專利名稱：：一種蠟蚧輪枝菌殺蟲劑及其應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及植物保護及農藥
技術領域：
，具體是指一種蠟蚧輪枝菌殺蟲劑及其應用。
背景技術：
：蠟蚧輪枝菌(FeWc////ww/eom/z'(zimm)viegas)是一種絲孢綱的昆蟲病原真菌。該菌在世界上最早是Neitner于1861年在錫蘭咖啡蠟階(Lecaniicoffeae)上首次發現。關于該菌的應用基礎研究，以英國溫室作物研究所HallR.A.博士(1976~1985)開展較早，并于20世紀80年代初主持了該菌制劑商品化的研究。自1981年Hall開發的第一個K/ecam7殺蚜劑產品Vertalec^商品化以來，至今已有多個國家的8種以上的商品分別以Vertalec、Mycotal、Thriptal、Vertisol、AgroBiocontrolVerticillium50、Verticon、Verticillin和Mycolab'sVerticilliumlecanii等名稱進行生產、銷售，用于溫室等場所的蚜蟲、粉虱和薊馬等害蟲防治。該菌制劑產品由于效果較慢，對使用環境有一定要求；在發展過程中(尤其是在防治蚜蟲的應用過程中)，曾受到抗蚜威等專用化學農藥的競爭壓力影響，導致市場占有率有所下降。近年來，由于化學農藥的殘留污染問題及影響日益突出，在全球環境保護浪潮的影響和推動下，該菌制劑產品的推廣和應用又有了迅速的發展。
發明內容本發明的目的在于提供一種蠟階輪枝菌殺蟲劑及其應用。本發明提供的蠟蚧輪枝菌(Ferto7/i鵬/ecflm'!')K1207，保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所；保藏日期2008年01月07日；保藏登記入冊的編號CGMCCNo.2326。本發明的蠟蚧輪枝菌K1207，分離自云南昆明罹病蚜蟲體上，該菌株具有以下特征在PDA和CzA培養基上10d菌落直徑2427mm，厚度23mm,菌落圓狀，展開，正面觀白色，氣生菌絲初期直立絨毛狀，后期密絮狀，邊緣稀疏，菌落從中間向四周有不明顯放射狀皺褶，培養后期菌落中部與邊緣有明顯的凹環，菌落背部呈奶黃色，無可溶性色素。氣生菌絲無色，有隔分枝，寬度1.22.5Mm，分生孢子梗基部膨大，向上變細呈錐形，單生、對生或輪生于氣生菌絲，氣生菌絲頂部輪狀瓶梗可達46個，分生孢子梗極少分枝。從梗的頂部長出分生孢子，聚結成球形，孢子球直徑512nm，球遇水解體釋放出分成孢子(1025個)，孢子棒形、橢圓形、卵形，兩端圓而對稱，孢子大小2.58.0X0.752.8pm。本發明的菌株A1207與現有己知菌株相比，溫度適應能力更好，溫度范圍在1533°C，分生孢子萌發率可達91.78100%。本發明是這樣實現的蠟階輪枝菌(J^"c朋iw2/"fl"ii)K1207菌株的試管培養，固、液兩相發酵，制備成可濕性粉劑，將其防治各種蚜蟲(桃蚜、白尾紅蚜、麥無網長管蚜、甘藍蚜等)、菜青蟲、小菜蛾、溫室白粉虱。本發明蠟蚧輪枝菌(KeWc////ww/ecam7)K1207菌株的培養方法1、試管種培養試管斜面培養基配方為馬鈴薯20%，葡萄糖1.7~2%，瓊膠1.4~1.5%，自然pH將^W/c/〃/Mw/ec朋/z'K1207移到試管斜面培養基上，在28"C恒溫培養3~4d，獲得試管種。2、液體培養液體發酵基配方為改良SDAY培養液1%蛋白胨、4°/。葡萄糖、0.5%酵母膏；0.136%KH2P04、0.12%,MgS047H20;p朋.06.5將試管種接種到500ml三角瓶液體培養基中，每瓶裝200ml，于28。C恒溫振蕩培養45d，轉速為100120rpm，將各瓶種子液混勻，以20ml/瓶量加入到二級培養液(改良SDAY)中，搖床培養培養45d(100120rpm)獲得液體制劑。3、固體培養固體培養基配方為麥麩--谷糠培養基56%麥麩、24%細糠、20%谷殼、0.136%KH2P04、0.12%MgSO4'7H2O。將液體制劑用滅菌水稀釋3倍后，按6:10的比例加固體培養基，拌勻后置于過氧乙酸熏蒸滅菌后的固體發酵室中25土rC黑暗培養6d，連續光照3d，獲得固體培養物。4、可濕性粉劑的制備將培養得到的產品經烘干、粉碎、加濕潤劑、填充劑和穩定劑混合制成可濕性粉劑。可濕性粉劑各組分的優選組成及比例是孢子粉(5060%)、潤濕劑(十二垸基苯磺酸鈉，26%)、穩定劑(甘油，0.5%1%)、填料(硅藻土，3040%)。成品質量指標測定有效孢子濃度、過篩率、細度、潤濕時間、懸浮率、含水量、pH值物化指標的測定均參照中國農業標準匯編進行，結果如表1表1蠟蚧輪枝菌K1207殺蟲劑的各項物理指標物理指標有效孢子濃度3.0xl()9個/g過篩率31.2%細度97%以上過300目篩潤濕時間2分57秒懸浮率75.6%含水量3.0%pH值6~7活孢率測定采用孢子萌發法測定取0.5g制劑加30mL滅菌水用6層紗布過濾，濾液沉淀1min后取上清液500rpm離心1min，再取上清液1500rpm離心10min,去掉上清液，用1%葡萄糖液稀釋沉淀至1(^個孢子/mL濃度，將該稀釋液均勻涂布在清水瓊膠培養基上，1824h后觀察孢子萌發情況。制劑制成后取樣分別保存于4'C冰箱及室溫陰涼處，l個月及8個月后分別測其活孢率。測試結果如下制劑制成時活孢率63.5%;1個月后室溫下保存制劑的活孢率60.8%;8個月后4。C冰箱中保存制劑的活孢率54%;8個月后室溫下保存制劑的活孢率46.6%。本發明蠟蚧輪枝菌殺蟲劑的藥效試驗1、制備蠟階輪枝菌殺蟲劑按前述蠟階輪枝菌(^^07//"附/e^m'0K1207菌株的培養方法制備試驗用制劑。2、蠟蚧輪枝菌(KW!'c!'仍ww/ecam'0K1207液體制劑對各種蚜蟲(桃蚜、白尾紅蚜、麥無網長管蚜、甘藍蚜等)、菜青蟲、小菜蛾、溫室白粉虱的防治試驗將其用孢子液浸漬法進行的室內毒力測定結果，見表217表2蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對桃蚜(MyzMspers!'cae)的LCmj和LC80處理后天數毒力回歸方程相關系數lX5oLC80(d)(y=a+bx)(r)(分生孢子/ml)(分生孢子/ml)4y=3.1063+0.2178x0.99539.27xl0610.07xl085y=2.9137+0.3684x0.97184.60xl058.98xl076y=2.8752+0.4235x0.97771.04xl051.02xl077y=3.2307+0.4132x0.9582L91xl042.11xl06表3蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對桃蚜(Myzuypera'cae)的LTso禾BLT8I<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>根據表2、3的測定結果，用蠟階輪枝菌K1207分生孢子對桃蚜進行防治時，以57d為顯效期限，80%為防效標準，適宜的使用濃度為1.8xl(^分生孢子/ml。表4蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對白尾紅蚜(t/w/ewcOT/wworamwj)的LC5o和LCso<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表5蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對白尾紅蚜(C/ra/ewco"/onwwaraw)的1^50和^80<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>根據表4、5的測定結果，用K1207菌株分生孢子對白尾紅蚜進行防治時，以57d為顯效期限，80%為防效標準，適宜的使用濃度為2.5xl(^分生孢子/ml。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>根據表8、9的測定結果，用K1207菌株分生孢子對甘藍蚜進行防治時，以57d為顯效期限，80%為防效標準，適宜的使用濃度為1.3xl()S分生孢子/ml。表IO蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對菜青蟲"rtoge/ara/we)的LCs。和LC:處理后天數毒力回歸方程相關系數LC50(d)(y=a+bx)(r)(分生孢子/ml)(分生孢子/ml)4y=2.7275+0.2324x0.97976.00xl092.056xl0135y=2.8076+0,3021x0.9844l.SlxlO72.96xl0126y=3.2593+0.2947x0.9卯68.07xl055.88xl087y=3.2298+0.3452x0.99581.34xl053.73xl078y=3.2590+0.3840x0.99823.42xl045.38xl06表ll蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對菜青蟲的LT5o和LT80濃度毒力回歸方程相關系數LT50.LT80(分生孢子/ml)(y=a+bx)(r)(分生孢子/ml)(分生孢子/ml)2.0x103y=l.3936+3.5128x0.959610.618.52.0x104y=1.3544+3.9444x0.98528.413.72.(M05y=1.4358+4.3712x0.99716.510.22.0x106y=1.2506+4.8540x0.99965.98.82.0x107=0,9420+5.7688x0.99745.07.1y=1.6288+5.2165x0.99194.46.4根據表10、ll的測定結果，用K1207菌株分生孢子對菜青蟲進行防治時，以57d為顯效期限，80%為防效標準，適宜的使用濃度為2.0xl0"分生孢子/ml。表12蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對小菜蛾(尸/1^/^"/0他&)2齡幼蟲的LC5o和LC80處理后天數毒力回歸方程相關系數LC50LC8o(d)(y=a+bx)(r)(分生孢子/ml)(分生孢子/ml)4y=2.0045+0.3253x0.98101.62xl096.33x0'15y=2,8853+0.2958x0,95991.41xl07l.OOxlO106y=3.1601+0.3070x0.99089.84xl055.51xio87y=2.9892+0.3839x0.99091.73xl052.72xl078y=3.1835+0.4204x0.99472.09x1042.13xl068表13蠟階輪枝菌K1207分生孢子對小菜蛾(/V"/e//ax>Voste//a)2齡幼蟲的LT5Q和LT8<<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>根據表12、13的測定結果，用K1207菌株分生孢子對小菜蛾進行防治時，以57d為顯效期限，80%為防效標準，適宜的使用濃度為2.2xl(^分生孢子/ml。表14蠟階輪枝菌K1207分生孢子對溫室白粉虱(7h'a/ewro^sv④orar/on/w)若蟲的LC5o和LQo<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表15蠟階輪枝菌K1207分生孢子對溫室白粉虱(7h'a/ewra^svqporan'onw)若蟲的LTmj和LT80<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>根據表M、15的測定結果，用K1207菌株分生孢子對溫室白粉虱進行防治時，以57d為顯效期限，80%為防效標準，適宜的使用濃度為1.8xl(^分生孢子/ml。表16蠟階輪枝菌K1207對(蘇鐵上的)紅蠟階(Cera/7/osfesra6era)的LCso禾t]LC:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表17蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對(蘇鐵上的)紅蠟階(Ceroptotora6era)的1^5()和1^80<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>根據表16、17的測定結果，用K1207菌株分生孢子對蘇鐵上的紅蠟蚧進行防治時，以1012d為顯效期限，80%為防效標準，適宜的使用濃度為1.76"061.76><108分生孢子/ml。總體結果表明，本發明的蠟蚧輪枝菌(^^"7//,/"朋//)殺蟲劑防治桃蚜、白尾紅蚜、麥無網長管蚜、甘藍蚜等)、菜青蟲、小菜蛾、溫室白粉虱效果顯著。其防治植物蟲害的效果與使用次數和使用方法有關，同時與被防治的蟲害的種類有關。具體實施例方式本生防制劑可以與其他的殺蟲農藥、植物生長調節劑混合使用，但必須保證所混藥劑對本發明采用的蠟階輪枝菌(F抓/c朋訓/ecam7)K1207無副作用。本發明的蠟蚧輪枝菌(旨ft'c朋顯/ecam'z')對桃蚜、白尾紅蚜、麥無網長管蚜、甘藍蚜等)、菜青蟲、小菜蛾、溫室白粉虱防治效果明顯，具有成本低、使用簡便、有效期較長等特點。下面用實施例來進一步詳述本發明，但本發明的內容并不局限于此。實施例一將蠟蚧輪枝菌(Krricz7/^m/ecam'"K1207移到試管斜面培養基上，試管斜面培養基配方為馬鈴薯20%，葡萄糖1.7~2%，瓊膠1.4-1.5%,自然pH。在28'C恒溫培養34d，獲得試管種。將試管種接種到500ml三角瓶(每瓶裝200ml)液體培養基中，培養基配方為1%蛋白胨、4%葡萄糖、0.5%酵母膏;0.136%KH2P04、0.12%MgS047H20;pH6.06.5，于28'C恒溫振蕩培養4~5d，轉速為100120rpm，以20ml/瓶量加入到二級培養液(改良SDAY)中，搖床培養培養45d(100~120rpm)獲得本發明液體制劑。實施例二首先獲得液體制劑(同實施例一)，將液體制劑用滅菌水稀釋3倍后，按6:10的比例加固體培養基，固體培養基配方為為麥麩一谷糠培養基56%麥麩、24%細糠、20%谷殼、0.136%KH2PO4、0.12%MgS(V7H2O，拌勻后置于過氧乙酸熏蒸滅菌后的固體發酵室中25士rC黑暗培養6d，連續光照3d，之后取出平鋪在發酵室內的玻璃板上，35±1'C、100檔風速下風干5d。獲得固體制劑。實施例三首先進行液固兩相發酵(同實施例一，例二)，然后將培養得到的產品經烘干、粉碎、加濕潤劑、填充劑和穩定劑混合制成可濕性粉劑。可濕性粉劑各組分的優選組成及比例是孢子粉(5060%)、潤濕劑(十二烷基苯磺酸鈉，26%)、穩定劑(甘油，0.5%1%)、填料(硅藻土，3040%)。成品質量指標測定有效孢子濃度、過篩率、細度、潤濕時間、懸浮率、含水量、pH值物化指標的測定均參照中國農業標準匯編進行，結果如表1表1蠟蚧輪枝菌K1207殺蟲劑的各項物理指標<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>活孢率測定采用孢子萌發法測定取0.5g制劑加30mL滅菌水用6層紗布過濾，濾液沉淀1min后取上清液500rpm離心1min，再取上清液1500rpm離心10min，去掉上清液，用1%葡萄糖液稀釋沉淀至1(^個孢子/mL濃度，將該稀釋液均勻涂布在清水瓊膠培養基上，1824h后觀察孢子萌發情況。制劑制成后取樣分別保存于4'C冰箱及室溫陰涼處，l個月及8個月后分別測其活孢率。測試結果如下-制劑制成時活孢率63.5%;1個月后室溫下保存制劑的活孢率60.8%;8個月后4'C冰箱中保存制劑的活孢率54%;8個月后室溫下保存制劑的活孢率46.6%。即得本發明生物制劑。權利要求1、一種蠟蚧輪枝菌殺蟲劑，其特征在于該制劑的生產菌株為蠟蚧輪枝菌(Verticilliumlecanii)K1207，保藏號CGMCCNo.2326。2、權利要求1所述蠟蚧輪枝菌(Fert/d仍,/eca剛7)K1207菌株的培養方法，其特征在于所述菌株是經過液固兩相培養獲得，其液體和固體發酵培養基配方如下(1)液體發酵培養基配方1%蛋白胨、4%葡萄糖、0.5%酵母膏；0.136%KH2P04、0.12%MgS047H20;pH6.06.5;(2)固體發酵培養基配方56%麥麩、24%細糠、20%谷殼、0.136%KH2P04、0.12%MgSO4'7H2O。3、權利要求1所述的蠟蚧輪枝菌(J^^'a7/iww/ecam'0K1207菌株在防治桃蚜、白尾紅蚜、麥無網長管嫁、甘藍蚜、菜青蟲、小菜蛾、溫室白粉虱害蟲中的應用。全文摘要本發明涉及一種蠟蚧輪枝菌殺蟲劑及其應用，屬植物保護及農藥
技術領域：
。本發明所提供的菌株為蠟蚧輪枝菌(Verticilliumlecanii)K1207，保藏號CGMCCNo.2326。本發明將該菌株，通過液固兩相發酵生產，特點是固體培養基采用麥麩--谷糠培養基。將培養得到的產品經烘干、粉碎、加入濕潤劑、填充劑和穩定劑混合制成可濕性粉劑。本發明的蠟蚧輪枝菌菌株毒力高，對桃蚜、白尾紅蚜、麥無網長管蚜、甘藍蚜、菜青蟲、小菜蛾、溫室白粉虱害蟲有良好的防治效果。發酵生產中原料便宜、來源廣，易于工業化生產，不污染環境。文檔編號A01P7/00GK101248799SQ20081005814公開日2008年8月27日申請日期2008年3月4日優先權日2008年3月4日發明者周天雄,楊美林,秦小萍申請人:云南農業大學