專利名稱：菲律賓蛤仔雜交系的制種方法
技術領域：
本發明屬于貝類養殖范疇，具體涉及菲律賓蛤仔的制種方法。
技術背景菲律賓蛤仔(^必^pes p力j7j》;^/^rM7)屬雙殼綱簾蛤科、綴錦亞科、蛤 仔屬，屬于廣溫、廣鹽性品種。目前在世界約200萬噸的菲律賓蛤仔產量中，約 90%來自于養殖，且主要來自我國大陸的養殖(Goulletquer 1997)。 1999年我 國灘涂貝類的產量為246.4萬噸，其中73%為菲律賓蛤仔，約占我國海水養殖總 產量的18.4%。隨著人民生活水平的提高，國內外市場均供不應求，市場潛力巨 大。但是由于不注重資源保護，亂采濫捕，其天然產量呈逐年下降趨勢。目前 苗種嚴重不足，種質退化是制約我國北方地區蛤仔養殖業發展的"瓶頸"(閏 喜武，2005)。菲律賓蛤仔貝殼形態變化很大，殼面顏色和花紋變化各異，曾被許多分類 學家定義為不同的種(莊啟謙，2000)。長期以來，人們認識到這種殼色多態現 象，但很少有人通過雜交來研究這種殼色多態的原因。Peignon等(1995)通過 相同殼色蛤仔的近緣雜交，分析了菲律賓蛤仔殼色的決定機制，并主要研究了 殼色、殼面花紋的遺傳變異和出現殼色純合的原理。閆喜武等(2002-2005) 建立了菲律賓蛤仔殼色品系，通過群體雜交，成功紅斑馬殼色品系。張躍環等(2005-2008)在此基礎上，開展了不同殼色菲律賓蛤仔的單體雜交，群體雜交， 獲得了生長性狀優良的雜交系。在我國，同一種貝類的殼色品系間雜交報導很少。大多利用殼色的可遺傳 性，通過定向選育來獲取新品種。鄭懷平等(2003， 2004)通過建立海灣扇貝"2^ope"e/2 irra必a/7s)雜交、自交、殼色家系，對其生長與存活進行了比 較，發現雜交使表型性狀得到了改良，存在的雜種優勢；不同殼色個體間存在 生長、存活上的差異。閆喜武等(2002-2005)在對菲律賓蛤仔研究中發現，不 同殼色的菲律賓蛤仔生長發育存在差別并且殼色這一質量性狀可以穩定遺傳給 后代，通過群體雜交首次獲得了世界上唯一的紅斑馬品系。
發明內容
為解決菲律賓蛤仔種質退化的問題，張躍環等(2005-2008)在此基礎上， 開展了不同殼色菲律賓蛤仔的單體雜交，研究發現其子代的殼色表現與性別無 關，為非伴性遺傳，在此基礎上進行群體雜交，得到紅斑馬、白斑馬、兩道紅 斑馬等殼色雜交品系。
本發明提供一種以殼色為標記的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，通過對不 同殼色菲律賓蛤仔品系的雜交選育，包括兩道紅、兩道白、瑪瑙黑、海洋紅、 珍珠白、斑馬蛤、波紋蛤品系的生長發育比較，使得殼色得到純化，從而篩選 出生長快、抗逆性強的殼色品系。
本發明是這樣實現的(1).先采用不同殼色品系間的單體雜交的策略，包 括珍珠白X斑馬蛤、海洋紅X斑馬蛤、珍珠白X海洋紅的雜交，在親貝性腺成
熟時，通過人工刺激的方法促使親貝產卵、排精，經過產卵及孵化、幼蟲培養、 稚貝培育、稚貝中間育成環節，獲得不同殼色的子代；(2).通過不同殼色生 長發育比較發現，珍珠白、海洋紅、兩道紅具有生長快的特點，斑馬蛤具有抗 逆性強的特點，通過單體雜交，發現其子代的殼色表現與性別無關，為非伴性 遺傳，在此基礎上，開展兩兩殼色品系間的群體雜交，包括海洋紅X斑馬蛤、 白蛤X斑馬蛤、兩道紅X斑馬蛤的群體雜交，當親貝性腺成熟時，通過人工刺 激的方法促使親貝產卵、排精，經過幼蟲培養、稚貝培育、稚貝中間育成等環 節，獲得子一代的親本殼色的蛤仔品系和雜交種的殼色品系。
所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于按常規方法進行產卵、 孵化的操作過程中采取嚴格的隔離措施，即對親本產卵、排精開始到孵化成D形 幼蟲階段所采用的一切器具和設施進行清洗，并對親本進行清洗后再放入相應 容器中放養。
所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于所述人工刺激的方法 為陰干2-12h，流水刺激O. 5-1. 5h。
所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于在稚貝中間育成時，
定期更換不同數目的網袋，即60目-40目-20目。
所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于在幼蟲培養時每天投
喂的餌料為，前期投喂綠色巴夫藻，后期混合投喂質量比l: l的綠色巴夫藻和 小球藻；所述綠色巴夫藻為湛江等鞭金藻。所述(1)的制種方法，具體步驟如下
a. 親貝來源與選取從野生群體(養殖群體)中，選出2齡的殼型規整， 殼色一致的兩道紅、兩道白、瑪瑙黑、海洋紅、珍珠白、斑馬蛤、波紋蛤作為 繁殖群體，放到生態蝦池中進行自然促熟。定期取樣觀察性腺發育，待其性腺 成熟。
b. 產卵及孵化當其親貝性腺成熟時，通過陰干4h，流水lh的剌激，2-4h 后親開貝始產卵排精，將正在產卵排精的個體抓出來，用自來水沖洗干凈，放 到盛有新鮮海水的2.0L紅色塑料桶中，大約經過5-15min，單獨放置的個體會 繼續產卵排精。共選取6個，海洋紅、白蛤、斑馬蛤雌雄各一個，建立了3個雜 交組合海洋紅X斑馬蛤、白蛤x斑馬蛤、白蛤X海洋紅，3個自交組合海洋紅X 海洋紅、白蛤X白蛤、斑馬蛤X斑馬蛤，實現3X3的雙列雜交。受精前檢査卵 子是否已經受精，已受精個體的卵子棄掉，換取未受精的個體進行雜交，將獲 得的精卵組合好受精，在事先處理好的備用紅色塑料桶中迅速混合，攪拌均勻。 用150目篩絹網過濾雜質，轉入10L紅桶中孵化，調整密度5-6個/ml，充氣孵化。 大約經過25h，發育至D形幼蟲。整個操作過程中，各實驗組嚴格隔離，使其不
受外來精卵的影響。
c. 幼蟲培養用300目篩絹網制作的網箱選育D形幼蟲，幼蟲培養密度6-8 個/ml，每2天換1次水，換水量為100%。餌料每天投喂2次，前期為綠色巴夫藻(湛 江等鞭金藻)，后期為綠色巴夫藻(湛江等鞭金藻)、小球藻(1: 1)混合投 喂，投餌量適幼蟲攝食情況而定。為防止白色塑料桶中不同殼色蛤仔幼蟲之間 混雜，換水網箱單獨使用。幼蟲培育期間，水溫為20.4-23.6t:，鹽度為24-28。為 了消除養殖密度的影響，在幼蟲期定期對密度進行調整。
d. 稚貝培育幼蟲變態后，正常培育同c。當稚貝生長至40日齡時，春季 稚貝裝入60目的網袋中，進行中間育成；秋季稚貝裝入80目的網袋，并保證每 種殼色蛤仔稚貝密度一致。進行室內越冬，水溫為生態池中自然水溫。
e. 稚貝中間育成于當年的7-10月或次年5-10月在該場的生態池中進行中 間育成。中間育成采用60目網袋(40cmX60cm)，在稚貝中間育成階段，定期更 換不同目數的網袋(60目-40目-20目)，消除網目對稚貝生長的影響；同時， 對密度進行調整，使每個重復密度保持一致。水泥池中混合個體大概在3mm左右可色就完全表現出來，在更換網目的過程中，將各種殼色子代挑選出來，進行 中間育成。f.經過幼蟲培養、稚貝培育、中間育成等環節，獲得了子一代的各種殼色的蛤仔品系。9月下旬的子代性腺成熟，可以產卵，從而獲得子二代，如此循環 下去使得殼色得到進一步純化。從中篩選出生長快、抗逆性強的殼色品系。 所述(2)的制種方法，具體步驟如下親貝來源同(1)中的a，當其親貝性腺成熟時，將海洋紅與斑馬蛤(各30 個)、白蛤與斑馬蛤(各30個)、兩道紅與斑馬蛤(各30個)分別放到各自的 白色塑料桶中。通過陰干8h，流水lh的剌激，2-4h后親開貝始產卵排精，從而 得到了3個兩兩殼色品系間的群體雜交組合。該組合的特點是，子代中除了親本 原有的兩種殼色外，還會出現雜交種的殼色表現，可以獲得大量子代。其它同 (1)中的b、 c、 d、 e、 f。所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于按常規方法進行產卵、 孵化的操作過程中采取嚴格的隔離措施，即對親本產卵、排精開始到孵化成D形 幼蟲階段所采用的一切器具和設施進行清洗，并對親本進行清洗后再放入相應 容器中。本發明的優點和積極效果在于本發明利用殼色這一質量性狀為標記，以不同殼色的菲律賓蛤仔為材料，通過單體雜交、群體雜交獲得具有優良性狀的 雜交系。具體地說，以生長快的珍珠白、海洋紅、兩道紅品系，抗逆性強的斑馬蛤品系為材料；在此基礎上，建立了雜交系，得到了生長快、抗逆性強的白 斑馬、紅斑馬雜交品系。本發明獲得雜交系具有生長快，存活率高的特點，從 而有效的提高了菲律賓蛤仔產量，為菲律賓蛤仔品種改良奠定了良好的基礎。 無需轉基因等復雜技術導入外源基因，不會對生物和環境安全造成影響。 以殼色作為遺傳標記進行雜交，獲得具有雜種優勢的外觀漂亮的雜交品系，即 紅斑馬、白斑馬、兩道紅斑馬等殼色雜交品系。白斑馬、紅斑馬具有生長快、 抗逆性強的特點。其生長速度提高了 12-20%，存活率提高了 50-200%。該雜交 系后代殼色可以穩定遺傳，不會出現分離現象，這為大規模生產及品種推廣奠 定了良好的基礎。最終達到利用殼色這一質量性狀控制數量性狀，對生長發育 指標、經濟性狀進行改良的目的。
具體實施方式
實施例1.
a. 親貝來源與選取2006年6月，從野生群體(養殖群體)中，選出2齡 的殼型規整，殼色一致的海洋紅、珍珠白、兩道紅、斑馬蛤作為繁殖群體，放 到生態蝦池中進行自然促熟。定期取樣觀察性腺發育，待其性腺成熟。
b. 2006年9月下旬，當其親貝性腺成熟時，通過陰干4h，流水lh的刺激， 2-4h后親開貝始產卵排精，將正在產卵排精的個體抓出來，用自來水沖洗干凈， 放到盛有新鮮海水的2.0 L紅色塑料桶中，大約經過5-15min，單獨放置的個 體會繼續產卵排精。共選取6個，海洋紅(R)、白蛤(W)、斑馬蛤(Z)雌雄各 一個，建立了 3個雜交組合RXZ、 WXZ、 WXR， 3個自交組合RXR、 WXW、 ZXZ， 即6個正反交組合RZ、 ZR、 WZ、 ZW、 WR、 RW，實現3X3的雙列雜交。受精前檢 査卵子是否已經受精，已受精個體的卵子棄掉，換取未受精的個體進行雜交， 在事先處理好的備用紅色塑料桶中迅速混合，攪拌均勻。用150目篩絹網過濾 雜質，轉入10L紅桶中孵化，調整密度5-6個/ml，充氣孵化。大約經過25h， 發育至D形幼蟲。整個操作過程中，各實驗組嚴格隔離，使其不受外來精卵的 影響。
c.幼蟲培養用300目篩絹網制作的網箱選育D形幼蟲，幼蟲培養密度6-8 個/ml，每2天換1次水，換水量為100%。餌料每天投喂2次，前期為綠色巴夫藻(湛 江等鞭金藻)，后期為綠色巴夫藻(湛江等鞭金藻)、小球藻(1: 1)混合投 喂，投餌量適幼蟲攝食情況而定。為防止白色塑料桶中不同殼色蛤仔幼蟲之間 混雜，換水網箱單獨使用。幼蟲培育期間，水溫為20.4-23.6'C，鹽度為24-28。為 了消除養殖密度的影響，在幼蟲期定期對密度進行調整。
d.稚貝培育幼蟲變態后，正常培育同c。當稚貝生長至40日齡時，春季稚 貝裝入60目的網袋中，進行中間育成；秋季稚貝裝入80目的網袋，并保證每種 殼色蛤仔稚貝密度一致。進行室內越冬，水溫為生態池中自然水溫。
e.稚貝中間育成于當年的7-10月或次年5-10月在該場的生態池中進行中 間育成。中間育成采用60目網袋(40cmX60cm)，在稚貝中間育成階段，定期更 換不同目數的網袋(60目-40目-20目)，消除網目對稚貝生長的影響；同時， 對密度進行調整，使每個重復密度保持一致。水泥池中混合個體大概在3mm左右
7可色就完全表現出來，在更換網目的過程中，將各種殼色子代挑選出來，進行 中間育成。f.經過幼蟲培養、稚貝培育、中間育成等環節，獲得了子一代的各種殼色的蛤仔品系。第二年9月下旬的子一代性腺成熟，可以產卵，從而獲得子二代，發現子二代殼色表現一致，不具有分離現象。從中篩選生長快、抗逆性強的雜 交品系。實施例2.在實施例1的基礎上，于2006年9月下旬，親貝性腺成熟時，將海洋紅與 斑馬蛤(各30個)、珍珠白與斑馬蛤(各30個)、兩道紅與斑馬蛤(各30個) 分別放到各自的白色塑料桶中。通過陰干8h，流水lh的刺激，2-4h后親開貝 始產卵排精，從而得到了 3個兩兩殼色品系間的群體雜交組合。該組合的特點 是，子代中除了親本原有的兩種殼色外，還會出現雜交種的殼色表現。其它同 實施例l中的b、 c、 d、 e、 f。這樣，可以得到大量的雜交子代，且發現雜交個 體顯著大于對照群體。白斑馬、紅斑馬的生長速度分別提高了 15-20%、 12-18%， 存活率提高了 100-200%、 50-100%。說明白斑馬、紅斑馬具有生長快、抗逆性強 的特點。
權利要求
1、一種菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于以殼色作為遺傳標記對菲律賓蛤仔進行雜交，從而獲得穩定遺傳的，不會出現性狀分離現象的殼色品系；所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，具體為海洋紅×斑馬蛤、白蛤×斑馬蛤、兩道紅×斑馬蛤的群體雜交，當親貝性腺成熟時，通過人工刺激的方法促使親貝產卵、排精，經過幼蟲培養、稚貝培育、稚貝中間育成等環節，獲得子一代的親本殼色的蛤仔品系和雜交種的殼色品系。
2、 如權利要求l所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于按常 規方法進行產卵、孵化的操作過程中采取嚴格的隔離措施，即對親本產卵、排 精開始到孵化成D形幼蟲階段所采用的一切器具和設施進行清洗，并對親本進行 清洗后再放入相應容器中放養。
3、 如權利要求l所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于所述人工刺激的方法為陰干2-12h，流水剌激O. 5-1. 5h。
4、 如權利要求1或2所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于在稚貝中間育成時，定期更換不同數目的網袋，即60目-40目-20目。
5、 如權利要求1或2所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于在幼蟲培養時每天投喂的餌料為，前期投喂綠色巴夫藻，后期混合投喂體積比1: 1的綠色巴夫藻和小球藻；所述綠色巴夫藻可以用湛江等鞭金藻取代。
全文摘要
一種菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，利用殼色這一質量性狀為標記，以不同殼色的菲律賓蛤仔為材料，通過單體雜交、群體雜交獲得具有優良性狀的雜交系。具體地說，以生長快的珍珠白、海洋紅、兩道紅品系，抗逆性強的斑馬蛤品系為材料；在此基礎上，建立了雜交系，得到了生長快、抗逆性強的白斑馬、紅斑馬雜交品系。本發明獲得雜交系具有生長快，存活率高的特點，從而有效的提高了菲律賓蛤仔產量，為菲律賓蛤仔品種改良奠定了良好的基礎。
文檔編號A23K1/18GK101292635SQ20081001175
公開日2008年10月29日 申請日期2008年6月11日 優先權日2008年6月11日
發明者澎 張, 張國范, 張躍環, 順 方, 鳳 楊, 潘發林, 閆喜武 申請人:大連水產學院