專利名稱：富硒聯合固氮菌及其冷凍干粉、液體和固體肥料的制法的制作方法
技術領域：
本發明涉及聯合固氮工程菌技術領域，具體涉及富硒聯合固氮菌及其冷凍干粉、液體和固體肥料的制法。
背景技術：
固氮菌肥的開發，是建設新農業影響深遠的科技革命，它在促進農作物的生長、提高其抗逆性，增加產量的同時，還可以克服化肥對土壤所造成的板結、荒漠，對于自然生態、環境保護、綠色食品等領域，都將產生積極的影響，隨著建設現代化農業偉大工程實施步伐的加快，聯合固態氮菌肥的開發呈現著光明的前景，然而由于聯合固氮菌肥自身的條件所限，對農作物的抗逆性、促生長、增產量有著明顯的效果，但對于改善農作物的品質方面如健身保健功能卻顯得遜色，隨著人們生活質量的不斷提高，人們對農作物的要求在滿足其基本的生理需要的同時，希望能收到強身健身保健的功效。現代科學表明經過生化反應的硒，是很容易被人體吸收的，而且在強身健腦、增強免疫力、抗衰老等方面，都具有顯著的功效，培養含有硒的微生物菌種并制成肥料，經過生化反應生成具有強身保健功能的農作物，該肥能夠降低各種農藥的使用量，是人們期盼的綠色生態環保型生物肥。
發明內容
針對現有技術的不足，本發明提出了工藝合理、成熟、穩定性好，可靠性大，對農作物的生長具有抗病力強、增產、改善品質等明顯效果的富硒的聯合固氮菌及其冷凍干粉、液體和固體肥料。
本發明是采用這樣的技術方案本實現的。
一種富硒聯合固氮菌的制法(一)、其培養基的組分重量比為Na2SeO30.8-1.0％蛋白胨 0.9-1.1％酵母膏 0.4-0.6％NaCl 0.4-0.6％色氨酸 50μg/ml20％稀土水溶液 1-2％水 其余用水培養基配制好后裝入茄子瓶按50μg/ml加入色氨酸，經滅菌后按5％-10％接種，在30℃-34℃200rmp，搖瓶發酵24-48小時；(二)、種子罐按其容積的60％注入培養基滅菌后，溫度降到50℃以下時，按35ug/ml注入色氨酸，溫度低于35℃后按5-10％接入第(一)步完成的菌種；(三)、011號罐A15單獨發酵，012號罐N13.E26混合發酵，其發酵條件為溫度30-35℃。壓力0.05Mpa，空氣流量1∶0.2-0.3，轉速200rmp時間8-10h，其后壓入大罐，兩罐壓出比為2∶1，取樣為OD000＞1，PH＞7.5，鏡檢菌體形態；(四)、大罐滅菌后，溫度低于50℃，注入色氨酸，按25μg/ml，溫度低于35℃時，接入第(三)步完成的菌種1-3％，在溫度30℃-35℃。壓力0.05Mpa、空氣流量1∶0.2-0.3、轉速200rmp下，發酵6-8h，取樣OD＞0.9、PH＞7-8.5，IAA值0.3-0.4，鏡檢菌數大于108個/ml；(五)、加防腐劑、保護劑、調整PH至7-7.5，符合相關標準要求，(六)、封裝產品；得富硒聯合固氮菌劑亦即其液體肥料。
所述接種其菌種為中科院微生物所提供的固氮糞產堿桿菌，固氮巨大芽胞桿菌，固氮陰溝腸桿菌。
所述的滅菌條件為溫度120℃-125℃，壓力0.1-0.15MPa，時間20-25min。
富硒聯合固氮菌冷凍干粉的制法，在上述制法的第(5)步后按技術常規操作制得冷凍干粉。
富硒聯合固氮菌固體肥料的制法，培養基組合重量比為草炭土 50-70％雞糞干 25-35％石膏0.8-1.2％稀土1-2％KH2PO40.4-0.6％Na2SeO3.5H2O 0.8-1.8％葡萄糖 1.8-2.2％NaCl1.8-2.2％6-Ba0.08-0.12％
PH值 6-7水含量 60-65％制法將草炭、雞糞干燥、粉碎、過篩與各組分混合均勻，加入10％的EM菌劑，含水量在60-65％、PH值6-7，配制好培養基。培養基建堆發酵滅菌，條件60-70℃，36-48h。當溫度降到30℃以下后接入按上述制法第(四)步發酵后的菌種，再經30-35℃，24-36小時的堆料發酵，測試各種指標符合相關的標準要求即得固體富硒固氮菌肥。
與現有技術相比本發明的優點在于本發明的多菌株發酵工藝，利用微生物發酵使農作物難以吸收和利用的無機硒轉化為農作物能夠充分吸收和利用的有機硒。培養基的配制方法、滅菌處理等生產工藝先進，采用建堆發酵的科學方法，替代了傳統的高溫滅菌的繁鎖方式，降低了生產成本，提高了硒的轉化率。具有好的穩定性和大的可靠性；所生產的工程菌劑活菌數、存活期、雜菌數都超過行業標準化和農科院原子能所要求的標準；在對玉米、蔬菜、果樹等農作物試驗結果，表現出生長良好，抗病力強、增產，改善品質等明顯效果。本發明可促使硒的生化反應，為人體補硒提供硒源，發揮其強身健體的保健功效。添加稀土元素，對農作物的生長起到了很好的調節和優化作用。
具體實施例方式
下面通過實施例來對本發明作詳細地描述。
富硒聯合固氮菌的制法
(一)先配制培養基，其培養基的組分重量比為Na2SeO31％蛋白胨 1％酵母膏 0.5％NaCl 0.5％20％稀土水溶液 2％水 其余用水各組分混和均勻，配制好后裝入茄子瓶按50μg/ml加入色氨酸，經滅菌后，按5-10％接種，在30℃-34℃、200rmp，發酵24-48小時。
本發明所采用的菌株為中科院微生物所提供的固氮糞產堿桿菌，其代號為A15，固氮巨大芽胞桿菌，其代號為N13，固氮陰溝腸桿菌，其代號為E26。
(二)、種子罐按其容積的60％注入培養基，滅菌后，溫度降到50℃以下時，按35μg/ml注入色氨酸，溫度低于35℃后，按5-10％接入第(一)步種所制的菌液。
(三)、011號罐A15單獨發酵，012罐N13，E26混合，其發酵條件為溫度30℃-35℃壓力0.05MPa、空氣流量1∶0.2-0.3，轉速200rmp，時間8-10小時，其后壓入大罐，兩罐壓出比為2∶1，取樣為OD000＞0.6---1.2，PH＞7-8.5，IAA含量0.3-0.4，鏡檢菌體形態，活菌數個/ml＞108。
(四)、大罐按其容量的60％注入培養基，經滅菌后，溫度低于50℃時，按25μg/ml注入色氨酸，溫度低于35℃時，接入第(三)步種所制的菌液1-3％，在溫度30℃-35℃，壓力0.05MPa，空氣流量1∶0.2-0.3，轉速200rmp下，發酵6-8小時，取樣OD＞1.9、PH＞8.5、IAA(陽性)含量0.37，鏡檢、活菌數大于108個/ml。
(五)、加防腐劑、保護劑、調整PH值、使PH在7-7.5間，符合標準。
(六)、封裝產品，即得富硒聯合固氮菌劑亦即其液體肥料。
所述的液體菌液的滅菌條件為溫度120℃-125℃、壓力0.1-0.15MPa，時間為20-25min。
富硒聯合氮菌冷凍干粉的制法在上述(五)步后，按冷凍干燥的技術常規操作，即得富硒聯合固氮菌冷凍干粉。
富硒聯合固氮菌固體肥料的制法，其培養基組分重量比為草炭土 60％雞糞干 30％石膏 1％稀土 2％KH2PO40.5％Na2SeO3.5H2O 1％葡萄糖 2％NaCL 2％6-Ba 0.1％含水量 60-65％
PH6.5-7先將草炭土、雞糞干燥、粉碎、過篩與各組分混合均勻，加入10％的EM菌劑，含水量60％-65％，PH值6-7，配制好培養基，培養基在室內或室外(室溫25-30℃為宜)建堆發酵滅菌。建堆方法底寬100cm，堆高80cm，上寬60cm。長無限。料溫50-70℃，36-48h的條件下發酵滅菌，當溫度降到30℃以下后接上述制法第(四)步發酵后的菌種，再經30-35℃，24-36小時的堆料發酵，測試各種指標符合相關標準要求即得固體富硒固氮菌肥。
稀土元素及其化合物具有特殊的物理化學性質，尤其應用范圍十分廣泛。多年來，隨著稀土在農業、醫學及生物化學方面研究工作的不斷深入，逐步證明稀土是一種生物微量元素。因此稀土在科學生命中的地位日益顯現出來。可以預料，稀土在醫學領域應用研究將日益受到重視，從而展示出其廣闊的應用前景。
稀土元素對植物生長具有廣泛的促進作用。在農業中應用日趨廣泛。當然低濃度稀土可促進愈傷組織生長；高濃度則抑制生長；更高濃度則使植物死亡。其作用和激素有相似之處，所以認為稀土元素可能有類似植物激素的作用。其作用機制可能與鈣調蛋白有關。稀土元素對植物的細胞、組織、器官的起到微調代謝的作用。
本發明具有固氮、解磷、解鉀、富集硒及抗逆、抗病蟲害的功效，含有植物生長調節劑，施加稀土元素，將促進和優化植物的生長和生理性循環。采用浸種、灌根、噴灑三種施用此肥技術，作了田間試驗，對玉米、蔬菜、果樹等12種作物的試驗結果，表現出生長良好、抗病蟲能力強、增產、改善作物品質等明顯效果，并使糧食作物節省純氮肥12-20％，能使蔬菜增產11-33％，節省氨肥15-50％，使水果增加糖度25-40％。因該肥抗逆性增強，可以減少農藥的使用量。
權利要求
1.一種富硒聯合固氮菌的制法，其特征在于(一)、其培養基的組分重量比為Na2SeO3·5H2O0.8-1.0％蛋白胨 0.9-1.1％酵母膏 0.4-0.6％NaCl0.4-0.6％色氨酸 50μg/ml20％濃度的稀土水溶液1-2％水 其余用水培養基配制好后裝入茄子瓶按50μg/ml加入色氨酸，經滅菌后按5％-10％接種，在30℃-34℃200rmp/分下，搖瓶發酵24-48小時；(二)、種子罐按其容積的60％注入培養基滅菌后，溫度降入50℃以下時，按35μg/ml注入色氨酸，溫度低于35℃后按5-10％接種；(三)、011號罐A15單獨發酵，012號罐N13.E26混合發酵，其發酵條件為溫度30-35℃，壓力0.05MPa，空氣流量1∶0.2-0.3，轉速200rmp時間8-10h，其后壓入大罐，兩罐壓出比為2∶1，取樣為OD000＞1，PH＞7.5，鏡檢菌體形態；(四)、大罐滅菌后，溫度低于50℃，注入色氨酸，按25μg/ml，溫度低于35℃時，接種1-3％，在溫度30℃-35℃、壓力0.05Mpa、空氣流量1∶0.2-0.3、轉速200rmp下，發酵6-8h，取樣OD＞0.9、PH＞7，IAA值0.37，鏡檢活菌數大于108個/ml；(五)、加防腐劑、保護劑，調整PH至7-7.5，符合相關標準要求，(六)、封裝產品，得富硒聯合固氮菌劑亦即其液體肥料。
2.根據權利要求1所述的制法，其特征在于所述接種其菌種為中科院微生物所提供的，固氮巨大芽胞桿菌，固氮糞產堿桿菌和固氮陰溝腸桿菌。
3.根據權利要求1所述的富硒聯合固氮菌的制法，其特征在于所述的滅菌條件為溫度120℃-125℃，壓力0.1-0.15MPa，時間20-25min。
4.富硒聯合固氮菌冷凍干粉的制法，其特征在于在權利要求1所述制法的第(五)步后按技術常規操作制得冷凍干粉。
5.富硒聯合固氮菌固體肥料的制法，其特征在于培養基組分重量比為草炭土 50-70％雞糞干 25-35％石膏 0.8-1.2％稀土 1-2％KH2PO40.4-0.6％Na2SeO3·5H2O 0.8-1％葡萄糖 1.8-2.2％NaCl 1.8-2.2％6-Ba 0.08-0.12％PH值6-7水含量 60-65％制法將草炭、雞糞，干燥、粉碎、過篩與各組分混合均勻，加入10％的EM菌劑，含水量在60-65％、PH值6-7，配制好培養基，培養基建堆發酵滅菌。溫度降到30℃以下后按上述制法第(四)步發酵后的菌種，再經30-35℃，24-36小時的堆料發酵，測試各種指標符合相關標準要求即得固體富硒固氮菌肥。
全文摘要
本發明提出了富硒聯合固氮菌劑及其冷凍干粉、液體肥料和固體肥料的制法，富硒聯合固氮菌液的培養基是由Na
文檔編號C05F3/02GK101054564SQ20071001087
公開日2007年10月17日 申請日期2007年4月9日 優先權日2007年4月9日
發明者崔澎 申請人:崔澎