專利名稱：篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法
技術領域：
本發明涉及一種篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法，尤其是一種將胚性細胞經低鹽-高鹽-低鹽條件繼代篩選從而得到耐鹽堿突變體的組織培養方法。
背景技術：
楊樹是世界上分布最廣、適應性最強的樹種，具有速生、優質、適應性強等特點。但隨著地球人口的不斷增長，對資源的需求也日益增大，由于一些不合理開墾，致使土壤逐漸鹽堿化、沙化、貧瘠化。利用組織培養方法篩選耐鹽突變體研究技術具有便于操作控制，成本低，周期短等優點，因此該方法已受到國內外學者的廣泛重視。
發明內容
本發明篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法的目的在于提供一種獲得耐鹽堿楊樹突變體的方法。
為達上述目的，本發明提供一種篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法，將楊樹胚性細胞在含鹽培養基中繼代培養，包括鹽性分化培養、繼代培養和生根培養，其中，含鹽量(按質量體積比計)為2～10‰，含鹽量≤6‰定義為低鹽條件，反之為高鹽條件，繼代培養包括高鹽繼代、低鹽繼代。
所述的鹽性分化培養是指胚性細胞置于含NaCl 2～5‰的Y-2培養基上，在溫度25℃±2℃，光照時間為每天14h的條件下培養25～45天，使其充分分化。
所述的Y-2培養基為MS+6-BA 0-0.4mg/L+KT 0.05-0.4mg/L+IAA0.05-0.2mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂4-8g/L。
所述的高鹽繼代是將鹽性分化好的幼芽轉入含高鹽的Y-2培養基上繼代2～3次，周期為14～21天。
所述的低鹽繼代是將高鹽繼代好的幼芽轉入低鹽培養基M4上繼代2～3次，周期為20～40天。
所述M4培養基為MS+6-BA 0.05-0.3mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂3-8g/L。
所述的生根培養是將低鹽繼代好的幼芽轉入含NaCl 2～6‰、pH值8.0～9.5的M5培養基上生根，培養天數為20～50天。
所述的M5培養基為1/2MS+IBA 0.1-1.0mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂3-8g/L。
本發明的優點是 便于操作和控制，且成本低，周期短，獲得耐鹽堿性良好的楊樹突變體。
具體實施例方式 一種篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法，將歐美楊(黑楊派)胚性細胞在含鹽培養基中繼代培養，包括鹽性分化培養、繼代培養和生根培養，其中，含鹽量(按質量體積比計)為2～10‰，含鹽量≤6‰定義為低鹽條件，反之為高鹽條件，繼代培養包括高鹽繼代、低鹽繼代。
第一步將胚性細胞置于含NaCl 3‰的Y-2培養基上鹽性分化培養，溫度25℃±2℃，光照時間為每天14h的條件下培養30天，使其充分分化。
所述的Y-2培養基為MS+6-BA 0.2mg/L+KT 0.2mg/L+IAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L。
第二步將鹽性分化好的幼芽轉入含NaCl 7‰的Y-2培養基上高鹽繼代，繼代2次，周期為21天。
第三步將高鹽繼代好的幼芽轉入含NaCl 4‰，pH值為8.0的低鹽培養基M4上低鹽繼代，繼代2次，周期為30天。
所述M4培養基為MS+6-BA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂3.5g/L。
第四步將低鹽繼代好的幼芽轉入含NaCl 4‰、pH值為8.0的M5培養基上生根培養，培養天數為35天。
所述的M5培養基為1/2MS+IBA 0.4mg/L+蔗糖20/L+瓊脂3.5g/L。
權利要求
1、一種篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法，將楊樹胚性細胞在含鹽培養基中繼代培養，包括鹽性分化培養、繼代培養和生根培養，其中，含鹽量(按質量體積比計)為2～10‰，含鹽量≤6‰定義為低鹽條件，反之為高鹽條件，繼代培養包括高鹽繼代、低鹽繼代。
2、根據權利要求1所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法，其特征在于所述的鹽性分化培養是指胚性細胞置于含NaCl 2～5‰的Y-2培養基上，在溫度25℃±2℃，光照時間為每天14h的條件下培養25～45天，使其充分分化。
3、根據權利要求2所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法，其特征在于，所述的Y-2培養基為MS+6-BA 0-0.4mg/L+KT 0.05-0.4mg/L+IAA 0.05-0.2mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂4-8g/L。
4、根據權利要求1或2所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法，其特征在于所述的高鹽繼代是將鹽性分化好的幼芽轉入含高鹽的Y-2培養基上繼代2～3次，周期為14～21天。
5、根據權利要求1或2所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法，其特征在于所述的低鹽繼代是將高鹽繼代好的幼芽轉入低鹽培養基M4上繼代2～3次，周期為20～40天。
6、根據權利要求5所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法，其特征在于，所述M4培養基為MS+6-BA 0.05-0.3mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂3-8g/L。
7、根據權利要求1或2所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法，其特征在于所述的生根培養是將低鹽繼代好的幼芽轉入含NaCl2～6‰、pH值8.0～9.5的M5培養基上生根，培養天數為20～50天。
8、根據權利要求7所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法，其特征在于，所述的M5培養基為1/2MS+IBA 0.1-1.0mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂3-8g/L。
全文摘要
一種篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養方法，為將胚性細胞經低鹽—高鹽—低鹽條件繼代篩選的組織培養方法，將楊樹胚性細胞在含鹽培養基中繼代培養，包括鹽性分化培養、繼代培養和生根培養，其中，含鹽量(按質量體積比計)為2～10‰，含鹽量≤6‰定義為低鹽條件，反之為高鹽條件，繼代培養包括高鹽繼代、低鹽繼代。本發明的優點是便于操作和控制，且成本低，周期短，獲得耐鹽堿性良好的楊樹突變體。
文檔編號A01H3/00GK1961647SQ20061011868
公開日2007年5月16日 申請日期2006年11月23日 優先權日2006年11月23日
發明者蘇敏, 宋學孟, 董舉文, 張艷, 龐瑞華, 許雄山, 章振華, 王凌健, 張承妹 申請人:上海光兆植物速生技術有限公司