專利名稱：：擬盤多毛孢毒素在除草劑中的應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及擬盤多毛孢毒素的用途，尤其涉及在除草劑領域中的用途。
背景技術：
：擬盤多毛孢[尸"to/o"o戸^gwe//m7(Desm)Stey.]是一種植物病原真菌，可以引起毛竹葉斑病和杉木縮頂病等多種病害。該病害對寄主植物具有很強的破壞作用，能造成寄主植物大量落葉。這己為公眾所熟知。近年來，從真菌代謝產物中分離鑒定除草活性物質，直接用于雜草防除或模擬活性物質結構，人工合成除草劑，己成為雜草防除研究和微生物除草劑開發的熱點領域。通過檢索相關資料，未見以擬盤多毛孢粗毒素為主要成分的生物源除草劑劑型的相關報道。
發明內容本發明的目的在于提供擬盤多毛孢毒素的新用途，即在除草劑中的應用。為了更好地理解本發明的實質，下面將擬盤多毛孢毒素應用于除草的實驗結果來說明其在除草劑領域中的新用途。將保存于PDA斜面上的擬盤多毛孢菌株接種于平板上，所述的PDA斜面其組成為馬鈴薯200g，瓊脂20g，葡萄糖20g，水1000mL。在253(TC黑暗條件下培養，待菌落約4)80mm時，用4>5mm無菌打孔器切取菌落外緣菌絲制備成菌餅。將含馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000mL的PD培養基或含玉米粉200g，葡萄糖20g，水1000mL的玉米粉培養基或含玉米粉100g，黃豆粉100g，葡萄糖20g，水1000mL的玉米—黃豆粉培養基裝于250mL三角瓶中，每瓶150mL，定量接種菌餅3塊，在轉速為150200r/min、2530。C黑暗條件下振蕩培養15天，將擬盤多毛孢培養液用雙層脫脂棉紗布濾去菌絲，即得到粗毒素培養濾液，取粗毒素培養濾液，用等體積的乙酸乙酯萃取3次，'合并萃取后的乙酸乙酯并進行濃縮近干，然后用甲醇定容至總體積的1/51/8，即得到粗毒素，然后，向粗毒素中加入表面活性劑1601即三苯乙烯基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚EPE型，余量用水補齊，最后充分混勻即可。表面活性劑1601的分子結構式如下CH3—CH—O(EO)n(PO)m(EO)pH」31601采用莖葉處理法對其進行除草生物活性測定。具體方法為在口徑07cm、高10cm的塑料杯中，杯底有3個0O.2cm的孔，裝入8cm深的蛭石，在每杯中分別均勻地播種已發芽的稗草、或馬唐、或牛筋草、或狗尾草、或虎尾草種子25粒，然后覆蓋lcm厚的蛭石，將播種后的塑料杯轉入瓷盤中，同時保持約0.5cm的水層，置于溫度25°C、光照強度為3800LX、相對濕度70%條件下進行培養，待雜草生長至約35cm時供試驗用。將所得到的擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑用水稀釋不同倍數后用喉頭噴霧器均勻噴灑，以雜草葉片濕潤為止，以清水為對照，每個處理重復3次，在培養雜草生長的條件下培養48小時后，用目測法觀察抑制作用。其分級標準為生長抑制率同對照為0級；生長抑制率小于25。％為1級；生長抑制率在25%50%為2級；生長抑制率在50%75°/。為3級；生長抑制率在75%95%為4級；生長抑制率在95%以上為5級。本申請人將所得的35%擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑進行防除棉花田雜草的田間藥效試驗，所得到的擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑的用量為200mL/667m2，以山東京博農化有限責任公司生產的5。％精喹禾靈乳油為對照藥劑，其用量為100mL/667m2，同時設清水為空白對照。施藥方法為在棉花田行間定向莖葉噴霧處理，所用噴霧器為工農16型手動噴霧器，噴水量為30L/667m2。試驗地設在保定市郊的四平莊村，試驗地地勢平坦，肥力一致，播種密度為3000株/667m2。田間主要雜草有稗草、馬唐、牛筋草、狗尾草、虎尾草等。棉花于2007年4月15日播種，待株高約1520cm時進行藥效試驗，供試棉花品種為冀2000。在每個小區中，按棋盤式隨機取5個調査-點，每點面積為0.25m2，于施藥前和施藥后2天、3天、10天調査各處理區雜草種類和雜草株數，每個處理重復3次。按下列公式計算防效防除效果(％)=(1—TaXCVTbXCa)X100。其中i;為處理區防治后殘存的雜草株數；Tb為處理區防治前殘存的雜草株數；Ca為對照區防治后殘存的雜草株數；Cb為對照區防治前殘存的雜草株數。結果見表l。表135%擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑對棉花田雜草的防除效果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>田間試驗結果表明35%擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑對棉花田雜草具有較好的防除效果，施藥后2天和3天的防效分別為78.5%和82.6%，而5%精喹禾靈乳油的防效僅為10.5%禾[113.40%，由此可見，35%擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑對雜草防除的速效性要高于5%精喹禾靈乳油；35。％擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑10天的防效為90.6%，5%精喹禾靈乳油10天的防效為94.6%，但從田間目測結果來看，利用本發明的除草劑對棉花田中的雜草具有較好的控制作用。35%擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑對供試的棉花品種沒有藥害。采用莖葉處理法的試驗結果表明，本發明的擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑對稗草、馬唐、牛筋草、狗尾草、虎尾草等雜草具有較好的防治效果。擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑對稗草、馬唐的抑制作用最強，其抑制程度均為5級；對牛筋草、狗尾草、虎尾草的抑制程度為45級，而清水對照對供試雜草的生長沒有抑制作用。從以上結果，可以得出本發明的優點在于本發明對擬盤多毛孢粗毒素發掘了新的用途，開拓了一個新的應用領域；本發明的擬盤多毛孢粗毒素應用在除草劑中，除草效果明顯，預示著良好的藥用前景-具體實施例方式為了更清楚的理解本發明，以下通過申請人給出的技術方案所完成的具體實施例對本發明作進一步的詳細描述，這些僅是本發明較好的實施例，但不限于這些實施例。實施例1:將本發明人保存的擬盤多毛孢菌株接種于PDA平板上，在253(TC黑暗條件下培養，待菌落約爭80mm時，用無菌打孔器(45mm)切取菌落外緣菌絲制備成菌餅。將PD培養基裝于250mL三角瓶中，每瓶150mL，定量接種菌餅3塊，在150r/min25"C黑暗條件下培養15天。將擬盤多毛孢培養液用雙層脫脂棉紗布濾去菌絲，即得到粗毒素培養濾液。取3000mL粗毒素培養濾液，分別用1500mL、1000mL、500mL的乙酸乙酯進行萃取，合并萃取后的乙酸乙酯并進行濃縮近干，然后用甲醇定容至600mL，即得到粗毒素。將100g的1601加入到200mL的粗毒素中，然后加入700mL的水，充分攪拌均勻后得到20。％擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑1000mL。實施例2:將本發明人保存的擬盤多毛孢菌株接種于PDA平板上，在253(TC黑暗條件下培養，待菌落約4)80mm時，用無菌打孔器((J)5mm)切取菌落外緣菌絲制備成菌餅。將玉米粉培養基裝于250mL三角瓶中，每瓶150mL，定量接種菌餅3塊，在150r/min25。C黑暗條件下培養15天。將擬盤多毛孢培養液用雙層脫脂棉紗布濾去菌絲，即得到粗毒素培養濾液。取5000mL粗毒素培養濾液，分別用2500mL、1500mL、lOOOmL的乙酸乙酯進行萃取，合并萃取后的乙酸乙酯并進行濃縮近干，然后用甲醇定容至lOOOmL，即得到粗毒素。將120g的1601加入到350mL的粗毒素中，然后加入530mL的水，充分攪拌均勻后得到35%擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑1000mL。取10mL的擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑和擬盤多毛孢粗毒素密封于試管中并置于54'C士2"C的恒溫條件下貯存14天，然后將經熱貯后的水劑樣品和粗毒素利用莖葉處理法對4葉期稗草進行除草生物活性測定。試驗見結果見表2，試驗結果表明擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑和擬盤多毛孢粗毒素經熱貯后都有不同程度的生物活性降低現象，但水劑的生物活性降低程度要明顯低于粗毒素。由此可見，將擬盤多毛孢粗毒素加工成水劑后不僅除草生物活性明顯增強，而且提高了擬盤多毛孢粗毒素的熱貯穩定性。表2擬盤多毛孢粗毒素水劑和擬盤多毛孢粗毒素熱貯前后對稗草的生物活性測定結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>將本發明人保存的擬盤多毛孢菌株接種于PDA平板上，在253(TC黑暗條件下培養，待菌落約(^Omm時，用無菌打孔器(4)5mm)切取菌落外緣菌絲制備成菌餅。將玉米一黃豆粉培養基裝于250mL三角瓶中，每瓶150mL，定量接種菌餅3塊，在150r/min25。C黑暗條件下培養15天。將擬盤多毛孢培養液用雙層脫脂棉紗布濾去菌絲，即得到粗毒素培養濾液。取4000mL粗毒素培養濾液，分別用2000mL、1000mL、lOOOmL的乙酸乙酯進行萃取，合并萃取后的乙酸乙酯并進行濃縮近干，然后用甲醇定容至800mL，即得到粗毒素。將150g的1601加入到500mL的粗毒素中，然后加入350mL的水，充分攪拌均勻后得到50%擬盤多毛孢粗毒素除草劑水劑1000mL。分別取實施例1、實施例2、實施例3的除草劑水劑采用莖葉處理法對其進行除草生物活性測定。具體方法為在口徑07cm、高10cm的塑料杯中，杯底有3個00.2^11的孔，裝入8cm深的蛭石，在每杯中分別均勻地播種已發芽的稗草種子25粒，然后覆蓋lcm厚的蛭石，將播種后的塑料杯轉入瓷盤中，同時保持約0.5cm的水層，置于溫度25°C、光照強度為3800LX、相對濕度70%條件下進行培養，待雜草生長至約35cm時供試驗用。用喉頭噴霧器均勻噴灑各藥劑處理，以雜草葉片濕潤為止，以清水為對照，每個處理重復3次，在培養雜草生長的條件下培養48小時后測量各處理的雜草鮮重(g)，按下列公式計算生長抑制率(％)。供試驗用的實施例1、實施例2、實施例3所得到除草劑水劑的稀釋倍數依次為50倍、87.5倍、125倍。塵長抑制率"/)—對照組雜草鮮重(g)—處理組雜草鮮重(g)><inn土長抑制車--對照組雜草鮮重(g)-X100試驗結果表明將上述試驗中所得到的20%、35%和50%的擬盤多毛孢粗毒素水劑依次稀釋成50倍、87.5倍和125倍的藥液處理馬唐，48小時后對稗草的生長抑制率依次為75.4%、93.5%和88.6%。試驗結果表明將擬盤多毛孢粗毒素加工成35。％水劑效果最好。權利要求1.擬盤多毛孢毒素在除草劑中的應用。全文摘要本發明涉及擬盤多毛孢毒素的用途，尤其涉及在除草劑領域中的用途。利用該產品制成的除草劑經水稀釋后噴灑，對稗草、馬唐、牛筋草、狗尾草、虎尾草等雜草具有較好的防治效果。可以得出本發明的優點在于本發明對擬盤多毛孢粗毒素發掘了新的用途，開拓了一個新的應用領域；本發明的擬盤多毛孢粗毒素應用在除草劑中，除草效果明顯，預示著良好的藥用前景。文檔編號A01N63/00GK101371666SQ20071013924公開日2009年2月25日申請日期2007年8月21日優先權日2007年8月21日發明者劍張,張金林,董曄欣申請人:董曄欣