專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種鋅-多肽配合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及金屬多肽配合物。技術(shù)背景鋅(Zn)是人和動(dòng)物必須的微量元素，被稱(chēng)為生命元素。目前，有機(jī)鋅主要是氨基酸鰲合物，如鋅、硒或鈣等微量元素的氨基酸鰲合物。食用微量元素的氨基酸螯合物不僅可以補(bǔ)充人體或動(dòng)物所需的微量元素，還可以同時(shí)補(bǔ)充人體或動(dòng)物所需的氨基酸。國(guó)知局于1997年4月2日公開(kāi)了一項(xiàng)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)"氨基酸鋅的制備方法及其應(yīng)用"(申請(qǐng)?zhí)?4114854.8)，該申請(qǐng)公開(kāi)了一種三甘氨酸鋅鰲合物的制備方法，即將氨基酸和氧化鋅按2:I的摩爾比混合，在水溶液中反應(yīng)一段時(shí)間后濃縮，最后用酒精析出反應(yīng)產(chǎn)物。國(guó)知局于2006年2月11日公開(kāi)了一項(xiàng)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)"氨基酸鰲合物的制備方法"(申請(qǐng)?zhí)?00380105098.7)，該申請(qǐng)公開(kāi)了一種制備金屬氨基酸鰲合物的方法，即將摩爾比為i:ii:4的金屬碳酸鹽和酸性氨基酸(如谷氨酸、天冬氨酸等)在010(TC的水溶液中反應(yīng)，最后取反應(yīng)物上清經(jīng)冷凍干燥即可。國(guó)知局于2006年2月22日授權(quán)公告了一項(xiàng)發(fā)明專(zhuān)利"一種有機(jī)硒的制備工藝"(申請(qǐng)?zhí)?00410016499.1),該專(zhuān)利公開(kāi)了一種蛋氨酸硒的制備方法將蛋氨酸鹽和四氯化硒在水溶液或有機(jī)溶液中反應(yīng)0.510小時(shí)，控制反應(yīng)時(shí)pH29、溫度-1010(TC，最后經(jīng)過(guò)濾、濃縮和干燥，即可。上述方法所用的螯合劑都是非天然的單一成分的氨基酸，使所得鰲合物營(yíng)養(yǎng)成分單一，在實(shí)際使用中，往往需要幾種氨基酸微量元素螯合物的配合使用才能體現(xiàn)出較好的效果，應(yīng)用成本相對(duì)較高。而且，由于氨基酸的制備是常采用化學(xué)酸水解法，難免會(huì)引入化學(xué)污染物或者化學(xué)殘留物，需要加以嚴(yán)密的監(jiān)控與檢測(cè)。隨著小分子多肽可以被機(jī)體整體吸收理論的證實(shí)，有關(guān)多肽的開(kāi)發(fā)就成為營(yíng)養(yǎng)學(xué)或食品科學(xué)領(lǐng)域新的關(guān)注焦點(diǎn)。由于純品肽的化學(xué)合成難度大、成本高，而且化學(xué)合成肽往往比從動(dòng)植物中制備肽的生物活性要低，所以，通過(guò)化學(xué)合成肽與微量元素反應(yīng)制備金屬配合物的應(yīng)用也會(huì)受到一定限制。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種鋅_多肽配合物。本發(fā)明的另一目的是提供該配合物的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案是一種鋅-多肽配合物，該配合物由重量比為i:ii:5的動(dòng)物原料與無(wú)機(jī)鋅按以下方法制成在動(dòng)物原料中加入堿性蛋白酶或枯草桿菌中性蛋白酶水解得到的多肽，再與無(wú)機(jī)鋅進(jìn)行配合反應(yīng)制得；其中，所述無(wú)機(jī)鋅是氧化鋅、氯化鋅或碳酸鋅，優(yōu)選氧化鋅或碳酸鋅；所述動(dòng)物原料是低值魚(yú)貝類(lèi)水產(chǎn)品、魚(yú)貝類(lèi)加工后的下腳料或廢棄物。本發(fā)明所述的鋅-多肽配合物由以下方法制備得到(1)原料的預(yù)處理將動(dòng)物原料切碎或磨碎；(2y蛋白酶水解取步驟(1)處理后的原料，加入35倍的水，攪拌均勻，用PH調(diào)節(jié)劑調(diào)pH至6.59.5，然后按每克原料7001000U的量加入堿性蛋白酶或枯草桿菌中性蛋白酶，最后在4560'C下，攪拌或搖蕩，水浴23小時(shí)，得水解液；所述的pH調(diào)節(jié)劑是碳酸氫鈉、氫氧化鈉或鹽酸；(3)酶滅活處理將水解液加熱到95100°C，維持IO分鐘，冷卻至室溫，離心，過(guò)濾，取清液；(4)配合反應(yīng)①用醋酸或NaHC03調(diào)節(jié)步驟(3)所得清液的pH至4.07.0:當(dāng)所述清液pH小于4.0時(shí)，用NaHC03或NaOH調(diào)節(jié)，當(dāng)所述清液pH大于7.0時(shí)，用醋酸調(diào)節(jié)；②加入無(wú)機(jī)鋅溶液，然后加入清液45倍的純水于反應(yīng)體系中，在25'C至100。C的條件下反應(yīng)0.510h，反應(yīng)過(guò)程中間歇攪拌；其中，加入O.lg/ml無(wú)機(jī)鋅溶液的體積與清液的體積比為1:10;③反應(yīng)結(jié)束后將其濃縮，冷卻后倒入95%98%乙醇中進(jìn)行沉降，過(guò)濾分離，最后將分離得到的沉淀物用少量蒸餾水或乙醇洗滌，抽干后8010CTC下干燥即可；或者濃縮以后直接進(jìn)行熱風(fēng)干燥或噴霧干燥；其中濃縮的方法可以是真空濃縮，也可以是常壓下加熱濃縮；加熱濃縮的溫度一般在25100'C之間，溫度越低，所得配合物的活性保留越好，但是所需時(shí)間越長(zhǎng)。本發(fā)明方法中，，在磨碎或切碎的原料溶于水后，即步驟(2)中，在用PH調(diào)節(jié)劑調(diào)pH至6.59.5前，還可以于55。C水浴30分鐘，然后于10(TC下熱處理20分鐘，使原料中的蛋白質(zhì)變性，有利于加入蛋白酶后充分水解為多肽；.當(dāng)步驟(2)所用的蛋白酶為堿性蛋白酶時(shí)，最好將原料和水的混合物的pH值調(diào)至9.09.5，加酶后的水浴溫度為5060'C;;當(dāng)步驟(2)所用的蛋白酶為枯草桿菌中性蛋白酶時(shí)，最好將原料和水的混合物的pH值調(diào)至6.57.5，加酶后的水浴溫度為4555"C;步驟(4)中所述清液的pH值優(yōu)選調(diào)節(jié)至4.55.5;加入無(wú)機(jī)鋅的量?jī)?yōu)選與步驟(1)原料重量比為1:21:3;反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選15小時(shí)，反應(yīng)溫度優(yōu)選25。C7(TC。本發(fā)明所述的鋅-多肽配合物不僅含有可被人體和動(dòng)物體吸收的鋅元素，還含有豐富的多肽成分，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫能力的作用，可作為補(bǔ)鋅以及提高機(jī)體免疫力的營(yíng)養(yǎng)品、保健品或動(dòng)物飼料添加劑；所用原料為天然動(dòng)物原料，且為低值農(nóng)漁產(chǎn)品或農(nóng)漁產(chǎn)品加工后的廢料或下腳料，價(jià)格低廉。本發(fā)明所述配合物用于制備含有水、果汁、牛奶、蔗糖、維生素、礦物質(zhì)等基礎(chǔ)配料的飲品的方法是在所述基礎(chǔ)配料中添加0.10.3%本發(fā)明所述的配合物。本發(fā)明所述配合物用于制備豆(奶)粉食品的方法是在豆奶或豆粉中添加0.3-0.5%的本發(fā)明所述配合物。本發(fā)明所述配合物用于制備主要以淀粉為原料的固體食品的方法是在原料中添加0.10.5%的本發(fā)明所述配合物。本發(fā)明所述配合物用于制備主要以豆粕粉為原料的水產(chǎn)飼料的添加劑的使用方法是在原料中添加35%的本發(fā)明所述配合物。本發(fā)明所述配合物用于制備主要以玉米粉、豆粕粉、面粉、麩皮、糠餅等為原料的豬飼料的添加劑的使用方法是在原料中添加13%的本，明所述配合物。本發(fā)明所述配合物作為主要以玉米粉、豆粕粉、魚(yú)粉、菜粕、次面粉、米糠等為原料的禽類(lèi)飼料的添加劑的使用方法是在原料中添加24%的本發(fā)明所述配合物。下面將通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)證明本發(fā)明的技術(shù)效果。一、實(shí)驗(yàn)材料鋅-多肽配合物，制備方法見(jiàn)實(shí)施例l。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組選用體重19.85土0.91g、鼠齡9周的健康雄性昆明種小鼠(由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供)，在安靜、室溫22土2i:條件下喂養(yǎng)，自然光照，每天定時(shí)通風(fēng)。采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物飼料按自由飲食、灌胃生理鹽水或鋅-多肽配合物分組飼養(yǎng)第1組(標(biāo)準(zhǔn)飼料對(duì)照組)，喂食標(biāo)準(zhǔn)飼料，灌胃生理鹽水；第2組(低劑量組，鋅-多肽配合物濃度為0.25mg/ml)，喂食標(biāo)準(zhǔn)飼料，灌胃鋅-多肽配合物；第3組(中劑量組，鋅-多肽配合物濃度為0.5mg/ml)，喂食標(biāo)準(zhǔn)飼料，灌胃鋅-多肽配合物；第4組(高劑量組，鋅-多肽配合物濃度為1.Omg/ml)，喂食標(biāo)準(zhǔn)飼料，灌胃鋅-多肽配合物。連續(xù)喂養(yǎng)30d，然后測(cè)定小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能和肝臟GSH-PX活力、SOD活力等相關(guān)指標(biāo)。三、實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果1、本發(fā)明鋅-多肽配合物對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞活力的影響通過(guò)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(半體內(nèi)法)，測(cè)定巨噬細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)，從而反映巨噬細(xì)胞的吞噬功能，體現(xiàn)機(jī)體的抗病能力。由于巨噬細(xì)胞能吞噬雞紅細(xì)胞，將巨噬細(xì)胞和吞噬雞紅細(xì)胞溫育后染色，在油鏡下計(jì)算吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞的百分比，并觀察細(xì)胞內(nèi)雞紅細(xì)胞的形態(tài)，據(jù)此判斷巨噬細(xì)胞的吞噬功能和消化功能。雞紅細(xì)胞懸液制備雞斷頭取血，與生理鹽水按1:9的比例混合，置于有玻璃珠的錐形瓶中，朝一個(gè)方向充分搖動(dòng)，以脫纖維。用生理鹽水洗滌23次，離心(2000r/rain，10min)，去上清，用生理鹽水配成1%(v/v)的雞紅細(xì)胞懸液。吞噬功能測(cè)定(1)每只小鼠腹腔內(nèi)注射滅菌肉湯培養(yǎng)基lml巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)劑；(2)24h后每鼠腹腔注射lM雞紅細(xì)胞懸液lmL。間隔30min，頸椎脫臼處死小鼠；(3)將其仰位固定于鼠板上，正中剪開(kāi)腹壁皮膚，經(jīng)腹腔注入生理鹽水2mL，輕揉腹部lmin;(4)然后吸出腹腔洗液lmL，平均分滴于2片載玻片上涂片，移置37。C孵箱溫育30min;(5)孵畢，于生理鹽水中漂洗，以除去未貼片細(xì)胞；(6)晾干，以l:l丙酮甲醇溶液固定5min;(7)1:10(v/v)Giemsa-磷酸緩沖液染色30min，再用蒸餾水漂洗，晾干；(8)顯微鏡下觀察巨噬細(xì)胞吞噬雞紅福胞的情況。油鏡下計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞，每張片計(jì)數(shù)100個(gè)，按下式計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)吞噬百分率(％)=-x100計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)(100個(gè))被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)吞噬指數(shù)=-計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)(100個(gè))表2不同劑量配合物的吞噬百分率和吞噬指數(shù)(又土S，n=7)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>如表2所示，吞噬百分率來(lái)講，本發(fā)明配合物的中劑量組和高劑量組處理后的巨噬細(xì)胞的吞噬百分率與第1組(對(duì)照組)之間有明顯差異(P<0.05)，吞噬指數(shù)與第1組(對(duì)照組)之間有極顯著差異(P<0.01)?？梢?jiàn)，鋅-多肽配合物具有刺激巨噬細(xì)胞的吞噬能力，具有抗病毒、抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增強(qiáng)動(dòng)物對(duì)病原體的抗感染能力，明顯降低感染性疾病發(fā)病率等作用。2、本發(fā)明鋅-多肽配合物對(duì)小鼠GSH-PX活力和SOD活力的影響GSH-PX活力的測(cè)定，按照試劑盒(南京建成生物工程研究所提供)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定。SOD活力的測(cè)定，按照試劑盒(南京建成生物工程研究所提供)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定。表3配合物對(duì)小鼠腎肝GSH-Px和SOD活力的影響(又士S,n=7)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>如表3所示，本發(fā)明配合物各劑量組對(duì)GSH-Px和S0D活力的影響與第1組(對(duì)照組)之間都有極顯著差異(P<0.01)，可見(jiàn)，本發(fā)明鋅-多肽配合物具有提高機(jī)體肝腎GSH-PX活力和S0D活力、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、促進(jìn)動(dòng)物健康生長(zhǎng)等作用。3、本發(fā)明鋅-多肽配合物對(duì)超氧自由基清除效果的測(cè)定根據(jù)鄰苯三酚在堿性條件下會(huì)發(fā)生自氧化，生成有色中間產(chǎn)物和趙氧陰離子自由基(02—)，超氧陰離子自由基(02—)對(duì)自氧化有催化作用的原理，采用分光光度法進(jìn)行測(cè)定鋅_多肽配合物對(duì)超氧自由基清除率，見(jiàn)下表所示。表4配合物對(duì)超氧自由基清除效果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>從表4可以看出，鋅-多肽配合物對(duì)超氧自由基具有較好的清除效果，并且隨著鋅-多肽配合物用量的增加，對(duì)超氧自由基的清除效果會(huì)更好。從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明配合物具有刺激巨噬細(xì)胞的吞噬能力，具有提高機(jī)體肝腎GSH-PX活力和SOD活力的作用，對(duì)超氧自由基具有較好的清除效果，能增強(qiáng)動(dòng)物對(duì)病原體的抗感染能力，增強(qiáng)機(jī)體免疫力、促進(jìn)動(dòng)物健康生長(zhǎng)。'圖1是對(duì)照水解蛋白多肽紫外吸收光譜的掃描圖。圖2是本發(fā)明配合物紫外吸收光譜的掃描圖。圖3是水解蛋白多肽和本發(fā)明配合物的紅外光譜對(duì)比圖，其中Sl是水解蛋白多肽的紅外光譜，S2是Zn-多肽配合物的紅外光譜。具體實(shí)施例方式制備例8例1動(dòng)物原料的預(yù)處理稱(chēng)取羅非魚(yú)加工下腳料，用組織搗碎機(jī)或斬拌機(jī)快速切細(xì)，避免原料形成凝膠狀。蛋白質(zhì)水解取一定量原料，按料:水=1:3溶于水中，攪拌，調(diào)節(jié)pH至9.0，加入堿性蛋白酶700U/g原料，在50'C恒溫水浴搖蕩搖床中進(jìn)行酶解反應(yīng)2h,每隔10min搖蕩一次。然后將水解液加熱到100°C、保持10min，冷卻至室溫，過(guò)濾得清液備用。水解時(shí)所用的堿性蛋白酶為Alcalase2.4LFG，由諾維信生物技術(shù)有限公司提供。配合物制備取清液100ml，調(diào)節(jié)pH至4.0，加入濃度為0.1g/ml的氯化鋅溶液10ml，電爐預(yù)熱10min，過(guò)濾除去不溶物，再加入400ml水，然后在70'C進(jìn)行配合反應(yīng)4小時(shí)，然后真空濃縮至10ml左右，冷卻以后倒入95%乙醇中進(jìn)行沉降，過(guò)濾分離，沉淀用少量蒸餾水及乙醇洗滌，抽干后置于80。C烘箱中干燥，即得固態(tài)的Zn-多肽配合物。所得配合物的鑒定1、本發(fā)明配合物的紅外光譜檢測(cè)水解蛋白多肽(PEP)和鋅-多肽配合物(Zn-PEP)分別通過(guò)紅外光譜儀測(cè)定，對(duì)照水解蛋白多肽及其配合物在4000500cm'1區(qū)域的紅外光譜(FTIR)吸收帶及其歸屬統(tǒng)計(jì)如表1所示，圖3是紅外光譜(FTIR)圖。表1鋅-多肽配合物的紅外光譜頻率與歸屬<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>從泉l可以看出，對(duì)照水解蛋白多肽(PEP)與本發(fā)明鋅-多肽配合物(Zn-PEP)的IR光譜在強(qiáng)度和吸收頻率方面均存在較大差異。PEP在3392.96cm'1處的吸收峰在Zn-PEP中移至3325.67cm'1，紅移了71.92cm";PEP合成Zn-PEP后，在3080.61cm"處的吸收峰消失；這些譜帶分別對(duì)應(yīng)著PEP的NH對(duì)稱(chēng)伸縮振動(dòng)和反對(duì)稱(chēng)伸縮振動(dòng)。說(shuō)明多肽分子的氨基和羧基都參與了Zi^+的配位，而且PEP中與鋅結(jié)合的氧同NH之間還可能存在著氫鍵。PEP在2970.89cm"處的吸收峰在Zn-PEP中移至2968.85cm"，紅移了2.04cm-1,這是PEP中CH2，CH基團(tuán)的伸縮振動(dòng)，這說(shuō)明Zr^+與PEP的作用而導(dǎo)致PEP結(jié)構(gòu)構(gòu)型的部分改變。PEP合成Zn-PEP后，在2084.13cnT1處的吸收峰消失；PEP在1662.11cm"處的吸收峰在Zn-PE中移至1654.34cm'1，紅移了7.71cm—1，這是COO'或CO伸縮振動(dòng)，說(shuō)明PEP中羧基的氧參與了Zi^+的配位作用。PEP在1583.22cm"處的吸收峰消失，進(jìn)一步說(shuō)明羧基上的氧直接與Zn2+有直接的配位作用。PEP在1452.59cm"、DQSJOcm-:1319.41cm"、llGl.SGcm^1115.31cm"、1079.64cm"、1049.05cm"等處的吸收峰發(fā)生的紅移，都表明PEP與Zr^+有配位作用，并生成了新的配合物。PEP在1262.64cm"處的吸收峰消失，表明殘基上的氨基和羧基氧均可能與Zr^+直接成鍵，并由氫鍵締合作用。Zn-PEP在878.56cm—1處附近的吸收峰加強(qiáng)和在602.26cm—1處吸收峰的紅移，有可能是Zi^+與N、O所形成的配合鍵的伸縮振動(dòng)引起。通過(guò)譜圖解析結(jié)果可知，PEP與Zn"確實(shí)發(fā)生了配位反應(yīng)，并形成Z戶和N、O之間的配合鍵，引起了PEP分子骨架的部分變化，配合作用發(fā)生在氨基殘基和肽鍵的N、O原子上。2、水解蛋白多肽和鋅-多肽配合物的紫外吸收光譜對(duì)照水解蛋白多肽的紫外吸收光譜見(jiàn)圖1，本發(fā)明鋅-多肽配合物的紫外吸收光譜見(jiàn)圖2所示。從圖1可以看出，水解蛋白的最大吸收峰在210nm處，這是由肽鍵上羰基(C=0)n—f電子躍遷引起的。圖2可以看出配合物的最大紫外吸收峰在216nm處，與水解蛋白多肽的最大吸收峰210nm處相比，位移了6nm。這是由于鋅離子與水解蛋白多肽中的N、O形成配合鍵后，影響了肽鍵上羰基(C=0)n—兀*的電子躍遷；從鋅-配合物紫外吸收光譜掃描圖還可看出，在272nm處有一個(gè)較弱的新吸收峰出現(xiàn)，這是配體(N-C-O)中兀一兀*電子躍遷所致；另外，鋅-配合物在小于200nm和大于300nm的區(qū)域沒(méi)有任何吸收峰。通過(guò)鋅-多肽配合物和水解蛋白多肽的紅外光譜及紫外吸收光譜圖分析表明，鋅離子與水解蛋白多肽中的N、O發(fā)生了鍵合作用，形成了鋅-水解蛋白多肽配合物。例2動(dòng)物原料的預(yù)處理稱(chēng)取羅非魚(yú)加工下腳料，用組織搗碎機(jī)或斬拌機(jī)快速切細(xì)，避免原料形成凝膠狀。蛋白質(zhì)水解取一定量原料，按料:水=1:5溶于水中，攪拌，調(diào)節(jié)pH至7.5，加入枯草桿菌中性蛋白酶1000U/g原料，在55'C恒溫水浴搖蕩搖床中進(jìn)行酶解反應(yīng)3h，每隔10min搖蕩一次。然后將水解液加熱到100'C、保持10min，冷卻至室溫，離心得清液備用。水解時(shí)所用的枯草桿菌中性蛋白酶由廣西南寧龐博生物工程有限公司提供。配合物制備取清液100ml，調(diào)節(jié)pH至4.0，加入濃度為0.1g/ml的氯化鋅溶液10ml，電爐預(yù)熱3min，過(guò)濾除去不溶物，再加入500ml水，然后在IO(TC下進(jìn)行配合反應(yīng)5小時(shí)，然后真空濃縮至10ml左右，冷卻以后倒入95%乙醇中進(jìn)行沉降，過(guò)濾分離，沉淀用少量蒸餾水及乙醇洗滌，抽干后置于IO(TC烘箱中干燥，即得固體Zn-多肽配合物。例3動(dòng)物原嵙的預(yù)處理稱(chēng)取羅非魚(yú)加工下腳料，用組織搗碎機(jī)或斬拌機(jī)快速切細(xì)，避免原料形成凝膠狀。蛋白質(zhì)水解取一定量原料，按料:水=1:4溶于水中，攪拌，調(diào)節(jié)pH至9.0，加入堿性蛋白酶8000U/g原料，在55'C恒溫水浴搖蕩搖床中進(jìn)行酶解反應(yīng)2.5h，每隔10min搖蕩一次。然后將水解液加熱到100'C、保持10min，冷卻至室溫，過(guò)濾得清液備用。水解時(shí)所用的堿性蛋白酶為Alcalase2.4LFG，由諾維信生物技術(shù)有限公司提供。配合物制備取清液100ml，調(diào)節(jié)pH至5.0，加入濃度為0.1g/ml的氧化鋅溶液10ml，電爐預(yù)熱7min，過(guò)濾除去不溶物，再加入400ml水，然后在70'C進(jìn)行配合反應(yīng)3小時(shí)，然后真空濃縮至10ml左右，冷卻以后倒入95%乙醇中進(jìn)行沉降，過(guò)濾分離，沉淀用少量蒸餾水及乙醇洗滌，抽干后置于9(TC烘箱中干燥，即得固體Zn-多肽配合物。例4動(dòng)物原料的預(yù)處理稱(chēng)取羅非魚(yú)加工下腳料，用組織搗碎機(jī)或斬拌機(jī)快速切細(xì)，避免原料形成凝膠狀。蛋白質(zhì)水解取一定量原料，按料:水=l:3溶于水中，攪拌，調(diào)節(jié)pH至7.0，加入枯草桿菌中性蛋白酶IOOOU，在50'C恒溫水浴搖蕩搖床中進(jìn)行酶解反應(yīng)3.0h，每隔10min搖蕩一次。然后將水解液加熱到IO(TC、保持10min,冷卻至室溫，離心得清液備用。水解時(shí)所用的枯草桿菌中性蛋白酶由廣西南寧龐博生物工程有限公司提供。配合物制備取清液100ml，調(diào)節(jié)pH至5.0，加入濃度為0.1g/ml的氯化鋅溶液10ml，電爐預(yù)熱3-10min，過(guò)濾除去不溶物，再加入400ml水，然后在70。C進(jìn)行配合反應(yīng)4小時(shí)，然后真空濃縮至10ml左右，冷卻以后倒入95%乙醇中進(jìn)行沉降，過(guò)濾分離，沉淀用少量蒸餾水及乙醇洗滌，抽干后置于8(TC烘箱中干燥，即得固體Zn-多肽配合物。例5動(dòng)物原料的預(yù)處理稱(chēng)取羅非魚(yú)加工下腳料，用組織搗碎機(jī)或斬拌機(jī)快速切細(xì)，避免原料形成凝膠狀。蛋白質(zhì)水解取一定量原料，按料:水=1:3溶于水中，攪拌，調(diào)節(jié)pH至9.0，加入堿性蛋白酶1000U/g原料，在55'C恒溫水浴搖蕩搖床中進(jìn)行酶解反應(yīng)3.0h，每隔10min搖蕩一次。然后將水解液加熱到IOO'C、保持10min，冷卻至室溫，過(guò)濾得清液備用。水解時(shí)所用的堿性蛋白酶為Alcalase2.4LFG，由諾維信生物技術(shù)有限公司提供。配合物制備取清液100ml，調(diào)節(jié)pH至5.0，加入濃度為0.1g/ml的碳酸鋅溶液10ml，電爐預(yù)熱10min，過(guò)濾除去不溶物，再加入400ml水，然后在25'C進(jìn)行配合反應(yīng)lh，反應(yīng)完成后經(jīng)于45'C、常壓下濃縮，最后噴霧干燥，即得到固態(tài)鋅-多肽配合物。例6動(dòng)物原料的預(yù)處理稱(chēng)取羅非魚(yú)加工下腳料，用組織搗碎機(jī)或斬拌機(jī)快速切細(xì)，避免原料形成凝膠狀。蛋白質(zhì)水解取一定量原料，按料:水=1:5溶于水中，攪拌，調(diào)節(jié)pH至7.5，加入枯草桿菌中性蛋白酶1000U/g原料，在45'C恒溫水浴搖蕩搖床中進(jìn)行酶解反應(yīng)2h，每隔10min搖蕩一次。然后將水解液加熱到95'C、保持10min，冷卻至室溫，過(guò)濾得清液備用。水解時(shí)所用的枯草桿菌中性蛋白酶由廣西南寧龐博生物工程有限公司提供。配合物制備取清液100ml，調(diào)節(jié)pH至5.0，加入濃度為0.1g/ml的氯化鋅溶液10ml，電爐預(yù)熱10min，過(guò)濾除去不溶物，再加入400ml水，然后在5(TC下進(jìn)行配合反應(yīng)0.5h，反應(yīng)完成后于60。C、常壓下濃縮，噴霧干燥或熱風(fēng)干燥，即得到可溶性固態(tài)鋅-多肽配合物。例7動(dòng)物原料的預(yù)處理稱(chēng)取羅非魚(yú)加工下腳料，用組織搗碎機(jī)或斬拌機(jī)快速切細(xì)，避免原料形成凝膠狀。蛋白質(zhì)水解取一定量原料，按料:水=l:3溶于水中，攪拌，調(diào)節(jié)pH至9.0，加入堿性蛋白酶1000U/g原料，在60。C恒溫水浴搖蕩搖床中進(jìn)行酶解反應(yīng)3.0h，每隔10min搖蕩一次。然后將水解液加熱到IO(TC、保持10min，冷卻至室溫，過(guò)濾得清液備用。水解時(shí)所用的堿性蛋白酶為Alcalase2.4LFG，由諾維信生物技術(shù)有限公司提供。配合物制備取清液100ml，調(diào)節(jié)pH至7.0，加入濃度為0.1g/ml的氯化鋅溶液10ml，電爐預(yù)熱10min，過(guò)濾除去不溶物，再加入400ml水，然后在70'C進(jìn)行配合反應(yīng)10h,反應(yīng)完成后經(jīng)真空濃縮，噴霧干燥，即得到可溶性固態(tài)鋅-多肽配合物。例8動(dòng)物原料的預(yù)處理稱(chēng)取羅非魚(yú)加工下腳料，用組織搗碎機(jī)或斬拌機(jī)快速切細(xì)，避免原料形成凝膠狀。蛋白質(zhì)水解取一定量原料，按料:水=1:3溶于水中，攪拌，55。C水浴30分鐘，然后于10(TC下熱處理20分鐘，冷卻后調(diào)節(jié)pH至7.0，加入枯草桿菌中性蛋白酶1000U/g原料，在5(TC恒溫水浴搖蕩搖床中進(jìn)行酶解反應(yīng)3.0h，每隔10min搖蕩一次。然后將水解液加熱到100°C、保持10min，冷卻至室溫，過(guò)濾得清液備用。水解時(shí)所用的枯草桿菌中性蛋白酶由廣西南寧龐博生物工程有限公司提供。配合物制備取清液100ml，調(diào)節(jié)pH至5.0，加入濃度為0.1g/ml的氯化鋅溶液10ml，電爐預(yù)熱10min，過(guò)濾除去不溶物，再加入400ml水，然后在7(TC進(jìn)行配合反應(yīng)4h，反應(yīng)完成后于IOO'C、常壓下濃縮，熱風(fēng)干燥，即得鋅-多肽配合物。應(yīng)用例例1鋅多肽配合物在飲品中的應(yīng)用一種飲品，主要由水、果汁、牛奶、蔗糖、維生素、礦物質(zhì)等基礎(chǔ)配料和相當(dāng)基礎(chǔ)配料重量0.2%的本發(fā)明所述鋅-多肽配合物組成，其制備方法是將本發(fā)明鋅-多肽配合物分散加入到基礎(chǔ)配料中，充分混勻，然后按照飲品加工工藝操作，即可。例2鋅-多肽配合物在粉末或顆粒食品中的應(yīng)用一種豆粉食品，主要由全脂大豆粉、大米粉、糖漿、植物油、白沙糖、卵磷脂、礦物質(zhì)、維生素等基礎(chǔ)配料和相當(dāng)基礎(chǔ)配料重量0.4%的本發(fā)明所述鋅-多肽配合物組成，其制備方法是將本發(fā)明鋅-多肽配合物分散加入到基礎(chǔ)配料中，充分混勻，然后按照豆粉加工工藝操作，即可。例3鋅_多肽配合物在固體食品中的應(yīng)用一種糕點(diǎn)食品，主要由精粉、白砂糖、食油、雞蛋、奶粉、淀粉、香精、乳酸鈣、碳酸氫銨、小蘇打、亞硫酸氫鈉等基礎(chǔ)配料和相當(dāng)基礎(chǔ)配料重量0.3%的本發(fā)明鋅-多肽配合物組成，其制備方法是將本發(fā)明鋅-多肽配合物分散加入到基礎(chǔ)配料中，充分混勻，然后按照糕點(diǎn)加工工藝操作，即可。例4鋅_多肽配合物作為水產(chǎn)飼料添加劑的應(yīng)用一種水產(chǎn)養(yǎng)殖飼料，主要由豆粕粉、魚(yú)粉、維生素、礦物質(zhì)、黏合劑等原來(lái)組成和相當(dāng)原料重量3%的本發(fā)明鋅_多肽配合物組成，其制備方法是將本發(fā)明鋅-多肽配合物分散加入到所述原料干粉中，充分混勻，然后按照飼料生產(chǎn)加工工藝制備，即可。例5鋅_多肽配合物作為豬飼料添加劑的應(yīng)用一種豬飼料，主要由玉米粉、豆粕粉、面粉、麩皮、糠餅、維生素、礦物質(zhì)、氨基酸等原料和相當(dāng)原料重量1-3%的本發(fā)明鋅-多肽配合物組成，其制備方法是將本發(fā)明鋅-多肽配合物分散加入到原料干粉中，充分混勻，然后按照飼料生產(chǎn)加工工藝制備，即可。例6鋅-多肽配合物作為禽類(lèi)飼料添加劑的應(yīng)用一種禽類(lèi)飼料，主要由玉米粉、豆粕粉、魚(yú)粉、菜粕、次面粉、米糠、維生素、磷酸氫鈣、氨基酸等原料和相當(dāng)原料重量3%的本發(fā)明鋅-多肽配合物組成，其制備方法是將本發(fā)明鋅-多肽配合物分散加入到原來(lái)干粉中，充分混勻，然后按照飼料生產(chǎn)加工工藝制備，即可。權(quán)利要求1.一種鋅-多肽配合物，該配合物由重量比為1∶1～1∶5的動(dòng)物原料與無(wú)機(jī)鋅按以下方法制成在動(dòng)物原料中加入堿性蛋白酶或枯草桿菌中性蛋白酶水解得到的多肽，再與無(wú)機(jī)鋅進(jìn)行配合反應(yīng)制得；其中，所述無(wú)機(jī)鋅是氧化鋅、氯化鋅或碳酸鋅；所述動(dòng)物原料是低值魚(yú)貝類(lèi)水產(chǎn)品、魚(yú)貝類(lèi)加工后的下腳料或廢棄物。2、權(quán)利要求1所述的鋅-多肽配合物，其特征在于所述的無(wú)機(jī)鋅是氧化鋅、氯化鋅或碳酸鋅。3、權(quán)利要求l或2所述的鋅-多肽配合物的制備方法，該方法包括以下步驟(1)原料的預(yù)處理將動(dòng)物原料切碎或磨碎；(2)蛋白酶水解取步驟(1)處理后的原料，加入35倍的水，攪拌均勻，用PH調(diào)節(jié)劑調(diào)pH至6.59.5，然后按每克原料7001000U的量加入堿性蛋白酶或枯草桿菌中性蛋白酶，最后在456(TC下，攪拌或搖蕩，水浴23小時(shí)，得水解液；所述的pH調(diào)節(jié)劑是碳酸氫鈉、氫氧化鈉或鹽酸；(3)酶滅活處理將水解液加熱到9510(TC，維持10分鐘，冷卻至室溫，離心，過(guò)濾，取清液；(4)配合反應(yīng)①用醋酸或NaHC03調(diào)節(jié)步驟(3)所得清液的pH至4.07.0:當(dāng)所述清液pH小于4.0時(shí)，用NaHC03或NaOH調(diào)節(jié)，當(dāng)所述清液pH大于7.0時(shí)，用醋酸調(diào)節(jié)；②加入無(wú)機(jī)鋅溶液，然后加入清液45倍的純水于反應(yīng)體系中，在25'C100'C的條件下反應(yīng)0.510h，反應(yīng)過(guò)程中間歇攪拌；其中，加入0.lg/ml無(wú)機(jī)鋅溶液的體積與清液的體積比為1:10;③反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行真空濃縮或常壓加熱濃縮，冷卻后倒入95%98%乙醇中進(jìn)行沉降，過(guò)濾分離，最后將分離得到的沉淀物用少量蒸餾水或乙醇洗滌，抽干后干燥即可；或者，濃縮以后直接進(jìn)行熱風(fēng)干燥或噴霧干燥。4、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于步驟(2)中，在用PH調(diào)節(jié)劑調(diào)pH至6.59.5前先經(jīng)過(guò)以下處理于55。C水浴30分鐘，接著100。C下熱處理20分鐘。5、如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于步驟(2)中，當(dāng)所用的蛋白酶是堿性蛋白酶時(shí)，原料加水混勻后用碳酸氫鈉或氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至9.09.5，加酶后的水浴溫度為5060。C。6、如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于步驟(2)中，當(dāng)所用的蛋白酶是枯草桿菌中性蛋白酶時(shí)，原料加水混勻后用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6.57.5，加酶后的水浴溫度為4555。C。7、如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于步驟(4)中配合反應(yīng)的時(shí)間為15小時(shí)。8、如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于步驟(4)中配合反應(yīng)的溫度為25'C70。C。9、權(quán)利要求l或2所述的鋅-多肽配合物在制備補(bǔ)鋅和增強(qiáng)機(jī)體免疫力的食品、營(yíng)養(yǎng)品、保健品或動(dòng)物飼料中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明提供了一種鋅-多肽配合物，該配合物由重量比為1∶1～1∶5的鋅的無(wú)機(jī)物與動(dòng)物原料按以下方法制成動(dòng)物原料被蛋白酶水解得到多肽，再與鋅的無(wú)機(jī)物進(jìn)行配合反應(yīng)制得。本發(fā)明所述的配合物不僅含有可被人體和動(dòng)物體吸收的鋅元素，還含有的多肽成分，具有補(bǔ)鋅和增強(qiáng)機(jī)體免疫能力的作用，可作為補(bǔ)鋅以及提高機(jī)體免疫力的食品、營(yíng)養(yǎng)品、保健品或動(dòng)物飼料添加劑；所用原料為天然動(dòng)物原料，且為低值農(nóng)漁產(chǎn)品或農(nóng)漁產(chǎn)品加工后的廢料或下腳料，價(jià)格低廉。文檔編號(hào)A23K1/175GK101283805SQ20081002821公開(kāi)日2008年10月15日申請(qǐng)日期2008年5月22日優(yōu)先權(quán)日2008年5月22日發(fā)明者曾慶祝,許慶陵申請(qǐng)人:廣州大學(xué)