要開發促進動物的骨形成的其它組合物和方法。被視為超重和/或肥胖的動物增多，以致如今估計，在美國，25%至40%的伴侶動物被視為超重或肥胖。如果動物體重比其理想體重高超過10%,該動物被視為超重，如果其體重比其理想體重高超過15%,被視為肥胖。如果一動物的肋骨可以被觸摸到但看不到，則該動物具有理想體重。動物肥胖癥牽涉到提高的糖尿病、關節炎、胰腺炎、肝脂肪沉積、矯形失調癥、心血管疾病、呼吸疾病、髖關節發育異常、肝病、腸胃失調癥和皮膚問題的風險。動物，如犬科和貓科動物是許多飲食方案和鍛煉方案的對象，這些方案在控制體重方面最終無效。在熱量降低的動物食品、低脂動物食品、不溶纖維增加的動物食品、低碳水化合物/高蛋白質動物食品和為體重控制而出售的其它食品的發展中已經取得進步。統計學仍表明，總體而言，仍有改進的可能并且在本領域中需要進一步進步。因此，需要用于改善動物的一般健康狀況、降低脂肪和增加瘦肌肉的新型方法和組合物。益智藥是本領域中已知的，并通常包括改善認知和神經發育的藥物和化合物。盡管益智藥已經使用許多年，但一些藥劑在食品中使用時是有毒或昂貴的。因此，需要開發出可有助于動物的神經發育且不提高制造成本的組合物和方法。優選可采用本領域中易得的成分改善神經發育，但在可認識和察覺到它們的優點之前，需要開發專門配方。發明概述在某些方面中，本發明涉及可用于增進成長中的動物的發育的組合物。本發明的組合物特別包含可增進成長中的動物的神經發育、骨發育和促進健康身體構成的一種或多種營養素或生物活性物質。在某些實施方案中，營養素和生物活性物質包括，但不限于，脂肪酸、抗氧化劑、必需營養素、氨基酸、礦物質和痕量元素、維生素和維生素類物質。本發明的另一些方面涉及增進成長中的動物的發育的方法，包括直接向成長中的動物和/或在動物在子宮內和/或在哺乳期的同時向所述動物的母親施用有效量的本發明的組合物。因此，在一個方面中，本發明涉及組合物1,可用于增進成長中的動物的發育的寵物食品組合物，其包含大約0.8至大約1.6%蛋氨酸，大約50至大約200ppm錳，大約0.1至大約0.5%DHA,大約0.1至大約0.7%EPA，大約2500至大約7500ppm膽石咸。本發明還包括下列組合物1.1包含大約1000至大約2000ppm牛石黃酸的組合物1.0;1.2包含大約2.5至大約6%亞油酸的組合物1.0或1.1;1.3包含大約1至大約3%總n-3脂肪酸的任何前迷組合物；1.4包含大約50至大約1200IU/kg維生素E的任何前述組合物；1.5包含大約50至大約500ppm維生素C的任何前述組合物；1.6包含大約2.2至大約7g賴氨酸/1000kcal的任何前述組合物；1.7包含O至大約90重量°/(^友水化合物的組合物1;1.8包含大約5重量％至大約70重量％蛋白質，例如大約20%至大約50%,或大約22%至大約50%的組合物1.1或1.2;1.9包含大約2重量％至大約50重量％脂肪的任何前述組合物；1.10包含大約0.1重量％至大約20重量％總膳食纖維，例如大約1%至大約11%的任何前述組合物；1.11以支持動物營養需求的各種(varying)百分比包含0至大約15重量°/。，例如大約2%至大約8%維生素、礦物質和其它營養素的任何前述組合物；1.12包含大約5重量％至大約55重量％碳水化合物的任何前述組合物；1.13包含大約20重量％至大約60重量％蛋白質的任何前述組合物；1.14包含大約5重量％至大約40重量％脂肪，例如至少大約8%或大約9%至大約40%脂肪的任何前述組合物；1.15包含大約200至大約1000IU/kg維生素E的任何前述組合物；1.16包含大約2.5至大約7g賴氨酸/1000kcal的任何前述組合物；1.17包含大約100ppm至大約500ppm肉毒堿的任何前述組合物；1.18作為狗食，例如幼犬食品的任何前述組合物。本發明的另一實施方案是可用于促進成長中的動物的骨發育的寵物食品組合物，其包含大約O.l%至大約0.7%EPA(例如，大約0.1%至大約0.6%)、大約50ppm至大約200ppm錳(例如，大約50至大約150ppm)和大約0.5%至大約1.6%蛋氨酸(例如，大約0.8%至大約1.6%)。本發明的另一實施方案是可用于促進動物的健康身體構成的寵物食品組合物，其包含大約0.1%至大約0.5%DHA、大約100ppm至大約500ppm肉毒堿和大約2.5g/1000kcal至大約7g/1000kcal賴氨酸。本發明還包括方法2.0—一促進在犬科動物中骨發育、增進神經發育、增進認知和運動技能、促進健康身體構成和/或降低脂肪的方法，包括對該犬科動物施用任一本發明的組合物，例如組合物1.0-1.18。本發明還包括下列方法2.1方法2.0,其中該犬科動物是幼犬。2.2方法2.0或2丄其中該犬科動物由在妊娠過程中喂詞任一組合物1.0-1.18的母犬生出。2.3方法2.2，其中該幼犬在子宮內。2.4方法2.2,其中母犬在妊娠之前喂飼任一組合物1.0-1.18。2.5方法2.2或2.4，其中母犬在大部分妊娠持續期間喂飼任一組合物1.0-1.18。2.6任一方法2.2-2.5,其中母犬在妊娠之前和在妊娠過程中喂飼基本由任一組合物1.0-1.18構成的組合物。2.7任一前述方法，其中該幼犬在斷奶前，例如仍在哺乳期的同時喂飼任一組合物1.0-1.18。2.8任一前述方法，其中該幼犬在斷奶后喂飼任一組合物1.0-1.18。2.9方法2.8，其中該幼犬喂伺由任一組合物1.0-1.18構成的食品組合物。2.10任一前述方法，其中向該動物施用有效量的組合物。2.11^壬一前述方法，其中向該動物施用該組合物有效時間。也設想，除了向成長中的動物，例如向幼犬直接施用本文公開的組合物外，可以在該動物仍在子宮內的同時和/或在該動物在哺乳期的同時向該動物的母親施用該組合物。7參照下列實例的詳述理解本發明的其它特征和優點。發明詳述本文所述的本發明預計不限于所述的具體方法、規程和試劑，因為這些可變。還要理解的是，本文所用的術語僅用于描述具體實施方案，而不是要以任何方式限制本發明的范圍。除非另行指明，本文所用的所有技術和科學術語具有本發明所屬領域的普通技術人員一般理解的相同含義。此外，本文引用的所有參考文獻全文經此引用并入本文。在本公開中的定義和引用的參考文獻中的定義沖突的情況下，以本公開為準。如通篇所用，范圍用于簡述在該范圍內的各個和每個值。可以選擇該范圍內的任何值作為該范圍的界限。除非文中清楚地另行指明，本文和所附權利要求中所用的單數形式"一"和"該"包括復數對象。本發明涉及任何動物，優選哺乳動物，更優選伴侶動物。術語"伴侶動物"是指與人親密生活在一起的任何動物，并包括，但不限于，任何品種的犬科動物和貓科動物。但是，本文中設想，飲食可受人控制的任何動物都可獲益于喂飼本文^^開的配方。這些動物可以包括，例如馴養農畜(例如，牛、馬、豬等)以及圈養，例如在動物園等中的非馴養動物。該動物優選是犬科動物，例如狗。該犬科動物優選是成長中的犬^F動物，例如幼犬。本文所用的"有效...的量"或用于實現特定結果的"有效量"和類似術語是指可有效實現特別需要的生物學結果的本文所述的化合物、材料或組合物的量。本文設想的這類結果包括，例如，在子宮內和/或在其出生后的成長期(例如，根據該動物，例如犬科動物的物種和品種，最多一歲和更大)，動物的神經發育、骨和關節健康、免疫功能的增進和/或健康身體構成的增進。可以例如通過在該動物在子宮內或在哺乳期的該動物直接施用來實現這種有效活性。如本文所用，在如本文所述的成長中的動物中，特定生物學過程或身體狀況的"增進"是指與對照動物相比，成長中的動物的生物學過程或身體狀況的改善。這類過程或狀況的改善可以由本領域技術人員確定。例如，神經發育的增進可以表現為與對照動物相比通過MRI光語學測得的更好的腦發育，和/或更好的認知和運動技能分數。骨發育的增進可以表現為例如與對照動物相比更低的骨堿性磷酸酶水平，和/或與對照動物相比更高的雙重能量X-射線吸光測定法(DXA或DEXA)骨密度分數。也可以通過DXA評估成長中的動物的身體構成；可以在根據本發明的方法施以該組合物的動物中檢驗骨礦物質密度、骨礦物質含量、瘦體重、總脂肪量、脂肪量百分比、瘦肉和骨含量并與對照動物進行比較，其中與對照動物相比具有較低的體脂肪百分比的動物被-f見為具有健康的身體構成。本文所用的"成長中的動物的發育的增進"或"增進的發育"和類似術語是指成長中的動物的一種或多種生物學過程和/或身體狀況，包括但不限于，對生物體的成長和發育而言重要的生物學過程，包括但不限于，本文所述的生物學過程，例如骨和關節健康、神經和免疫系統發育和體重增加(例如瘦肌肉量而非脂肪組織的增加)的總體改善。動物的"成長"生命階段是指根據該動物的物種和品種從出生或斷奶(大約8周大)到大約1歲或更大的期間。本文所用的術語"幼犬"是指未成熟的犬科動物，通常在出生和12個月之間。本文所用的"健康身體構成"是指成長中的動物的身體構成，包括正常的體脂肪百分比，例如大約25%的體脂肪，趨勢是通過增加瘦肌肉量而非脂肪組織來增加體重。本文所用的"必需氨基酸"是指不能由生物體重新合成并因此必須在飲食中提供的那些氨基酸。本領域技術人員理解的是，必需氨基酸根據生物體的代謝隨物種而變。例如，通常理解的是，對狗和貓(和人)而言，必需氨基酸是苯基丙氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、色氨酸、組氨酸和精氨酸。如本領域技術人員理解的那樣，"限制氨基酸"是指如果在飲食中的存在量不足則會造成其它必需氨基酸的效用受限(即使所述其它必需氨基酸原本以足夠大的量存在)的氨基酸。賴氨酸是本文公開的組合物中的限制必需氨基酸。因此，相對于被確定為在影響所需生物結果方面至關重要的賴氨酸的量，定量調配或"平衡"其余的必需氨基酸。本文所用的"平衡氨基酸，，是指必需氨基酸賴氨酸與確保最佳動物成長和發育所需的能量的關系。本文所用的"必需營養素"是指正常人體運行所需的不能由身體合成的營養素。必需營養素的類別包括維生素、膳食礦物質、脂肪酸和氨基酸。本領域技術人員理解的是，被認為必需的營養素根據生物體的代謝隨物種而變。例如，對狗和貓而言，必需營養素包括維生素A、D、E、K、Bl、B6、B12、核黃素、煙酸、泛酸、葉酸、鈣、磷、4美、鈉、鉀、氯、鐵、銅、鋅、錳、硒和碘。膽堿，通常被視為B族復合維生素，可以包含在半必需營養素中。此外；牛磺酸，盡管在技術上不是氨基酸而是半胱氨酸的衍生物，是貓的必需營養素。肉毒堿，也稱作L-肉毒堿(左卡尼汀)是由氨基酸賴氨酸和蛋氨酸合成的季銨化合物，并負責脂肪酸從胞質溶膠傳輸到線粒體。不受任何理論或特定作用模式限制，本發明基于令人驚訝的發現，即將某些成分添加到寵物食品組合物中并向動物施用這些組合物可以增進成長中的動物的發育。例如，數據表明，喂飼本發明的組合物的動物(或在其母親懷孕過程中和在其斷奶前喂飼該組合物并繼續貫穿幼仔的整個成長期的那些動物)表現出增進的神經發育、骨和關節健康并具有總體更健康的身體構成。如本文設想的那樣，本發明的組合物包含營養上完全和平衡的動物詞料組合物。在營養素和成分中，這類組合物包括推薦的健康量的蛋白質、碳水化合物和脂肪。"營養上完全和平衡的動物伺料組合物，，以及適用于動物飼料組合物的營養素和成分及它們的推薦量是本領域技術人員熟悉的(參見，例如，NationalResearchCouncil,2006NutritionalRequirementsforDogsandCats,NationalAcademyPress,WashingtonD.C.或theOfficialPublicationoftheAssociationofAmericanFeedControlOfficials,Inc.NutrientRequirementsforDogsandCats2006)。本文中設想，本文中公開的組合物也可以以本領域技術人員熟悉的量和組合包含抗氧化劑、添加劑、穩定劑、增稠劑、食用香料、適口性增強劑和著色劑。"抗氧化劑"是指能夠與自由基反應或降低自由基的生成和中和自由基的物質。實例包括，但不限于，卩胡蘿卜素、顧、輔酶Q10(泛醌)、葉黃素、生育三烯酚類、大豆異黃酮、S-腺苷曱硫氨酸、谷胱甘肽、牛磺酸、N-乙酰半胱氨酸、維生素E、維生素D、維生素C、黃烷類、花色素和硫辛酸。盡管設想了任何稠度或含濕量的食品，但本發明的組合物優選可以例如是濕、半干或干的動物食品組合物。"濕，，食品是指在罐頭或箔袋中出售并具有大約70至大約90%含濕量的食品。"干"食品是指具有大約5至大約15%含濕量的組合物，并通常以小碎粒或粗粒形式制造。半干組合物是指具有大約15%至大約70%濕度的組合物。本文中還設想了具有中等濕稠度的組合物和可能包含各種稠度的組分以及可能具有超過一種稠度的組分的組合物，例如，軟的耐嚼的肉狀粒子以及具有外部谷類紐J一和內部奶油組分的啦L粒。本發明的另一方面涉及通過向動物施用有效量的本發明的組合物來增進成長中的動物的發育的方法。如上所述，"成長中的動物的發育的增進"是指成長中的動物的一種或多種生物學過程和/或身體狀況，包括但不限于，對生物體的成長和發育而言重要的生物學過程，包括但不限于，本文所述的生物學過程，例如骨和關節生長、神經和免疫系統發育和健康體重增加的總體改善。本領域技術人員熟悉檢測動物狀況的方式并將該狀況表征為與對照物相比改善或未改善。在一個方面中，本發明涉及增進成長中的動物的神經發育的方法，包括向所述動物施用本發明的組合物。例如，神經發育的增進可以表現為與對照動物相比更好的認知和運動技能分lt。例如，通過測量纟皮施以本發明的組合物的成長中的動物的可訓練水平并將其與合適的對照動物進行比較，可以檢測神經發育狀況。在另一方面中，本發明涉及增進成長中的動物的骨和關節健康的方法，包括向所述動物施用本發明的組合物。骨和關節健康的增進可以表現為例如與對照動物相比更低的骨堿性磷酸酶水平，因為更低的骨堿性磷酸酶水平被認為表明降低的骨轉換和因此更密骨生長傾向。此外，關節炎標記物，例如1型軟骨的羧基末端c-端肽和脫氧-pyrodiniline的較低含量可能分別表明減少量的軟骨損傷或骨損傷和轉換。也可以使用雙重能量X-射線吸光測定法(DXA)檢測骨和關節健康，增進的骨和關節健康表現為與對照物相比更高的骨密度分數。在另一方面中，本發明涉及增強成長中的動物的免疫功能的方法，包括向所述動物施用本發明的組合物。例如，具有增強的免疫功能提高的動物可被表征為是在抗原激發時表現出比對照物高的抗體響應的那些動物。在另一方面中，本發明涉及促進成長中的動物的健康身體構成的方法。通常，健康身體構成可以被視為具有正常的體脂肪百分比(例如，大約25%(對BCS=3而言16-24%))和/或其中通過DXA測得的體脂肪百分比不超過27y。的身體狀況或在動物具有^f吏用例如"Sma11AnimalClinicalNutrition",第4版，第13章(ISBN0-945837-05-4)中公開的方法或其對等物(使用其它傳統技術測量身體狀況分數)測得的不大于3的身體狀況分數時的身體狀況。通常，在動物生命的任何階段中，由瘦肌肉量的增力口引起的體-重增加優于可歸因于脂肪組織的積聚的重量增加。在本文中設想，本發明的組合物可單獨作為完全的營養平衡膳食施用于動物，或作為動物的總體健康程序的一部分與膳食增補劑、維生素和/或本領域技術人員熟悉的其它營養有益劑聯合施用于動物。本發明的組合物也可用作獸用治療產品。因此，該組合物可任選含有載體、稀釋劑或賦形劑，它們對預期用途的適用性是本領域技術人員熟悉的。也設想到，除了向成長中的動物，例如向成長中的幼犬或幼貓直接施用本文公開的組合物外，可以在該動物仍在子宮內的同時或在該動物在哺乳期的同時向動物母親施用該組合物。下列實施例進一步例證本發明且不是要限制本發明。要理解的是，當描述配方時，如本領域中常見的那樣，它們可以以其成分描述，盡管這些成分在其制造、儲存和使用時可能在實際配方中彼此反應，且所述配方旨在涵蓋這些產物。下列實施例進一步描述和驗證本發明范圍內的示例性實施方案。這些實施例僅用于舉例說明而不應被視為本發明的限制，因為可以在不背離其精神和范圍的情況下作出許多變動。除本文所示和所述的那些外，本發明的各種修改是本領域技術人員顯而易見的且旨在落在所附權利要求內。除非另行指明，本說明書中所用的所有百分比是干物質基礎上的重量百分比。術語"干物質基礎"是指除去組合物中的任何水分后該組合物中的組分濃度。實施例1在本文中公開用于增進成長中的動物的發育的配方。考慮"理想蛋白質相無念"(Baker和Czarnecki-Maulden,1991Annu.Rev.Nutr.11:239-63)來開發這些組合物。12針對"成長，，生命期開發食品。這些食品包括針對犬科動物成長和貓科動物成長的配方。這些食品的最低營養素推薦以及原型食品的目標值列在下表1中。表l.幼犬配方的關鍵營養素<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實施例2-研究設計在本文描述的研究中使用五種食品。分析食品的營養素并列在表2中。表2.該研究中所用的五種食品的分析的營養素狀況的平均值<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>組合物H是作為本申請的主題的組合物。其它四種組合物可購得。組合物Pl和P2是相同品牌的食品，但在不同批次中制成。組合物El和E2來自相同制造商，但組合物El出售給小型犬，組合物E2出售給中型犬。22個母犬纟皮分成三組以在受孕之前接受組合物H、P1或El至少10天。母犬集中詞養直至經由觸診確認懷孕，然后轉移到產科住處。用與最初分配給母犬的食物相同的食物喂養來自該母犬的幼犬，直至幼犬斷奶。在斷奶后，隨機選擇喂飼組合物Pl的母犬生下的48只幼犬，喂飼組合物El的母犬生下的16只幼犬和喂飼組合物H的母犬生下的16只幼犬以進一步測試。在斷奶后，在來自喂飼組合物Pl的母犬的48只幼犬中，各16只幼犬換成組合物H、P2或E2之一。在斷奶后，來自喂飼組合物E1的母犬的16只幼犬換成組合物E2。在斷奶后向來自喂飼組合物H的母犬的16只幼犬提供組合物H。在10個月試驗期中，定期提取血樣以用于分析健康生物標志以及用于蛋白組和染色體組才企,瞼。在2、4、6、9和12個月大時通過DXA掃描狗以證明身體構成和骨密度的變化。此外，在2、4、6、9和12個月大，獲取幼犬的網膜電流圖以評估視網膜發育。在2、6和12個月大也進行腦成像研究以評估神經生長和發育。最后，在該研究全程中連續進行認知和運動技能測試以評估神經(認知和運動技能)發育。在該研究全程中，每周記錄體重且每天記錄圏養幼犬的食物攝取。實施例3犬科動物神經發育在各種時間點用手持便攜設備(包括小型Ganzfeld型刺激器)在實施例2的幼犬上進行網膜電流圖(ERGs)。動物在暗處適應至少1小時，然后在紅光下使用鹽酸美托咪定(0.1mg/kgIM)和氯胺酮(5mg/kgIM)麻醉。使用托品酰胺1%(TropicamideOphthalmicSolutionUSP,AlconLab.Inc.,FortWorth,Texas)使瞳孔最大擴張并用鹽酸丙美卡因0.5%(Alcaine,AlconLab.Inc.,FortWorth,Texas)眼部麻醉。在眼睛上放置Jet接觸鏡電極，并襯以曱基纖維素(Methocel,CibaVision,Grosswallstadt,Germany)。在一允部和距眼睛外眥大約0.5厘米處放置皮下柏針電極并分別充當接地電極和參比電4及。該儀器的標準閃光(standardflash)(SF)(0log)是1.7cds/m2,由白色LEDs產生。可以以0.3log步長從-3.01og到+1.2log單位改變閃光強度。對此研究中的暗視激發而言，與SF—起使用-3.01og、0log和十1.2log。在10分鐘光適應(在室內使用普通熒光)后，在0和+1.2log進行適光記錄，最后研究對30Hz閃爍光激發的響應。所有記錄都存儲在ERG裝置上并隨后輸入計算機以便進一步評測。第一ERG的分析以及初始位置辨別和反轉(reversal):在第一時間點(8周大)，僅對ERG和光譜學測量結果進行單一分析。基本原理在于，出生后食物組中的幼犬保持用母犬食物喂養直至到達試驗機構。由于在到達試-驗機構的大約一周內獲取ERG和MRI數據，這些出生后的組被合并成單組(N=48)。假定這些測量結果代表幼犬在到達試驗機構之前接受的食物。在第二時間點(4個月大)。使用ANOVA研究ERG。統計顯著性要求0.05的顯著性水平，但是，如果它們實現0.10的顯著性水平，結果被表征為勉強顯著。通過方差分析(ANOVA)研究用于位置辨別和反轉的認知數據，食物組充當對象之間的變量。統計顯著性要求0.05的顯著性水平，但是，如果它們實現0.10的顯著性水平，結果被表征為勉強顯著。物體辨別和反轉的統計分析使用SPSS(version10)進行統計分析。使用用GLM反復測量程序產生的三個方差分析(ANOVAs)檢查物體辨別數據以評測五組之間的差異。對暗一見和亮—見試-瞼而言，都用GLM選項分析30HzERG數據，而其余ERG數據在三個多變量ANOVAs(MANOVAs)中分析。在所有情況下，評估與GLM正規性和方差同質性的一致性，對前者而言，使用Shapiro-Wilk試驗(顯著性水平設為06=.05)，對后者而言，使用Levene和(如果適當)Box試馬全(兩者的a=.001)。使用最減少顯著背離數的無論哪種變換(平方根或對數)來解決不完全符合任一假說的情況，且如果該變換沒有顯著消除它們，則也將ommbusF試驗的顯著性水平降至a^025。由于ANOVA通常至少在方差非齊性方面是穩定的程序，校正偏差的這些努力可能使整個試驗在性質上是保守的，即降低假陽性(I型誤差)的可能性。同時，如下解決不正確地將真結論否決為不顯著(II型誤差)的可能性的隨后提高將在"典型"分析中標記的那些效應(其中p^.05)確定為"勉強顯著"，由此仍有機會探測可能相關的其它結論。根據方差非齊性，用使用Tukey，s最小顯著差(LSD)、Dunnett，s試驗或TamhaneT2試驗進行的成對研究進一步探測顯著結果，并調節比較數(Bonferroni校正)。認知和網膜電流圖數據的結果表明，組合物H、E1和E2都可以改進幼犬的訓練能力和學習能力，以及視網膜功能，無論是在繁殖前和在整個哺乳期和成長期向母犬喂食，還是在向母犬喂飼組合物Pl時斷奶后開始喂食。對于來自僅喂飼組合物Pl的母犬的喂飼三種食物之一的斷奶后幼犬，在位置和反轉分析中發現勉強顯著的食物組效應[F(2,45^2.9922,16p=0.060245]。Post-hocFisher，s表明，與組合物P2相比，喂祠組合物H(p=0.024683)和組合物E2(p=0.074957)的組總體犯較少錯誤。ANOVA也揭示了高度顯著的任務效應[F(1,45^81.4819，p<0.001],這是與初始學習相比，掌握反轉時的錯誤增加的結果。另夕卜，存在任務x分組(taskbygroup)交互作用[F(1，45)二5.1603,p=0.009602]。對各任務進行獨立的單因素ANOVAs以測定這種相互作用的性質。在位置任務中沒有發現組效應；但是，在反轉中發現顯著的組效應[F(2,45)二6.3878,p二0.003614]。Post-hocBonferroni，s表明，喂飼組合物H(p=0.00318)和組合物E2(p=0.04129)的組與喂伺組合物P2的組相比在反轉方面犯較少錯誤。檢查在多反轉期間掌握的反轉數的分析顯示出勉強顯著的組效應[F(2，45)=2.692,p=0.078628]。Post-hocFisher's表明，喂飼組合物H的組掌握比組合物P2(p=0.067566)和組合物E2(p=0.039307)組都多的反轉。斷奶前的處理條件這是與其母犬喂飼相同飲食的幼犬的認知比較。在位置和反轉分析中發現顯著食物組x任務相互作用[F(2,44)=3.7U4,pK).032400]和高度顯著的任務效應[F(l,44)-89.3卯7，p<0.001]。任務效應是與位置問題相比，掌握反轉時的錯誤增加的結果。對各任務進行獨立的單因素ANOVAs以測定食物組x任務相互作用的性質。在位置任務中沒有發現組效應；但是，在反轉中發現顯著的組效應[F(2,44)=3.0436,pK).057807]。Post-hocFisher's表明，喂飼組合物E2的組與組合物P2(p-0.021493)和組合物H(p=0.082970)相比在反轉方面犯較少錯誤。在檢查對多反轉期間掌握的反轉數的組效應的分析中沒有發現任何效應。在物體辨別規程中，幼犬在10個學習期中學習響應兩個物體之一。在反轉期中，調換獲得獎賞的物體以便在反轉期中獎賞之前中立的物體，且之前獲得獎賞的物體不再與獎賞聯系在一起。這些分析將初始學得表現(100次試驗中的正確響應數)與反轉試驗分數進行比較。斷奶后唯一飲食的影響當所有幼犬在母體期喂飼組合物PI然后換成其它食物時，對幼犬認知發育沒有影響。斷奶前/斷奶后飲食的影響這是喂飼與母親相同的食物的幼犬的比較。Posthoc比較表明喂飼組合物H的動物在初始學習期和喂飼組合物E2的狗在反轉期中的勉強顯著的(PO.l)表現提高(與組合物PI相比)。因此，概括而言，認知效果的量級看起來隨給定的任務和隨喂詞方案而變，并在幾種情況下達到統計顯著性。ERG結果也證實在斷奶之前或之后喂飼包含添加的DHA的食物有助于提高成長中的幼犬的視網膜功能的結論。具體而言，初步調查表明，添加的DHA對母親食物的影響在暗視力范圍中b-波幅度的改進中是重要的。就母體影響而言，這種影響很好延續到斷奶后的時期，并且也出DHA的添加改善視網膜桿的活性，這在低照度的情況下造成更好的視敏度。實施例4骨發育在實施例2的幼犬中測試骨發育。數據表明，可以通過施用組合物H來降低骨轉換，這可能造成更健康的骨發育。在四個月時采集血清樣品并冷凍。將樣品解凍并如上所述(Yamka等人InternJApplResVetMed,第4巻，No.3,2006)和根據MetraBAPEIA,目錄號8012,來自Quidel(SanDiego,CA)進行檢驗。骨堿性磷酸酶(BAP)的單因素方差分析表明在所有組中，與喂伺組合物Pl-P2的幼犬相比，BAP的活性降低。這合理表明骨轉換降低的可能性和產生更密骨骼的傾向。實施例5骨構成使用LUNAR儀器(GeneralElectric)在2、4、6、9和12個月大的麻醉下的實施例2的幼犬上進行雙重能量x-射線吸光測定法。在這些時間點的每一個測定整個身體構成。測量的結果是骨礦物質密度、骨礦物質含量、瘦體重、總脂肪量、％脂肪量、瘦肉+骨含量。在各時間點進行ANOVA以測定組之間的顯著差異。每周使用電子秤獲得每個幼犬的體重。結果出生到斷奶的體重增加-喂詞組合物H的母犬生出的幼犬(平均18330克)比喂銅組合物P1(355克)或組合物E1(362克)的母犬生出的幼犬輕。在出生時，組之間的這種差異不明顯，但在4周時，ANOVA接近PK).07的顯著性。在斷奶時，組之間存在顯著的體重差異，其中來自喂飼組合物P1(3060克)或組合物E1(3080克)的母犬的幼犬在體重上明顯大于來自喂飼組合物H的母犬的幼犬(2540克；P<0.05)。對來自喂飼P1、H和E2的母犬的幼犬而言，平均每日體重增加分別為47、38和47克/天，組之間顯著不同(PO.05)。斷奶(58天)到4個月大-如上所述在斷奶時，組之間存在顯著的體重差異。到4個月大時，如通過單因素ANOVA計算出的那樣，幼犬平均體重之間存在顯著差異Pl母犬-P2幼犬(P2-P2)6194克平均Pl母犬-H幼犬(Pl-H)5919克平均Pl母犬-E2幼犬(Pl-E2)6106克平均El母犬-E2幼犬(El-E2)6180克平均H母犬-H幼犬(H-H)5106克平均當通過雙尾t-試馬全比4交組時，據發現，組合物H-H組明顯低于任其它四組。其它四組無一4皮此不同。6個月大-在6個月大時，經由單因素ANOVA,組之間仍存在顯著差異，其中組合物H-H組明顯低于所有其它組Pl-P29544克平均Pl-H9153克平均Pl-E29156克平均E2-E19025克平均H-H7580克平均在此期間的平均體重增加如下Pl-P254.1克/天平均P1-H50.4克/天平均Pl-E251.2克/天平均El-E249.2克/天平均H-H41.7克/天平均通過單因素ANOVA,這顯著不同(PO.05)。通過雙尾t-試-瞼進行的組比較表明組合物H-H組在生長速度方面明顯低于Pl-H、Pl-P2或Pl-E2組且勉強不同于El-E2幼犬組。DEXA分析-在斷奶時，在分配至最終食物組之前，在三組H、Pl和H上進行初始DEXA分析，并通過單因素ANOVA比較。隨后在所有組(P1-P2、Pl-H、P1腸E2、H-H和E1-E2)上在大約4、6和9個月大時進行DEXA,并經由單因素ANOVA比較總脂肪斷奶初期來自El母犬的幼犬具有比來自喂飼Pl的母犬的幼犬高的總脂肪，后者具有比來自喂飼H的母犬的幼犬高的總脂肪(組之間的顯著差異(PO.05))。4個月大El-E2〉Pl-E2>P1-P1〉P1-H>H-H組之間顯著差異(P<0.05)9個月大E1-E2>P1-P1>P1-E2>P1-H〉H-H喂銅組合物H的幼犬和來自喂飼組合物H的母犬的幼犬在9個月大時具有較低脂肪。組之間顯著差異(P<0.05)脂肪百分比斷奶初期E1>P1>H來自喂飼組合物H的母犬的幼犬在斷奶時具有較低的體脂肪百分比。組之間顯著差異(P<0.05)4個月大，E1-E2>P1-E2>P1-P1>P1-H>H-H組之間顯著差異(P<0.05)9個月大E1-E2>P1-E2>P1-P1>P1-H>H-H喂飼組合物H的幼犬和來自喂飼組合物H的母犬的幼犬在9個月大時具有較低的體脂肪百分比。組之間顯著差異(P<0.05)權利要求1.寵物食品組合物，其包含大約0.8至大約1.6％蛋氨酸；大約50至大約200ppm錳；大約0.1至大約0.5％DHA；大約0.1至大約0.7％EPA；和大約2500至大約7500ppm膽堿。2.寵物食品組合物，其包含大約0.1%至大約0.7%EPA;大約50ppm至大約200ppm《孟；和大約0.5%至大約1.6%蛋氨酸。3.寵物食品，其包含大約0.10%至大約0.5%DHA，大約100ppm至大約500ppm肉毒堿，和大約2.5g/1000kcal至大約7g/1000kcal賴氨酸。4.前述權利要求任一項的組合物，包含大約1000至大約2000ppm牛磺酸。5.前述權利要求任一項的組合物，包含大約2.5至大約6%亞油酸。6.前述權利要求任一項的組合物，包含大約1至大約3%總n-3脂肪酸。7.前述權利要求任一項的組合物，包含大約50至大約1200IU/kg維生素E。8.前述權利要求任一項的組合物，包含大約50至大約500ppm維生素C。9.前述權利要求任一項的組合物，包含大約2.2至大約7g賴氨酸/1000kcal。10.前述權利要求任一項的組合物，包含O至大約90重量％碳水化合物。11.前述權利要求任一項的組合物，包含大約5%至大約70重量％蛋白質。12.前述權利要求任一項的組合物，包含大約2%至大約50重量％脂肪。13.前述權利要求任一項的組合物，包含大約0.1%至大約20重量%總膳食纖維。14.前述權利要求任一項的組合物，包含大約2.5至大約7g賴氨酸簡0kcal。15.前述權利要求任一項的組合物，包含大約100ppm至大約500ppm肉毒械。16.促進犬科動物中骨發育、增進神經發育、增進認知和運動技能、促進健康身體構成和/或降低脂肪的方法，包括向所述犬科動物施用根據權利要求1-15任一項的組合物。17.權利要求16的方法，其中所述犬科動物是幼犬。18.權利要求16或17的方法，其中所述犬科動物由在妊娠過程中喂詞任一組合物1.0-1.18的母犬生出。19.權利要求16-18任一項的方法，其中所述幼犬在子宮內。20.權利要求18或19任一項的方法，其中所述母犬在妊娠之前喂飼根據權利要求l-15任一項的組合物。21.權利要求18或20的方法，其中所述母犬在大部分妊娠持續期間喂詞根據權利要求l-15任一項的組合物。22.權利要求18-21任一項的方法，其中所述母犬在妊娠之前和在妊娠過程中喂詞基本由權利要求1-15任一項的組合物組成的組合物。23.權利要求16-22任一項的方法，其中所述幼犬在斷奶前喂飼根據權利要求1-15任一項的組合物。24.權利要求16-23任一項的方法，其中所述幼犬在斷奶后喂飼根據權利要求1-15任一項的組合物。25.權利要求24的方法，其中所述幼犬喂飼由根據權利要求1-15任一項的組合物組成的食品組合物。全文摘要公開了促進骨骼發育、增進神經發育、增進認知和運動技能、促進健康身體構成和/或降低成長中的動物的脂肪用的組合物和方法。文檔編號A23K1/18GK101686712SQ200880013110公開日2010年3月31日申請日期2008年2月22日優先權日2007年2月22日發明者K·G·弗里森,R·M·楊卡,S·C·齊克申請人:希爾氏寵物營養品公司