博落回總生物堿鹽及其制備方法和應(yīng)用的制作方法

專利名稱：博落回總生物堿鹽及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的博落回總生物堿有機(jī)酸鹽及硼酸鹽及應(yīng)用、制備方法。
背景技術(shù)：
博落回(Macleaya cordata(Willd.)R.Br.)，又名號(hào)筒草、號(hào)筒桿、泡桐桿、勃勒回、山大筒、黃薄荷、黃婆娘、三錢三、野麻子、吹火筒，是罌粟科博落回屬多年生高大草本，使用博落回治療疥癬、疔毒及殺蟲滅蛆等在我國(guó)有悠久的歷史。最早記載博落回的本草文獻(xiàn)為《本草拾遺》?，F(xiàn)統(tǒng)一命名為博落回，廣泛用于醫(yī)藥、生物農(nóng)藥、獸醫(yī)獸藥、精細(xì)化工產(chǎn)品原料。
博落回為多年生高大草本，高1～2.5m，全體帶有白粉，折斷后有黃汁流出。根粗大，橘紅色。莖圓柱形，直立，中空，綠色，有時(shí)帶紅紫色。單葉互生，闊卵形，裂片有不規(guī)則波狀齒，上面綠色光滑，下面白色，具密細(xì)毛?；ò咨?，蒴果下垂，倒卵狀長(zhǎng)橢圓形，扁平，紅色。種子4～6粒?；ㄆ?～7月，果期8～11月。生于山坡，丘陵或低山草地，林邊，路旁等處。分布長(zhǎng)江流域中、下游各省。
博落回是生長(zhǎng)于長(zhǎng)江中下游地區(qū)的民間習(xí)用草藥，藥用始載于《本草拾遺》，陳藏器謂“博落回，生江南山谷，莖葉如蓖麻，莖中空，吹之作聲，如博落回，折之有黃汁，藥人立死，不可入口也”。又謂“主惡瘡癭根，瘤贅瘜肉，白癜風(fēng)，蠱毒”?！侗静菥V目》列于蓖麻附錄項(xiàng)下，均指此種植物。該藥味苦，性寒。有消腫、解毒、殺蟲的功能。傳統(tǒng)用于用于疔毒膿腫，惡瘡潰瘍，燙傷、頑癬等。
博落回各部位均可使用，報(bào)道中多以莖桿和根的使用為多，果實(shí)的研究及使用報(bào)道則較為少見，本專利以博落回果實(shí)的研究和應(yīng)用為主，是對(duì)博落回使用的有益探索與創(chuàng)新。
博落回中主要含有血根堿(Sanguinarine)、白屈菜紅堿(Chelerythrine)、博落回堿(Bocconine)、博落回寧堿(Bocconoline)、甲氧基白屈菜紅堿(Chelilutine)、二氫血根堿(dihydrosanguinarine)、二氫白屈菜紅堿(Dihydrochelerythrine)等苯并菲啶型生物堿及原阿片堿(Protopine)，α-別隱品堿(α-Allocryptopine)、β-別隱品堿(β-Allocryptopine)等原托品型生物堿。果實(shí)中生物堿含量較全草要高，可達(dá)3％以上，又以血根堿和白屈菜紅堿為主，而毒性成分原阿片堿在果實(shí)中含量則較少。博落回莖中則以二氫血根堿、二氫白屈菜紅堿、6-甲氧基二氫白屈菜紅堿等為主，6-甲氧基二氫血根堿則為莖中發(fā)現(xiàn)的微量成分。
現(xiàn)代藥理研究表明博落回具有明顯的抗菌、殺蟲、改善肝功能、提高免疫力及抗腫瘤等作用。
目前，已有US 4517172、US4590061、US4683133等美國(guó)專利涉及將血根提取物、博落回提取物等用于牙菌斑顯示劑及牙周病等口腔疾病的治療。另外，美國(guó)專利US 4145412及US 4689216則描述了含血根提取物、博落回提取物或其有效成分應(yīng)用于牙膏的情況。日本專利JP62185026描述了博落回提取物及其類似物用于治療皮膚瘙癢的方法；JP62093237則描述了博落回用于治療發(fā)癬菌病(Trichophytosis)的方法；JP63141916、JP63072617則是將博落回應(yīng)用于頭發(fā)的滋養(yǎng)方面。
國(guó)內(nèi)目前也有一些使用博落回或其提取物的專利，在醫(yī)藥方面的應(yīng)用主要涉及以下一些方向。CN1470513和CN1457780公開了將博落回應(yīng)用于抗癌方向的方法；CN1425460及CN1199640涉及將博落回應(yīng)用于皮膚護(hù)理方面；CN1065394涉及將博回應(yīng)用于漱口水；CN1060215則將博落回應(yīng)用于治療肝炎。
目前，博落回提取物，主要成分為血根堿氯化物和白屈菜紅堿氯化物，已在美國(guó)環(huán)保署獲得登記，登記的主要活性成分為氯化血根堿和氯化白屈菜紅堿，登記類型為殺菌劑(Fungicide)。國(guó)內(nèi)博落回植物農(nóng)藥也已獲得登記，登記的有效成分為血根堿，登記類型為殺蟲劑/殺菌劑。
博落回生物堿雖然有明顯的生物活性，但其溶解性很低，而且在堿性條件下易發(fā)生變化，因此，博落回生物堿很難直接發(fā)揮其諸多生物活性，所以現(xiàn)在市場(chǎng)上出現(xiàn)的產(chǎn)品多以其鹽酸鹽或硫酸鹽應(yīng)用于產(chǎn)品中。但是以博落回總生物堿的鹽酸鹽或硫酸鹽來替代博落回總生物堿是否合理，能否提高或保證博落回總生物堿的生物活性，未在已有的有關(guān)博落回的應(yīng)用和研究文獻(xiàn)中有所報(bào)道，缺乏有效的研究和論證，是個(gè)需要深入探討的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種具有更好的生物活性，消炎，殺菌效果，可定量的博落回總生物堿有機(jī)酸鹽及硼酸鹽。
本發(fā)明的另一目的是提供上述博落回總生物堿有機(jī)酸鹽及硼酸鹽的制備方法。
本發(fā)明還一目的旨在提供上述博落回總生物堿有機(jī)酸鹽及硼酸鹽的應(yīng)用。
一些有機(jī)酸具有很廣泛的生理活性，比如水楊酸或阿斯匹林，不但具有抗菌消炎、解熱鎮(zhèn)痛的作用，還具有免疫調(diào)節(jié)，抑制腫瘤的活性，但由于酸性強(qiáng)，也導(dǎo)致此類物質(zhì)具有一定的胃腸道反應(yīng)和對(duì)肝、腎等器官的不良作用，從而限制了應(yīng)用。對(duì)此類物質(zhì)，一般采用結(jié)構(gòu)修飾的方法來降低它們的副作用，主要方向就是減少化合物的酸性，比如與胺類化合物脫水生成酰胺或者將羧基改造為其它基團(tuán)。
硼酸與水楊酸、苯甲酸、馬來酸、酒石酸同是可用于消毒、抑菌的活性物質(zhì)，具有明顯的抑菌、抗炎作用，而且硼酸也不是典型的礦酸，所以本發(fā)明也涉及到博落回總生物堿硼酸鹽的制備與應(yīng)用研究。但現(xiàn)有技術(shù)中均是將博落回總生物堿、及硼酸與水楊酸、苯甲酸、馬來酸、酒石酸等其藥理及相關(guān)的作用都是分別進(jìn)行研究。
本發(fā)明的發(fā)明人則是突破上述研究慣例，用一種新的角度去考慮，以博落回總生物堿為工具，通過與經(jīng)發(fā)明人多次研究試驗(yàn)后才決定采用的硼酸與水楊酸、苯甲酸、馬來酸、酒石酸這些酸類物質(zhì)組合成鹽的方式來達(dá)到降低其酸性并保持或提高其活性而增加其使用價(jià)值的目的。因此本發(fā)明通過讓此類有機(jī)酸及硼酸與博落回總生物堿成鹽，一方面對(duì)于博落回總生物堿而言可在解決其溶解性的同時(shí)有效保證甚至提高其生物活性，另一方面對(duì)于所選有機(jī)酸及硼酸而言，又可降低其酸性，提高其使用價(jià)值。
由于本發(fā)明所涉及的有機(jī)酸及硼酸與博落回總生物堿所形成的鹽屬于弱酸弱堿鹽，所以成鹽的條件和性質(zhì)與以往文獻(xiàn)中的鹽酸鹽或硫酸鹽有明顯區(qū)別。本發(fā)明對(duì)此進(jìn)行了深入研究，提出了制備博落回有機(jī)酸鹽及硼酸鹽的新工藝。
最終，所形成的博落回總生物堿有機(jī)酸鹽及硼酸鹽可以更小的劑量和更好的活性，也就是更安全合理的形式得到應(yīng)用。因此，本發(fā)明是對(duì)博落回生物堿鹽應(yīng)用形式和機(jī)理的重要嘗試和突破。
本發(fā)明的目的是通過下述方式實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明所提供的博落回總生物堿鹽為博落回總生物堿水楊酸鹽或博落回總生物堿苯甲酸鹽或博落回總生物堿馬來酸鹽或博落回總生物堿酒石酸鹽或博落回總生物堿硼酸鹽；上述博落回總生物堿鹽中的血根堿和白屈菜紅堿鹽重量含量為50.0％～90％。
本發(fā)明第一次明確地提供博落回總生物堿有機(jī)酸(水楊酸、苯甲酸、馬來酸、酒石酸)鹽及硼酸鹽，產(chǎn)品設(shè)計(jì)思路科學(xué)合理，質(zhì)量可控，是一種新型的植物精細(xì)化工產(chǎn)品，且本發(fā)明博落回總生物堿有機(jī)酸鹽及硼酸鹽可以很好地制備出來。
本發(fā)明的另一目的是通過下述方式實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明所提供的博落回總生物堿有機(jī)酸鹽及硼酸鹽的制備方法為方法一將博落回總堿溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等極性或中等極性溶劑中，攪拌下加入有機(jī)酸，薄層監(jiān)控血根堿和白屈菜紅堿反應(yīng)完全。此方法涉及的有機(jī)酸包括水楊酸、苯甲酸、酒石酸及馬來酸。
方法二將有機(jī)酸溶解于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等極性或中等極性溶劑中，攪拌下加入博落回總堿，薄層監(jiān)控血根堿和白屈菜紅堿反應(yīng)完全。此方法涉及的有機(jī)酸包括水楊酸、苯甲酸、酒石酸及馬來酸。
方法三將博落回總堿溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等極性或中等極性溶劑中，將有機(jī)酸溶于相應(yīng)的甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等極性或中等極性溶劑中，在攪拌下將二者混合，薄層監(jiān)控血根堿和白屈菜紅堿反應(yīng)完全。此方法涉及的有機(jī)酸包括水楊酸、苯甲酸、酒石酸及馬來酸。
方法四將有機(jī)酸置于水中，加熱到60～80℃，緩慢加入生物堿，薄層監(jiān)控血根堿和白屈菜紅堿至反應(yīng)完全。此方法涉及的有機(jī)酸包括水楊酸、苯甲酸、酒石酸及馬來酸。
方法五博落回總堿硼酸鹽的制備，將博落回總堿溶于甲醇或乙醇中，向溶液中加入定量的飽和硼酸溶液，收集沉淀即得博落回總堿硼酸鹽。
所用薄層方法硅膠G(青島海洋化工廠)制備層析板，不加粘合劑；以苯環(huán)已烷(9∶1)為展開劑，碘化鉍鉀顯色，白屈菜紅堿的Rf為0.4；血根堿的Rf為0.6。
所制備的博落回總生物堿有機(jī)酸鹽及硼酸鹽中的血根堿和白屈菜紅堿的有機(jī)酸鹽或硼酸鹽重量含量范圍為50～90％，高效液相方法檢測(cè)。上述制備的博落回總生物堿有機(jī)酸鹽和博落回總生物堿硼酸鹽及其應(yīng)用未見任何文獻(xiàn)報(bào)道。
本發(fā)明還一目的為將含有上述博落回總生物堿有機(jī)酸鹽的產(chǎn)品可作為具有抗菌、消炎作用的藥品或日用化學(xué)品；用于動(dòng)物有關(guān)的抗菌、抗炎作用的獸藥或飼料添加劑；用于動(dòng)物有關(guān)的消毒用品或日用化學(xué)品。
本發(fā)明的博落回總生物堿有機(jī)酸鹽可應(yīng)用于多種劑型的產(chǎn)品，包括粉劑、酊劑、洗液及噴劑等。
本發(fā)明所使用的原料可來自博落回的果莢、莖桿及根；血水草的根。
本發(fā)明通過使產(chǎn)品的特征明確化，從而使生產(chǎn)建立在較好的量化控制基礎(chǔ)上，擺脫了對(duì)原料產(chǎn)地的依賴而使原料的來源得以擴(kuò)大，從而在產(chǎn)品質(zhì)量可控的前提下最終降低生產(chǎn)成本，使本發(fā)明的產(chǎn)品的工業(yè)化建立在較好較充足的原料基礎(chǔ)上，是傳統(tǒng)中藥生產(chǎn)模式的重要突破。本發(fā)明以博落回生物堿的有機(jī)酸鹽及硼酸鹽為產(chǎn)品應(yīng)用形式，充分結(jié)合了博落回總生物堿的生物活性及所用有機(jī)酸和硼酸的活性特點(diǎn)，并且改善了產(chǎn)品的使用性能，因此也提高了博落回的用藥水平，而且所得產(chǎn)品的抗菌、抗炎作用明顯。
為了更好理解本發(fā)明實(shí)質(zhì)，下面以更具體的試驗(yàn)例說明。
試驗(yàn)本發(fā)明制備的博落回總生物堿有機(jī)酸鹽及硼酸鹽的抗菌、抗炎作用。為方便比較，所有用于體外抗菌、抗炎試驗(yàn)的供試品的含量均為60±3％，以博落回總生物堿鹽的重量計(jì)。
一、體外抗真菌試驗(yàn)1、博落回總生物堿水楊酸鹽供試品博落回總生物堿水楊酸鹽(批號(hào)040518，長(zhǎng)沙世唯科技有限公司提供)，試驗(yàn)前制備成2mg/ml(以提取物量計(jì))；酮康唑(批號(hào)040112，沈陽藥科大學(xué)合成研究室提供)，制備成1mg/ml溶液。
菌株7種菌株均購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院南京皮膚病研究所。
體外抗菌試驗(yàn)取白色念珠菌20～25℃培養(yǎng)24h的第二代新鮮培養(yǎng)物，用氯化鈉注射液稀釋；絮狀表皮癬菌、石膏樣毛癬菌和紅色毛癬菌均用20～25℃培養(yǎng)7天的斜面培養(yǎng)物，用氯化鈉注射液將培養(yǎng)物洗下，振搖、過濾、鏡檢計(jì)孢子數(shù)、稀釋，使菌液終濃度為1×106CFU/ml。
金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及大腸桿菌接種于肉湯培養(yǎng)基中傳5代，取純種再接種于瓊脂培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)24h，取菌苔制成相應(yīng)試驗(yàn)菌懸液，用標(biāo)準(zhǔn)比濁管調(diào)整細(xì)菌濃度為1×106CFU/ml備用。
以1mg/ml酮康唑做為陽性對(duì)照，采用試管二倍稀釋法測(cè)定最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)，見表二。
表二、博落回總堿水楊酸鹽體外抗菌作用菌種MIC(μg/ml) MBC(μg/ml)白色念珠菌 120 272絮狀表皮癬菌 170 387石膏樣毛癬菌 360 770紅色毛癬菌 210 440金黃色葡萄球菌 140 310表皮葡萄球菌 3080大腸桿菌 110 2362、博落回總生物堿苯甲酸鹽供試品博落回總生物堿苯甲酸鹽(批號(hào)040612，長(zhǎng)沙世唯科技有限公司提供)，試驗(yàn)前制備成2mg/ml(以提取物量計(jì))。
抗菌測(cè)試實(shí)驗(yàn)方法如例1，結(jié)果如表三所示。
表三、博落回總堿苯甲酸鹽體外抗菌作用菌種 MIC MBC白色念珠菌 160 380絮狀表皮癬菌 320 660石膏樣毛癬菌 210 460紅色毛癬菌 240 500金黃色葡萄球菌 150 350表皮葡萄球菌 40100大腸桿菌 170 3813、博落回總生物堿酒石酸鹽供試品博落回總生物堿酒石酸鹽(批號(hào)040619，長(zhǎng)沙世唯科技有限公司提供)，試驗(yàn)前制備成2mg/ml(以提取物量計(jì))。
抗菌測(cè)試實(shí)驗(yàn)方法如例1，結(jié)果如表四所示。
表四、博落回總堿酒石酸鹽體外抗菌作用菌種 MIC MBC白色念珠菌 230 492絮狀表皮癬菌 320 660石膏樣毛癬菌 290 710紅色毛癬菌 170 374金黃色葡萄球菌 130 294表皮葡萄球菌 122 253大腸桿菌 170 3764、博落回總生物堿馬來酸鹽供試品博落回總生物堿馬來酸鹽(批號(hào)040702，長(zhǎng)沙世唯科技有限公司提供)，試驗(yàn)前制備成2mg/ml(以提取物量計(jì))。
抗菌測(cè)試實(shí)驗(yàn)方法如例1，結(jié)果如表五所示。
表五、博落回總堿馬來酸鹽體外抗菌作用菌種 MIC MBC白色念珠菌 201 411絮狀表皮癬菌 220 468石膏樣毛癬菌 310 636紅色毛癬菌 130 302金黃色葡萄球菌 143 319表皮葡萄球菌 118 341大腸桿菌 150 3345、博落回總生物堿硼酸鹽供試品博落回總生物堿硼酸鹽(批號(hào)040704，長(zhǎng)沙世唯科技有限公司提供)，試驗(yàn)前制備成2mg/ml(以提取物量計(jì))。
抗菌測(cè)試實(shí)驗(yàn)方法如例1，結(jié)果如表六所示。
表六、博落回總堿硼酸鹽體外抗菌作用菌種 MIC MBC白色念珠菌 112 234絮狀表皮癬菌 220 562石膏樣毛癬菌 361 775紅色毛癬菌 121 244金黃色葡萄球菌 176 378表皮葡萄球菌 3482大腸桿菌 93 2316、博落回總生物堿硫酸鹽供試品博落回總生物堿硫酸鹽(批號(hào)040704，湖南太陽植物有限公司(湖南祁東縣歸陽鎮(zhèn)前進(jìn)街205號(hào))提供)，試驗(yàn)前制備成2mg/ml(以提取物量計(jì))。
抗菌測(cè)試實(shí)驗(yàn)方法如例1，結(jié)果如表七所示。
表七、博落回總堿硫酸鹽體外抗菌作用菌種 MIC MBC白色念珠菌 440 918絮狀表皮癬菌 270 576石膏樣毛癬菌 322 715紅色毛癬菌 147 325金黃色葡萄球菌 243 528表皮葡萄球菌 146 321大腸桿菌 326 6907、博落回總生物堿鹽酸鹽供試品博落回總生物堿鹽酸鹽(批號(hào)040514，長(zhǎng)沙世唯科技有限公司提供)，試驗(yàn)前制備成2mg/ml(以提取物量計(jì))。
抗菌測(cè)試實(shí)驗(yàn)方法如例1，結(jié)果如表七所示。
表八、博落回總堿鹽酸鹽體外抗菌作用菌種 MIC MBC白色念珠菌 365 778絮狀表皮癬菌 220 476石膏樣毛癬菌 272 605紅色毛癬菌 237 489金黃色葡萄球菌 313 658表皮葡萄球菌 106 221大腸桿菌 281 615結(jié)論體外抗菌試驗(yàn)表明，本發(fā)明制備的博落回總生物堿有機(jī)酸(水楊酸、苯甲酸、馬來酸、酒石酸)鹽及硼酸鹽有明顯的抗菌活性。與博落回總生物堿的鹽酸鹽及硫酸鹽相比，本發(fā)明制備的有機(jī)酸鹽及硼酸鹽有明顯更好的抗菌活性。
二、抗炎試驗(yàn)1、博落回總生物堿水楊酸鹽的抗炎活性動(dòng)物小鼠，昆明種；大鼠，Wistar品系，均由湖南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
供試品博落回總生物堿水楊酸鹽(批號(hào)040518，長(zhǎng)沙世唯科技有限公司提供)。
氫化可地松河南利華制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)031204。
以上使用的藥物均室溫保存，實(shí)驗(yàn)時(shí)以生理鹽水配制成適當(dāng)濃度藥液使用。
對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹反應(yīng)的影響。昆明種小鼠，雄性，26～30g，按體重分層，隨機(jī)分為空白對(duì)照、氫化可地松、博落回總堿水楊酸鹽大中小劑量5組，每組12只。各組小鼠按20ml/kg容積灌胃給藥，間隔12h給藥3次。末次給藥后60min以二甲苯接觸右耳5s，15min脫頸椎處死小鼠，用直徑6mm的打孔器將雙耳同部位等面積切下，稱取左右耳片重量，計(jì)算耳廓腫脹率(％)和腫脹抑制率(％)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表九。
表九水楊酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓急性炎癥的抑制作用(x±s)

注1.博落回總堿水楊酸鹽按純品計(jì)算，下同；2.組間比較t檢驗(yàn)，與空白對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，下同。
對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹反應(yīng)的影響。Wistar大鼠，180～220g，雌雄各半，按體重分層，隨機(jī)分為空白對(duì)照、氫化可地松、博落回總堿水楊酸鹽大中小劑量5組，每組12只。各組大鼠按10ml/kg容積灌胃給藥，分別給予生理鹽水、氫化可地松20mg/kg、博落回總堿水楊酸鹽40、80、160mg/kg，間隔12h給藥3次。末次給藥后30min，以新鮮蛋清0.1ml注射于大鼠左后足跖皮下致炎。容積法測(cè)定大鼠致炎足外踝突出處平面以下部位致炎前和致炎后0.5、1.0、2.0、4.0和6.0h的容積，計(jì)算大鼠足跖腫脹值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表十。
表十水楊酸鹽對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹值的影響(x±s)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，博落回總堿水楊酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹、蛋清致大鼠足跖腫脹有較明顯的抑制作用。
2、博落回總生物堿苯甲酸鹽的抗炎活性供試品博落回總生物堿苯甲酸鹽(批號(hào)040612，長(zhǎng)沙世唯科技有限公司提供)表十一 苯甲酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓急性炎癥的抑制作用(x±s)

注1.博落回總堿苯甲酸鹽按純品計(jì)算，下同；2.組間比較t檢驗(yàn)，與空白對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，下同。
表十二 苯甲酸鹽對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹值的影響(x±s)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，博落回總堿苯甲酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹、蛋清致大鼠足跖腫脹有較明顯的抑制作用。
3、博落回總生物堿酒石酸鹽的抗炎活性供試品博落回總生物堿酒石酸鹽(批號(hào)040619，長(zhǎng)沙世唯科技有限公司提供)表十三 酒石酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓急性炎癥的抑制作用(x±s)

注1.博落同總堿酒石酸鹽按純品計(jì)算，下同；2.組間比較t檢驗(yàn)，與空白對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，下同。
表十四 酒石酸鹽對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹值的影響(x±s)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，博落回總堿酒石酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹、蛋清致大鼠足跖腫脹有較明顯的抑制作用。
4、博落回總生物堿馬來酸鹽的抗炎活性供試品博落回總生物堿馬來酸鹽(批號(hào)040702，長(zhǎng)沙世唯科技有限公司提供)表十五 馬來酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓急性炎癥的抑制作用(x±s)

表十六 馬來酸鹽對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹值的影響(x±s)

注1.博落回總堿馬米酸鹽按純品計(jì)算，下同；2.組間比較t檢驗(yàn)，與空白對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，下同。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，博落回總堿馬來酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹、蛋清致大鼠足跖腫脹有較明顯的抑制作用。
5、博落回總生物堿硼酸鹽的抗炎活性供試品博落回總生物堿硼酸鹽(批號(hào)040704，長(zhǎng)沙世唯科技有限公司提供)表十七 硼酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓急性炎癥的抑制作用(x±s)

注1.博落回總堿硼酸鹽按純品計(jì)算，下同；2.組間比較t檢驗(yàn)，與空白對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，下同。
表十八 硼酸鹽對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹值的影響(x±s)


實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，博落回總堿硼酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹、蛋清致大鼠足跖腫脹有較明顯的抑制作用。
6、博落回總生物堿硫酸鹽的抗炎活性供試品博落回總生物堿硫酸鹽(批號(hào)040704，湖南太陽植物有限公司(湖南祁東縣歸陽鎮(zhèn)前進(jìn)街205號(hào))提供)表十九 硫酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓急性炎癥的抑制作用(x±s)

注1.博落回總堿硫酸鹽按純品計(jì)算，下同；2.組間比較t檢驗(yàn)，與空白對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，下同。
表二十 硫酸鹽對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹值的影響(x±s)

7、博落回總生物堿鹽酸鹽的抗炎活性供試品博落回總生物堿鹽酸鹽(批號(hào)040514，長(zhǎng)沙世唯科技有限公司提供)表二十一 鹽酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓急性炎癥的抑制作用(x±s)


表二十二 鹽酸鹽對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹值的影響(x±s)

注1.博落回總堿鹽酸鹽按純品計(jì)算，下同2.組間比較t檢驗(yàn)，與空白對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，下同。
結(jié)論抗炎試驗(yàn)表明，本發(fā)明制備的博落回總生物堿有機(jī)酸鹽(水楊酸、苯甲酸、馬來酸、酒石酸)及硼酸鹽具有明顯的抗炎活性。與博落回總生物堿鹽酸鹽及硫酸鹽相比，本發(fā)明制備的有機(jī)酸鹽及硼酸鹽有明顯更好的抗炎活性。
具體實(shí)施例方式
本實(shí)驗(yàn)所用博落回總生物堿購(gòu)自湖南太陽植物有限公司實(shí)施例1將批號(hào)為040713的博落回總堿10g(其中約含4g血根堿，MW349.39；2g的白屈菜紅堿，MW365.40)溶于乙醇中，攪拌下加入水楊酸(MW138.21)1.7g，薄層監(jiān)控，根據(jù)反應(yīng)情況補(bǔ)加少量水楊酸，直至血根堿和白屈菜紅堿成鹽反應(yīng)完全。薄層方法硅膠G(青島海洋化工廠)制備層析板，不加粘合劑；以苯環(huán)己烷(9∶1)為展開劑，碘化鉍鉀顯色，白屈菜紅堿的Rf為0.4；血根堿的Rf為0.6。待成鹽反應(yīng)完全，回收乙醇，干燥得博落回總生物堿水楊酸鹽，收率為77.4％。采用高效液相進(jìn)行含量測(cè)定，總鹽含量為53.4％(以血根堿水楊酸鹽和白屈菜紅堿水楊酸鹽計(jì))。
色譜條件如下色譜柱HypetsilODS25μ 4.6×200mm。
流動(dòng)相A為乙腈；B為0.05％磷酸-0.2％三乙胺-水。
Time flow ％A ％B0.00 0.6 257512.000.6 406015.000.6 554518.000.6 2575柱溫30℃；流速0.6ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)270nm；進(jìn)樣量5μ1。標(biāo)準(zhǔn)品及樣品濃度約為0.1mg/ml。
實(shí)施例2將批號(hào)為040713的博落回總堿10g溶于乙酸乙酯中，與1.5g苯甲酸(MW122.13)按例1方法制備博落回總生物堿苯甲酸鹽，收率71.2％。按實(shí)施例1方法檢測(cè)，博落回總生物堿苯甲酸鹽含量為51.1％。
實(shí)施例3將批號(hào)為040713的博落回總堿10g溶于甲醇中，與1.8g酒石酸(MW150.12)按例1方法制備博落回總生物堿酒石酸鹽，收率78.4％。按例1方法檢測(cè)，博落回總生物堿酒石酸鹽含量為52.6％。
實(shí)施例4將批號(hào)為040713的博落回總堿10g溶于氯仿中，與1.4g馬來酸(MW116.07)按例1方法制備博落回總生物堿馬來酸鹽，收率71.7％。按例1方法檢測(cè)，博落回總生物堿馬來酸鹽含量為50.2％。
實(shí)施例5將2g水楊酸溶解于丙酮中，攪拌下加入批號(hào)為040605的博落回總堿10g，薄層監(jiān)控，適當(dāng)補(bǔ)加少量水楊酸使血根堿和白屈菜紅堿反應(yīng)完全?；厥杖軇?，干燥得博落回總生物堿水楊酸鹽，收率78.4％。按例1方法檢測(cè)，博落回總生物堿水楊酸鹽含量為63.2％。
實(shí)施例6將1.8g苯甲酸溶解于乙酸乙酯中，攪拌下加入批號(hào)為040605的博落回總堿10g，按實(shí)施例5方法制得博落回總生物堿苯甲酸鹽，收率77.3％。按例1方法檢測(cè)，博落回總生物堿苯甲酸鹽含量為61.2％。
實(shí)施例7將2.2g酒石酸溶解于乙醇中，攪拌下加入批號(hào)為040605的博落回總堿10g，按實(shí)施例5方法制得博落回總生物堿酒石酸鹽，收率78.4％。按例1方法檢測(cè)，博落回總生物堿酒石酸鹽含量為60.7％。
實(shí)施例8將1.7g馬來酸溶解于甲醇中，攪拌下加入批號(hào)為040605的博落回總堿10g，按實(shí)施例5方法制得博落回總生物堿馬來酸鹽，收率72.6％。按例1方法檢測(cè)，博落回總生物堿馬來酸鹽含量為62.5％。
實(shí)施例9將批號(hào)為040812的10g博落回總堿溶于丙酮中，將2.5g水楊酸溶于丙酮中，在攪拌下將二者混合，薄層監(jiān)控，適當(dāng)補(bǔ)加水楊酸或水楊酸丙酮溶液，直至血根堿和白屈菜紅堿反應(yīng)完全。回收溶劑，干燥得博落回總生物堿水楊酸鹽，收率76.5％。經(jīng)檢測(cè)，博落回總生物堿水楊酸鹽含量為76.4％。
實(shí)施例10將批號(hào)為040812的10g博落回總堿溶于乙酸乙酯中，將2.2g苯甲酸溶于乙酸乙酯中，按實(shí)施例9方法制備博落回總生物堿苯甲酸鹽，收率75.5％。經(jīng)檢測(cè)，博落回總生物堿苯甲酸鹽含量為73.7％。
實(shí)施例11將批號(hào)為040812的10g博落回總堿溶于乙醇中，將2.7g酒石酸溶于乙醇中，按實(shí)施例9方法制備博落回總生物堿酒石酸鹽，收率74.7％。經(jīng)檢測(cè)，博落回總生物堿酒石酸鹽含量為77.1％。
實(shí)施例12將批號(hào)為040812的10g博落回總堿溶于甲醇中，將2.1g馬來酸溶于甲醇中，按實(shí)施例9方法制備博落回總生物堿馬來酸鹽，收率73.6％。經(jīng)檢測(cè)，博落回總生物堿馬來酸鹽含量為74.3％。
實(shí)施例13將3g水楊酸置于水中，加熱到60℃，緩慢加入批號(hào)為040907的10g博落回總堿，薄層監(jiān)控，適量補(bǔ)加水楊酸或水楊酸水溶液，直至血根堿和白屈菜紅堿反應(yīng)完全。回收溶劑，干燥得博落回總生物堿水楊酸鹽，收率83.7％。經(jīng)檢測(cè)，博落回總生物堿水楊酸鹽含量為89.1％。
實(shí)施例14將2.7g苯甲酸置于水中，加熱到60℃，緩慢加入批號(hào)為040907的10g博落回總堿，依實(shí)施例13所述方法制備博落回總生物堿苯甲酸鹽，收率88.3％。經(jīng)檢測(cè)，博落回總生物堿苯甲酸鹽含量為89.1％。
實(shí)施例15將3.3g酒石酸置于水中，加熱到80℃，緩慢加入批號(hào)為040907的10g博落回總堿，依實(shí)施例13所述方法制備博落回總生物堿酒石酸鹽，收率82.5％。經(jīng)檢測(cè)，博落回總生物堿水楊酸鹽含量為87.6％。
實(shí)施例16將2.5g馬來酸置于水中，加熱到80℃，緩慢加入批號(hào)為040907的10g博落回總堿，依實(shí)施例13所述方法制備博落回總生物堿馬來酸鹽，收率86.3％。經(jīng)檢測(cè)，博落回總生物堿馬來酸鹽含量為88.24％。
實(shí)施例17博落回總生物堿硼酸鹽的制備。將批號(hào)為040605的20g博落回總堿溶于乙醇中，向溶液中加入1.8g硼酸的飽和水溶液，薄層確定反應(yīng)終點(diǎn)，回收溶劑，干燥得博落回總生物堿硼酸鹽，收率72.5％。經(jīng)檢測(cè)，博落回總生物堿硼酸鹽含量為61.3％。
以下例子提供博落回總生物堿有機(jī)酸鹽在終端產(chǎn)品中的應(yīng)用形式。
實(shí)施例18博落回總生物堿鹽粉劑制備舉例。
取本發(fā)明博落回總生物堿水楊酸鹽20g、百部5000g、水楊酸3000g、以重量計(jì)。將5000g百部用水提取，濃縮干燥得百部提取物，將此百部提取物與水楊酸3000g及博落回總生物堿水楊酸鹽20g混合，過80目篩，混合均勻，分裝制得100包，每包含博落回總生物堿水楊酸鹽200mg。本品外用，具抗菌、抗炎活性。每包用2500-3000ml熱水溶解，將腳完全浸泡入其中30-40分鐘即可，每日一次，每次一包，三天為一療程。
實(shí)施例19博落回總生物堿鹽酊劑制備舉例。
博落回總生物堿酒石酸鹽10g，苦參提取物50g，百部提取物50g，60％酒精稀釋至1000ml，二層紗布過濾，棕色玻璃瓶中密封備用。本品外用，可用于治療手、足癬。用藥棉少許蘸酊劑搽于患處，1d 3次-4次。10d為一個(gè)療程，一般連續(xù)治療3個(gè)-6個(gè)療程。
實(shí)施例20博落回總生物堿鹽洗液制備舉例。
將苦參50g、蛇床子50g、地膚子50g、(花椒)川椒20g、百部50g加水煎煮二次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮至25℃時(shí)相對(duì)密度不低于1.07，加入薄荷腦1g和博落回總生物堿馬來酸鹽5g，攪拌使溶解，加水制成1000ml，即得。本品具抗菌、抗炎作用，可用于皮膚的清潔及護(hù)理。
實(shí)施例21博落回總生物堿鹽噴劑制備舉例。
噴劑(商品名“博凈”)取博落回總生物堿水楊酸鹽1g，加純凈水500ml，攪拌使溶解，加水稀釋制成1000ml溶液即得。本品具抗菌、抗炎作用，可用于表面的清潔及護(hù)理。本品經(jīng)湖南省疾病預(yù)防控制中心檢測(cè)，博凈噴劑原液作用2min對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌的平均抑制率分別為72.82％，80.87％和69.34％。
權(quán)利要求
1.博落回總生物堿鹽，其特征在于所述博落回總生物堿鹽為博落回總生物堿水楊酸鹽或博落回總生物堿苯甲酸鹽或博落回總生物堿馬來酸鹽或博落回總生物堿酒石酸鹽或博落回總生物堿硼酸鹽；上述博落回總生物堿鹽中的相應(yīng)血根堿和白屈菜紅堿鹽重量含量為50.0％～90％。
2.制備權(quán)利要求1中所述的博落回總生物堿鹽的方法，其特征在于將博落回總堿溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等極性或中等極性溶劑中，攪拌下加入有機(jī)酸，薄層監(jiān)控血根堿和白屈菜紅堿反應(yīng)完全，此方法涉及的有機(jī)酸包括水楊酸、苯甲酸、酒石酸及馬來酸。
3.制備權(quán)利要求1中所述的博落回總生物堿鹽的方法，其特征在于將有機(jī)酸溶解于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等極性或中等極性溶劑中，攪拌下加入博落回總生物堿，薄層監(jiān)控血根堿和白屈菜紅堿反應(yīng)完全，此方法涉及的有機(jī)酸包括水楊酸、苯甲酸、酒石酸及馬來酸。
4.制備權(quán)利要求1中所述的博落回總生物堿鹽的方法，其特征在于將博落回總堿溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等極性或中等極性溶劑中，將有機(jī)酸溶于相應(yīng)的甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等極性或中等極性溶劑中，在攪拌下將二者混合，薄層監(jiān)控血根堿和白屈菜紅堿反應(yīng)完全，此方法涉及的有機(jī)酸包括水楊酸、苯甲酸、酒石酸及馬來酸。
5.制備權(quán)利要求1中所述的博落回總生物堿鹽的方法，其特征在于將有機(jī)酸置于水中，加熱到60～80℃，緩慢加入博落回總生物堿，薄層監(jiān)控血根堿和白屈菜紅堿至反應(yīng)完全，此方法涉及的有機(jī)酸包括水楊酸、苯甲酸、酒石酸及馬來酸。
6.制備權(quán)利要求1中所述的博落回總生物堿鹽的方法，其特征在于博落回總堿硼酸鹽的制備，將博落回總生物堿溶于甲醇或乙醇中，向溶液中加入定量的飽和硼酸溶液，收集沉淀即得博落回總堿硼酸鹽。
7.權(quán)利要求1所述博落回總生物堿鹽的應(yīng)用，其特征在于用于抗菌、抗炎作用的藥品。
8.權(quán)利要求1所述博落回總生物堿鹽的應(yīng)用，其特征在于用于日用化學(xué)品。
9.權(quán)利要求1所述博落回總生物堿鹽的應(yīng)用，其特征在于用于動(dòng)物有關(guān)的抗菌、抗炎作用的獸藥或飼料添加劑或消毒用品或日用化學(xué)品。
10.權(quán)利要求1所述博落回總生物堿鹽的應(yīng)用，其特征在于用于粉劑、酊劑、洗液或噴劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及新型博落回總生物堿鹽的應(yīng)用及制備工藝，本發(fā)明博落回總生物堿有機(jī)酸鹽及硼酸鹽的含量為50.0％～90％，以血根堿和白屈菜紅堿的有機(jī)酸鹽及硼酸鹽重量計(jì)。本發(fā)明的博落回總生物堿有機(jī)酸鹽及硼酸具有抗菌、抗炎活性，而且活性明顯優(yōu)于其硫酸鹽及鹽酸鹽。本發(fā)明涉及含有此博落回總生物堿有機(jī)酸鹽及硼酸鹽的藥品及日化產(chǎn)品在人及動(dòng)物的抗菌、抗炎方向的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A23K1/16GK1740175SQ20051003206
公開日2006年3月1日 申請(qǐng)日期2005年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月29日
發(fā)明者曾建國(guó), 張靜, 羅煉輝 申請(qǐng)人:長(zhǎng)沙世唯科技有限公司