專利名稱：適于獸醫和醫療應用的組合物的制作方法
背景技術：
胃腸(“GI”)功能紊亂是由于病原體侵入，廣譜抗生素治療后，飲食不當，緊張的生活方式以及其它致病因素引起的。這是常見的疾病，其病征諸如在20％美國成年人中表現出來的腸應激綜合征(IBS)。在加拿大，IBS是僅次于感冒的導致在學校和工廠缺勤的主要原因。迄今為止，還沒有治療IBS和炎性腸病(IBD)的良藥。令人滿意的具有治療目的的組合物應滿足下列條件●無毒性，可安全使用。
●不會抑制內臟中的益生菌或對其產生副作用。
●優選地具有較低的口服生物利用率(無系統作用)。
●不會產生細菌抗藥性。
●抗炎癥。
●止瀉，抑制分泌。
●抗蠕動(anti-motility)。
●增強免疫。
●中和毒素。
本發明力圖提供滿足以上一個或多個條件的用于GI功能紊亂的組合物和治療。
在人體中，具有300-400m2面積的胃腸(GI)道是將機體與外界聯接的第二大表面。每天都要消化1-2kg食物，GI免疫系統總是受到可吸收的毒物和病原體以及多種有害抗原的威脅。胃腸道消化食物并吸收有利于機體的營養，同時去除對健康具有潛在危險的成分。機體的大部分免疫系統都位于胃腸道壁以及也稱為腸相關淋巴組織(GALT)系統的腸系膜淋巴結上。胃腸道分泌物富含諸如乳鐵蛋白和溶菌酶的抗菌因子以及其它因子，如重要的生長和粘膜治療因子，例如表皮生長因子(EGF)。消化道粘膜通常僅覆有單一的粘液保護層，并含有微生物菌群，其在GALT系統的調控中發揮著重要的作用。
粘液在很大程度上是作為所述自身保護性微生物菌群的基質。腸中含有約1kg益生菌。這些益生菌的作用是維持胃腸道的健康生態環境，合成維生素、激素和其它重要的因子，并協助將復雜的蛋白和纖維分解成較小的分子，供粘膜細胞吸收[1]。
既可作為致病因素又可作為癥狀，腸道中的病原菌在胃腸功能紊亂中占有重要的一面。其它的紊亂可事實上導致胃腸道喪失益生菌并使得病原菌得以生長，從而最終導致腸中的生態環境發生改變進而加劇胃腸功能紊亂。
對于胃腸功能紊亂的治療而言，恢復健康的生態環境至關重要。本發明涉及對包括IBS和IBD(包括大腸炎，克羅恩病和腹部疾病)的胃腸功能紊亂及其相關病征的治療。期望該治療能改善腸道健康并緩解諸如便秘，腸胃氣脹和腹瀉的癥狀。其可在胃腸道中作為胃腸清潔劑，增強免疫系統，抑制并去除病原菌，并且協助重建健康的生態系統。由此得到的健康消化系統可維持機體的健康狀態并在包括人類的動物體內產生健康的體重增加。
黃連素是從多種小蘗植物包括Berberis aristata和短萼黃連(Coptischinensis)中衍生得到的異喹啉四價生物堿[2]。從中藥植物，Acangelisiagusanlung的提取物中分離到的黃連素的結構類似物[3]，其在東方傳統醫藥中已有超過2000年的時間被用于治療腸胃炎和分泌性腹瀉[4]，并對腹瀉動物模型的預防和治療也相當有效[5-7]。黃連素具有抗菌[4]，抗蠕動[8]和抗分泌的性質[9-11]。因而，有幾種解釋黃連素治療有效性的機制。在中國，可采用100mg-300mg t.i.d劑量在成年人(6mg～18mg/kg/日)中將黃連素用作止瀉藥[12]。最終，黃連素穿透腸組織的表觀滲透系數(Papp)為10-7cm/秒數量級[13]，是較難吸收化合物的典型數值，并由體內的較低的生物利用度反映出來。這種較低的口服生物利用度導致的較低的系統吸收可為黃連素的口服給藥提供較安全的便利條件。
某些飽和的低級二醛也具有對硫酸鹽還原細菌的抗菌活性[14]。此外也教導了含有類似的飽和低級二醛的含醇的殺孢子組合物[15]。而且公知水溶性的二醛淀粉可作為止齲劑摻入口香糖組合物中[16]，可以至少約0.1％重量比將水不溶性的二醛多糖用于培養基中抑制細菌生長[17]。已將合成的多聚二醛，如聚-(2-丙烯醇，2-丙烯酸)用于胃腸道疾病的治療。然而，由于這些化合物的抗菌活性相當微弱，需要采用非常高的劑量，如500～2500mg/kg體重/日進行治療[18]。
經過尋找和篩選之后可知，包括以下通式(1)的化合物(特別是氯化黃連素)，和以下通式(2)的化合物(特別是氧化纖維素)的組合物，各自都適于胃腸功能紊亂及其相關病征的治療，并且適于在包括人類的動物體內促進體重增加的方法。本發明最重要的發現之一就是通過結合使用通式(1)的化合物與通式(2)的化合物得到了協同作用(參見以下實施例4與實施例8)。該協同作用使得使用較低劑量的所述化合物成為可能，從而獲得較高的安全性和經濟價值。
發明內容
在一方面，本發明涉及用于治療胃腸功能紊亂及其相關病癥，包括腸應激綜合征(IBS)；炎性腸病(IBD)，大腸炎，克羅恩病和腹部疾病；和/或促進動物體重增加的包括通式(1)化合物和/或多聚二醛的組合物，其中通式(1)包括 通式(1)其中R1，R2，R7，R8，R9和R10可以相同或不同且選自H，CH3，OH，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl；R3，R4，R5，R6可以相同或不同且選自H，CH3，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl，或R5和R6相同或不同且選自H，CH3，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl，且R3和R4共同為＝O，或R4和R6相同或不同且選自H，CH3，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl，且R3和R5共同形成雙鍵或共同為＝O，或R3和R4相同或不同且選自H，CH3，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl，且R5和R6共同為＝O；R11和R12共同形成＝CH2，或R11和R12可以相同或不同且獨立地選自H，CH3，CH2CH3和CH2CH2CH3；且X選自Cl，Br，SO4，I和R13COO，其中R13是CH3或多元酸。
優選地，R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9和R10為氫，R11和R12共同形成＝CH2且X-為Cl，所以通式(1)為氯化黃連素。
可從廣泛的適合化合物中選擇所述多聚二醛。例如聚-(2-丙烯醛，2-丙烯酸)可與通式(1)的化合物組合形成本發明的組合物。優選地，所述多聚二醛是二醛多糖。特別優選的二醛多糖具有通式(2)的結構式 通式(2)其中，每種單體Rp和Rr獨立地選自 和 和 且每種單體Rq獨立地選自
和 和 和 其中每個R14可以相同或不同且獨立地選自CH2OH，COOH，CH2OCH2COOH和CH2OR15，其中R15選自CH2C6H4COOH，C6H4COOH和CH2(CH2)yCOOH，其中y＝1-20；其中p1-pn可以相同或不同且各自獨立地選自0-n；q1-qn可以相同或不同且各自獨立地選自1-m，優選為2-m；r1-rn可以相同或不同且各自獨立地選自0-n；n為大于零的整數，m為大于1的整數；且其中q1+---+qnp1+---+pn+q1+---+qn+r1+---+rn100%≥30%.]]>在一個優選實施方案中，每種Rp和Rr為(A)且Rq為(D)，所以所述多聚二醛為氧化纖維素。在該種情況下，R14優選為CH2OH或CH2OCH2COOH。
在另一優選實施方案中，每種Rp和Rr為(B)且Rq為(E)，所以所述多聚二醛為氧化淀粉或糊精。
在另一優選實施方案中，每種Rp和Rr為(C)且Rq為(F)或(G)，所以所述多聚二醛為氧化葡聚糖。
在每種情況下，優選為q1+---+qnp1+---+pn+q1+---+qn+r1+---+rn×100%≥40%.]]>
且特別優選為40%≤q1+---+qnp1+---+pn+q1+---+qn+r1+---+rn×100%≥60%.]]>即，所述氧化纖維素，淀粉，糊精或葡聚糖有40％-60％被氧化。
通式(2)的化合物的分子量為1,000-1,000,000。更優選地，其分子量為10,000-750,000。當所述通式(2)的化合物是水不溶性時，其顆粒尺寸優選為為5μ-100μ，更優選為從5μ至30μ。例如，微晶體氧化纖維素的直徑為約20μ。
通常，通式(2)的氧化率從30％～100％，優選為從40％～100％，更優選為從40％～60％。已知口服給藥所述通式(2)是無毒性的。特別地，所述氧化纖維素在胃腸道中相當穩定。其較高的分子量防止了其被胃腸道所吸收。其聚二醛官能團可與毒素相互作用并將其中和。通式(2)的化合物具有抗便秘效果。該化合物還可促進潰瘍愈合。該化合物也不會對胃腸道中益生菌的生長具有副作用。
可將所述組合物進行給藥的動物包括包括人的靈長類動物，包括家禽的鳥類，包括牛，綿羊，馬，鹿和豬的有蹄動物，包括甲殼類動物和軟體動物所魚類，爬行動物，嚙齒動物，犬科動物和貓科動物。
在另一實施方案中，本發明包括使用通式(1)的化合物和通式(2)的化合物制備藥物，所述藥物用于治療胃腸功能紊亂及其相關病征包括腸應激綜合征(IBS)；炎性腸病(IBD)，包括大腸炎，克羅恩病和腹部疾病；且用于在包括人類動物中促進體重增加。
在另一實施方案中，本發明包括治療包括腸應激綜合征(IBS)；炎性腸病(IBD)，大腸炎，克羅恩病和腹部疾病的胃腸功能紊亂的方法，該方法包括向患有胃腸紊亂的動物，包括人進行有效量的通式(1)的化合物和/或多聚二醛給藥。優選地，所述治療方法包括進行有效量的通式(1)的化合物和多聚二醛聯合給藥。在本發明的不同實施方案中，所述治療可包括將通式(1)的化合物和所述多聚二醛順序給藥或同時給藥。在一個優選實施方案中，將所述通式(1)的化合物與所述多聚二醛合并形成組合物，隨后進行給藥。優選地，所述多聚二醛是通式(2)的化合物，更優選為氧化纖維素，特別是氧化水平從40％～60％的氧化纖維素。
含有通式(1)和多聚二醛的組合物的所需劑量通常低于分別使用單獨組分的50％。例如，對成年人而言，黃連素的劑量為6mg～18mg/kg/日。40％氧化纖維素的用量為250mg～750mmg/kg/日。然而，當把黃連素和40％氧化纖維素組合使用時，所需要的劑量為0.5mg～6mg/kg/日的黃連素加上5mg～200mg/kg/日的40％氧化纖維素。優選地，在人類中，使用的劑量為0.5mg～3mg/kg/日的黃連素加上5mg～80mg/kg/日的40％氧化纖維素。
此外，可在動物體內包括人類進行通式(1)的化合物和多聚二醛的聯合給藥，從而促進體重增加。在本文中所述化合物可用作食物添加劑進行給藥。相對應地，本發明包括含有0.1-50ppm通式(1)的化合物和1-400ppm多聚二醛的改進的食物。優選地，所述食物含有2-10ppm通式(1)的化合物和10-200ppm通式(2)的化合物；更優選地，通式(1)為氯化黃連素且通式(2)為氧化纖維素。
很容易想象可以分別提供通式(1)的化合物和所述多聚二醛，而不是將其作為組合物提供。本發明還包括用于治療胃腸(GI)功能紊亂或相關病癥，包括腸應激綜合征(IBS)；炎性腸病(IBD)(包括大腸炎)，克羅恩病和腹部疾病，以及促進包括人類的動物體重增加的，含有一定量通式(1)化合物和一定量多聚二醛的試劑盒。優選的通式(1)的化合物的量與多聚二醛的量的重量比為1∶1-1∶100，更優選為1∶10-1∶40。
已知在低于500μg/ml的濃度下，黃連素選擇性地抑制諸如金黃色葡萄球菌，B型鏈球菌，霍亂弧菌(Vibrio cholera)，產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)，白色念珠菌(Candida albicans)的病原菌，但卻不抑制諸如植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)的有益菌(益生菌)(參見表1)。
表1 黃連素、氧化纖維素和紅霉素的抗菌活性
用5μg/ml濃度的黃連素處理諸如大腸桿菌的病原菌后，其鞭毛會脫落且不能附著于腸壁上，這一濃度遠遠低于最低抑制濃度(MIC)。然而，這一濃度并不會影響諸如乳酸菌的益生菌。由于其選擇性地去除消化道中的病原菌而并不影響胃腸道中益生菌的寄居，所以黃連素的所述特性使其具備了作為胃腸道清潔劑的重要方面，而且還不會對所述細菌產生過量的藥物壓力，避免導致抗藥性。
現有的廣譜抗生素會不加區分地抑制消化道中的病原菌和益生菌。抗生素治療通常會引起胃腸功能紊亂。動植物在其整個進化過程中都與微生物共生，有時相互受益，但通常是對立的關系。黃連素一種古老且普遍使用的具有先天防御機制的成分；其已被發展成對天然菌群進行控制同時對病原體進行抗擊。它們在所述微生物表面上并沒有特異的靶分子受體。這一特征避免了在大多數抗生素中誘導細菌產生抗藥性的問題。還發現黃連素可誘導白介素-12(IL-12)(促抗感染)(pro-antiinfectious)的產生卻抑制白介素-8(促炎癥)的產生。這種增強宿主免疫系統的抗炎癥的性質對IBD和IBS的治療相當有效。
除了對通式(1)化合物的使用，還發現通式(2)化合物不僅具有抗菌活性，還能中和毒素，并可作為抗氧化劑使用。
從而，導致本發明的研究還公開了對腸應激綜合征，炎性腸病，大腸炎，克羅恩病和腹部疾病的治療，所述治療包括向需要治療的包括人所動物給藥有效量的通式(1)化合物或通式(2)化合物。
本發明還提供了促進包括人類的動物體重增加的方法，所述方法包括給藥有效量的通式(1)和/或通式(2)化合物。
在下文中，可將包括通式(1)化合物和通式(2)化合物，和/或其藥物可接受衍生物的胃腸道清潔組合物稱為GILAX清潔劑。用于治療的GILAX清潔劑需要量會隨需要治療的疾病性質和所述包括人類患者的動物的年齡情況不同而發生變化，最終將由當值的獸醫或醫生來決定。
一般而言，GILAX清潔劑中含有的通式(1)化合物與通式(2)化合物的重量比為1∶1～100，優選的重量比為1∶10～40。例如，對人而言，GILAX清潔劑(例如，重量比為1∶10的氯化黃連素和氧化纖維素)的口服劑量為275～1650mg/天。實際采用的劑量由胃腸功能紊亂的具體情況而定。對成年人而言，對IBS或抗生素治療后胃腸功能紊亂推薦用量為每日一次，每次550mg，對IBD而言為每日兩次，每次275mg，對急性腹瀉或其它較為嚴重的疾病而言為每日四次，每次550mg。
對動物飼養，如家禽飼養業而言，可將GILAX清潔劑用作飼料添加劑從而促進生長。所述組合物優選為1～20ppm黃連素加上10～400ppm氧化纖維素；更優選為5ppm黃連素加上50ppm氧化纖維素。
在養豬業中，GILAX清潔劑可用于預防小豬腹瀉。所使用的組合物中包括0.5mg～6mg通式(1)(黃連素)/kg/天和50mg～200mg通式(2)(氧化纖維素)/kg/天。
優選地，可將通式(1)化合物和通式(2)化合物與一或多種其它組分合并形成GILAX清潔劑組合物，這些組分如維生素，抗生素，防腐劑，表面活性劑，止瀉劑，抗便秘劑，酶(特別是消化酶)，益生菌，草藥，疫苗和潰瘍治療劑(如赤霉素和葡聚糖)。
如本發明所述，包括所述GILAX清潔劑或其藥物可接受的衍生物的藥物制劑可包含一或多種藥物可接受的載體，以及，任選的其它治療和/或預防組分。所述載體必須在與所述制劑中的其它成分的相容方面是可接受的，并且不會對其接受者具有傷害。
藥物制劑可以是任意適于對胃腸道進行給藥的方式，包括適于口服給藥和直腸給藥的方式。當有可能在治療中使用時，可將所述GILAX清潔劑作為化學原料進行給藥，其優選以藥物制劑來提供活性成分。在適合的時候，可將所述制劑以分散的劑量單位形式呈現，并可根據制藥領域的任意公知方法進行制備。優選地，所述方法包括將所述活性化合物與液體載體或磨碎的固體載體或二者共同混合的步驟，然后，如果必要的話，將所述產物成形為所需要的劑型。
適于口服給藥的藥物制劑可以分散的劑量單位形式呈現，例如分別含有預定量所述活性成分的膠囊，藥包或片劑；可作為粉末或顆粒呈現；作為溶液，懸液或乳劑呈現。所述活性成分可以藥丸，舐劑或膏劑形式呈現。適于口服給藥的片劑和膠囊可包含常規的賦型劑，例如結合劑，填充劑，潤滑劑，崩解劑或濕潤劑。可使用本領域公知的方法對藥片進行包被。口服液體制劑可以是例如水性或油性的懸液，溶液，乳劑，糖漿或酏劑，或可以在使用前用水或其它適合載體還原的干制品。這樣的液體制劑可包含常規的添加劑，例如懸浮劑，乳化劑，非水溶性載體(其可包括食用油)或防腐劑。
對諸如胃潰瘍的胃腸潰瘍給藥而言，可采用本領域中對胃腸道給藥的任意方法和制劑對GILAX清潔劑化合物或其藥物可接受的衍生物進行給藥。
當需要時，可采用適于將所述活性成分持續釋放的劑型。
GILAX清潔劑化合物可與其它治療藥劑共同使用，例如如抗生素的抗感染劑或如赤霉素，葡聚糖，生長因子(EGF)的潰瘍治療劑，和/或如植物乳桿菌的益生菌。
可方便地將上述組合形式以藥物制劑的方式進行使用，因此，這些包括如上所述通式(1)和通式(2)化合物以及藥物可接受載體的制劑構成了本發明的另一方面。
當將所述GILAX清潔劑化合物與對胃腸功能紊亂及其相關病癥治療的第二活性治療劑一同使用時，每種化合物的劑量可與其單獨使用時的劑量相同或不同。本領域所屬技術人員應很容易理解適合的劑量。
可采用本領域任意的公知的類似結構化合物的制備方法制備所述GILAX清潔劑化合物及其藥物可接受的衍生物。
實施例以下將參照實施例對本發明進行說明。所述實施例僅起到說明目的作用，而不應被認為是對本發明范圍的限制。
實施例1 通式(1)化合物，氯化黃連素的制備用乙醇(10L×2)回流berberines vulgaris的根和樹皮(1.5kg，磨碎)。將所述乙醇提取物過濾并減壓蒸發得到棕色的油。將該殘渣溶解于溫的0.1M HCl溶液中(10L×2)，過濾，將所述濾液真空蒸發至約1L，然后在室溫攪拌過夜。收集所述黃色沉淀并用冷水洗滌，然后再次溶解于沸水中(10L×2)，冷卻至室溫，經過過濾，水洗和空氣干燥后得到了黃色晶體粉末的氯化黃連素(44.5g)。采用NMR分析所述晶體得到如下結果1H-nmr(CD3OD)×(ppm)3.16(t，2H)，4.02(s，3H)，4.15(s，3H)，4.88(t，2H)，6.12(s，2H)，7.03(s，1H)，7.74(s，1H)，7.95(d，AB，1H)，8.15(d，AB，1H)，8.89(s，1H)，9.83(s，1H)。
實施例2 通式(2)化合物，40％氧化纖維素的制備在低于30℃的條件下，用2小時向pH＜0.5的高碘酸(140.7g，0.6175摩爾)的攪拌水溶液(1.08L)中加入部分微晶纖維素(顆粒大小直徑約為20)(250g，1.54摩爾)。將所述全部混合物在30～32℃攪拌4小時，然后在室溫攪拌16小時。向所得反應混合物中加入5％氫氧化鈉溶液(約480ml)，從而將pH調至5～6。將所述懸液過濾；用水洗滌所述固體(2L×4)直到所述濾液在KI-淀粉試紙上不顯示出氧化劑的存在為止。然后用丙酮(0.5L)洗滌所述固體，空氣干燥，從而得到白色粉末的40％氧化纖維素(215g，87％)。
實施例3 通式(2)化合物，40％氧化水溶性纖維素的制備用兩小時，向冰浴中的羧甲基纖維素(分子量250,000，DS＝0.7)(1g，6.17毫摩爾)的攪拌水溶液(25ml)中逐滴加入高碘酸鈉(532.5mg，2.48毫摩爾)的水溶液。將所述反應混合物在5～10℃攪拌16小時，然后在透析管(透過分子量界限為約10,000)中在水中透析48小時。然后將所述溶液冷凍干燥，從而得到白色粉末的40％氧化水溶性纖維素(813mg，81.4％)。
實施例4 雞的預實驗對雄性的1日齡仔雞(白來航(white Leghorn)新罕布什爾(NewHampshire))飼喂Barastoc雞食13天，所述雞食中含有桿菌肽鋅和D.O.T.(3，5-二硝基-鄰-tuluamide)和抗氧化劑乙氧喹(ethoxyquin)及B.H.T.。在第14天，將這些雞仔隨機分成6組，每組5只，每組雞仔的平均體重為121.4g-124.2g(在全部所述組中的方差為2.3％)。對所述雞仔飼喂相同的基本生長飼料，所述飼料中不含有任何抗生素但卻含有D.O.T.，以及下述的不同飼料添加劑A組飼料添加劑為50ppm氯化黃連素。
B組飼料添加劑為10ppm氯化黃連素。
C組飼料添加劑為200ppm 40％氧化纖維素。
D組飼料添加劑為100ppm 40％氧化纖維素。
E組飼料添加劑為5ppm氯化黃連素+50ppm40％氧化纖維素。
對照組無飼料添加劑。
對所述雞仔繼續飼喂23天。觀察其攝食量，體重增加，冠色(冠色為紅色說明該雞仔處于健康狀態)和死亡率。在所述實驗中未出現死亡事故。在所述組中的攝食量未出現顯著性差異。以顯著水平p＝0.05進行雙尾統計分析。所得結果如表2所示。
表2 通式(1)化合物(氯化黃連素)與通式(2)化合物(40％氧化纖維素)的組合物對雞生長的協同效應
在所述雞的肉中沒有檢測到黃連素和氧化纖維素的存在。
實施例4說明了本發明的協同效應。從所述結果可清楚地得知，與20ppm黃連素或10ppm黃連素或200ppm氧化纖維素或100ppm氧化纖維素的單獨作用相比較，5ppm黃連素+50ppm氧化纖維素的組合物給出了最佳的生長促進效果。該協同效應使得較低劑量的所述化合物的使用成為可能，從而獲得較高的安全性和經濟效益。
實施例5 GILAX清潔劑的制備a)為了治療IBS或抗生素應用后胃腸功能紊亂或腹瀉，將50mg氯化黃連素與500mg 40％氧化纖維素包裝入膠囊對成人進行口服給藥。
b)為了治療IBD，將25mg氯化黃連素與250mg40％氧化纖維素包裝入膠囊對成人進行口服給藥。
實施例6 用于治療IBS和IBD的GILAX清潔劑和益生菌的組合可將實施例5中的GILAX清潔劑與益生菌的制劑順序或同時使用。空氣隔離的益生菌膠囊或藥片中，每顆膠囊或片劑含有0.5～1×1010CFU。其組合物如下所示兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum) 30％長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)20％植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum) 10％保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus) 10％唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius) 10％嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus) 20％實施例7 通式(2)化合物，40％氧化纖維素—作為促進雞生長的飼料添加劑如實施例4所述進行雞實驗，但在每一實驗組與對照組中有6只雞。而且，所述飼料添加劑為1000ppm的40％氧化纖維素。所述實驗組中6只雞的生長率為3.86％(p＝0.05)，高于所述對照組中的6只雞。
實施例8 通式(1)化合物與通式(2)化合物在小鼠模型中治療IBD的協同效應使用大腸炎的hFUT1小鼠模型。這為炎性腸病(IBD)的致病機理提供了啟示。在無菌環境中，這些小鼠并不會發病。在人類中引起IBD的免疫功能障礙包括異常的T細胞反應性以及對胃腸道細菌耐受性的喪失。對小鼠進行通式(1)和通式(2)組合物的口服給藥，觀察其對消化道菌群的改變以及對大腸炎嚴重程度的降低。所述陽性結果說明通式(1)和通式(2)組合物對人類的IBD具有治療性作用。
如下，進行總共5種情況的分組，每組10只小鼠。
1)對照組(未進行處理)。
2)采用13.5mg/kg/天的通式(1)化合物(氯化黃連素)進行處理(o.s.)。
3)采用114mg/kg/天的通式(2)化合物(40％氧化纖維素)進行處理(o.s.)。
4)采用通式(1)化合物(氯化黃連素)(6.7mg/kg/天)和通式(2)化合物(40％氧化纖維素)(57mg/kg/天)的組合物進行處理(o.s.)。
5)采用通式(1)化合物(氯化黃連素)(13.5mg/kg/天)和通式(2)化合物(40％氧化纖維素)(114mg/kg/天)的組合物進行處理(o.s.)。
所得結果如表3所示。
表3 通式(1)化合物(氯化黃連素)和通式(2)化合物(40％氧化纖維素)的組合物對小鼠IBD的協同效應
實施例9 通式(1)化合物(氯化黃連素)與通式(2)化合物(40％氧化纖維素)對Balb-C小鼠的劑量耐受實驗將30只雄性和30只雌性Balb-C小鼠分成10組。如下所述，3組中每組分別有10只雄鼠和10只雌鼠。
1)對照組(沒有化合物)。
2)以250mg/kg/天連續口服給藥(強飼)氯化黃連素14天。
3)以1330mg/kg/天連續口服給藥(強飼)40％氧化纖維素14天。
實驗中的所有小鼠都存活了下來，這些小鼠都健康且所述組間無顯著差異。
對來自所述實驗小鼠的組織(肝，腎，肺，腸)切片進行組織學觀察未發現異常。
實施例10 斷奶后GILAX作為飼料添加劑對豬健康的評估大多數豬場都采用某些斷奶共混合物、限定年齡分組分隔以及在場地面積之間的常規的豬流動措施，以進行傳統的連續流動系統進行運轉。這些因素可以導致斷奶后的腹瀉事件。本實施例的目的在于觀察GILAX清潔劑是否能對斷奶提供有效的健康保護。
采用隨機分組設計對斷奶的每種處理進行性別匹配的單獨分欄。每欄有15只豬仔(21日齡)，采用了3欄。
1)陽性對照。所述豬仔以50mg/kg/天接受飼料中的阿莫西林21天。
2)陰性對照。所述豬仔不接受藥物性的飼料和水21天。
3)GILAX清潔劑處理。所述豬仔接受飼料GILAX清潔劑(5mg/kg/天氯化黃連素+50mg/kg/天40％氧化纖維素)21天。
對所述研究過程中出現的任意生病豬仔進行可注射性阿莫西林給藥(2g/天，每天2次)。在該研究中，第1組(阿莫西林)和第3組(GILAX)全部健康，不需要可注射性的阿莫西林。第2組(陰性對照)中有2只豬仔患病，并注射了抗生素。
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b)PCT/AU96/00328.
權利要求
1.用干治療胃腸(GI)功能紊亂或相關病癥和/或促進動物體重增加的包括通式(1)化合物和多聚二醛的組合物，其中通式(1)包括 通式(1)其中R1，R2，R7，R8，R9和R10可以相同或不同且選自H，CH3，OH，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl；R3，R4，R5，R6可以相同或不同且選自H，CH3，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl，或R5和R6相同或不同且選自H，CH3，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl，且R3和R4共同為＝O，或R4和R6相同或不同且選自H，CH3，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl，且R3和R5共同形成雙鍵或為＝O，或R3和R4相同或不同且選自H，CH3，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl，且R5和R6共同為＝O；R11和R12共同形成＝CH2，或R11和R12可以相同或不同且獨立地選自H，CH3，CH2CH3和CH2CH2CH3；且X選自Cl，Br，SO4，I和R13COO，其中R13是CH3或多元酸。
2.如權利要求1所述的組合物，其中R5和R6相同或不同且選自H，CH3，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl，且R3和R4共同為＝O。
3.如權利要求1所述的組合物，其中R4和R6相同或不同且選自H，CH3，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl，且R3和R5共同形成雙鍵或為＝O。
4.如權利要求1所述的組合物，其中R3和R4相同或不同且選自H，CH3，OCH3，C2H5，OC2H5OCH2Ph，OCH2PhNO2，F或Cl，且R5和R6共同為＝O。
5.如權利要求1-4中任一權利要求所述的組合物，其中所述GI功能紊亂或相關病癥包括腸應激綜合征(IBS)；炎性腸病(IBD)，大腸炎，克羅恩病和腹部疾病。
6.如權利要求1-4中任一權利要求所述的組合物，其中所述動物包括人類和其它靈長類動物，包括家禽的鳥類，包括牛，綿羊，鹿和豬的有蹄動物，包括甲殼類動物和軟體動物的魚類，爬行動物，嚙齒動物，犬科動物和貓科動物。
7.如權利要求1-4中任一權利要求所述的組合物，其中R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9和R10為H，R11和R12共同形成＝CH2且X-為Cl，所以通式(1)為氯化黃連素。
8.如權利要求1-4中任一權利要求所述的組合物，其中所述多聚二醛是聚-(2-丙烯醛，2-丙烯酸)。
9.如權利要求1-4中任一權利要求所述的組合物，其中所述多聚二醛是二醛多糖。
10.如權利要求9所述的組合物，其中所述二醛多糖包括通式(2)的化合物， 通式(2)其中，每種單體Rp和Rr獨立地選自 和 和 且每種單體Rq獨立地選自 和 和 和 其中每個R14可以相同或不同且獨立地選自CH2OH，COOH，CH2OCH2COOH和CH2OR15，其中R15選自CH2C6H4COOH，C6H4COOH和CH2(CH2)yCOOH，其中y＝1-20；其中p1-pn可以相同或不同且各自獨立地選自0-n；q1-qn可以相同或不同且各自獨立地選自1-m；r1-rn可以相同或不同且各自獨立地選自0-n；n為大干零的整數，m為大干1的整數；且其中
11.如權利要求10所述的組合物，其中每種Rp和Rr為(A)且Rq為(D)，所以所述多聚二醛為氧化纖維素。
12.如權利要求11所述的組合物，其中R14為CH2OH或CH2OCH2COOH。
13.如權利要求10所述的組合物，其中每種Rp和Rr為(B)且Rq為(E)，所以所述多聚二醛為氧化淀粉或糊精。
14.如權利要求10所述的組合物，其中每種Rp和Rr為(C)且Rq為(F)和/或(G)，所以所述多聚二醛為氧化葡聚糖。
15.如權利要求11，13或14所述的組合物，其中
16.如權利要求15所述的組合物，其中
17.如權利要求10所述的組合物，其中所述通式(2)的化合物的分子量為1,000-1,000,000。
18.如權利要求17所述的組合物，其中所述通式(2)的化合物的分子量為10,000-750,000。
19.如權利要求10所述的組合物，其中所述通式(2)的化合物是水不溶性的且其顆粒尺寸為5μ-100μ。
20.如權利要求19所述的組合物，其中所述通式(2)的化合物的顆粒尺寸為5μ-30μ。
21.如權利要求10所述的組合物，其中所述通式(1)的化合物與通式(2)的化合物的重量比為1∶1-1∶100。
22.如權利要求21所述的組合物，其中所述通式(1)的化合物與通式(2)的化合物的重量比為1∶10-1∶40。
23.如權利要求11所述的組合物，其中通式(1)為氯化黃連素且所述氧化纖維素含有30％-100％的氧化單體。
24.如權利要求23所述的組合物，其中所述氧化纖維素含有40％-60％的氧化單體。
25.如權利要求1所述的組合物，其用干促進人類和其它靈長類動物，鳥類，有蹄動物，魚類，爬行動物，嚙齒動物，犬科動物和貓科動物的體重增加。
26.包括通式(1)和多聚二醛的化合物、以及一或多種其它活性成分的藥物組合物，所述其它活性成分選自維生素、抗生素、防腐劑、表面活性劑、止瀉劑、抗便秘劑、包括消化酶的酶、益生菌、草藥、疫苗、潰瘍治療劑、生長因子、赤霉素和葡聚糖。
27.包括通式(1)的化合物和通式(2)的化合物、以及一或多種其它活性成分的藥物組合物，所述其它活性成分選自其它聚二醛，維生素，抗生素，防腐劑，表面活性劑，止瀉劑，抗便秘劑，包括消化酶的酶，益生菌，草藥，疫苗，潰瘍治療劑，生長因子，赤霉素和葡聚糖。
28.如權利要求26所述的藥物組合物，其中所述組合物還含有一或多種藥物可接受的賦型劑，所述賦型劑選自結合劑，潤滑劑，填充劑，崩解劑，濕潤劑，懸浮劑，增稠劑，緩沖劑以及等滲調節劑。
29.如權利要求27所述的藥物組合物，其中所述組合物還含有一或多種藥物可接受的賦型劑，所述賦型劑選自結合劑，潤滑劑，填充劑，崩解劑，濕潤劑，懸浮劑，增稠劑，緩沖劑以及等滲調節劑。
30.包括一定量通式(1)的化合物和一定量多聚二醛的試劑盒，所述試劑盒用干治療胃腸(GI)功能紊亂或相關病癥包括腸應激綜合征(IBS)；包括大腸炎、克羅恩病和腹部疾病的炎性腸病(IBD)；并用干促進包括人類的動物的體重增加。
31.如權利要求30所述的試劑盒，其中所述通式(1)的化合物的量與多聚二醛的量的重量比為1∶1-1∶100。
32.如權利要求31所述的試劑盒，其中所述通式(1)的化合物的量與多聚二醛的量的重量比為1∶10-1∶40。
33.治療胃腸紊亂的方法，包括對患有胃腸紊亂的動物進行有效量的通式(1)的化合物以及有效量的多聚二醛給藥。
34.如權利要求33所述的方法，其中所述胃腸功能紊亂包括腸應激綜合征(IBS)；炎性腸病(IBD)，大腸炎，克羅恩病和腹部疾病。
35.如權利要求33所述的方法，其中通式(1)的化合物為氯化黃連素。
36.如權利要求33所述的方法，其中所述多聚二醛是聚-(2-丙烯醛，2-丙烯酸)。
37.如權利要求34所述的方法，其中所述多聚二醛是二醛多糖。
38.如權利要求37所述的方法，其中所述二醛多糖包括通式(2)的化合物。
39.如權利要求38所述的方法，其中所述通式(2)的化合物為氧化纖維素。
40.如權利要求39所述的方法，其中
41.如權利要求27所述的方法，其中將通式(1)的化合物和所述多聚二醛順序給藥。
42.如權利要求33所述的方法，其中將通式(1)的化合物和所述多聚二醛同時給藥。
43.如權利要求42所述的方法，其中采用含有通式(1)的化合物和所述多聚二醛的組合物的形式進行通式(1)的化合物和所述多聚二醛的給藥。
44.在包括人類的動物中促進體重增加的方法，包括向包括人類的動物進行有效量的通式(1)的化合物以及多聚二醛的聯合給藥。
45.如權利要求44所述的方法，其中所述通式(1)的化合物是氯化黃連素。
46.如權利要求44所述的方法，其中所述多聚二醛是聚-(2-丙烯醛，2-丙烯酸)。
47.如權利要求44所述的方法，其中所述多聚二醛是二醛多糖。
48.如權利要求47所述的方法，其中所述二醛多糖包括通式(2)的化合物。
49.如權利要求48所述的方法，其中所述通式(2)的化合物為氧化纖維素。
50.如權利要求49所述的方法，其中
51.如權利要求44所述的方法，其中將通式(1)的化合物和所述多聚二醛順序給藥。
52.如權利要求44所述的方法，其中將通式(1)的化合物和所述多聚二醛同時給藥。
53.如權利要求52所述的方法，其中采用含有通式(1)的化合物和所述多聚二醛的組合物的形式進行通式(1)的化合物和所述多聚二醛的給藥。
54.通式(1)的化合物和多聚二醛在用干治療胃腸(GI)功能紊亂或相關病癥，或促進包括人類的動物體重增加的組合物制備中的用途。
55.如權利要求54所述的通式(1)的化合物和多聚二醛的用途，其中所述GI功能紊亂或相關病癥包括腸應激綜合征(IBS)；炎性腸病(IBD)，大腸炎，克羅恩病和腹部疾病。
56.如權利要求54所述的通式(1)的化合物和多聚二醛的用途，其中所述通式(1)的化合物是氯化黃連素。
57.如權利要求54所述的通式(1)的化合物和多聚二醛的用途，其中所述多聚二醛是聚-(2-丙烯醛，2-丙烯酸)。
58.如權利要求54所述的通式(1)的化合物和多聚二醛的用途，其中所述多聚二醛是二醛多糖。
59.如權利要求58所述的通式(1)的化合物和多聚二醛的用途，其中所述二醛多糖包括通式(2)的化合物。
60.如權利要求59所述的通式(1)的化合物和多聚二醛的用途，其中所述通式(2)的化合物為氧化纖維素。
61.如權利要求60所述的通式(1)的化合物和多聚二醛的用途，其中
62.如權利要求44所述的方法，其中將所述通式(1)的化合物和所述通式(2)的化合物用作飼料添加劑。
63.含有0.1-50ppm通式(1)的化合物和1-400ppm多聚二醛的改進的食物。
64.如權利要求63所述的改進的食物，其中所述食物含有2-10ppm通式(1)的化合物和10-200ppm通式(2)的化合物。
65.如權利要求63所述的改進的食物，其中通式(1)為氯化黃連素且其中所述多聚二醛為氧化纖維素。
66.治療腸應激綜合征，炎性腸病，大腸炎，克羅恩病和腹部疾病的方法，包括向需要給藥的動物進行有效量的通式(1)的化合物給藥。
67.治療腸應激綜合征，炎性腸病，大腸炎，克羅恩病和腹部疾病的方法，包括向需要給藥的動物進行有效量的通式(2)的化合物給藥。
68.促進動物體重增加的方法，包括進行有效量的通式(1)的化合物給藥。
69.促進動物體重增加的方法，包括進行有效量的通式(2)的化合物給藥。
70.通式(1)的化合物在制備用干治療胃腸(GI)功能紊亂或相關病癥，或適干促進動物(包括人類)體重增加的組合物中的用途。
71.通式(2)的化合物在制備用干治療胃腸(GI)功能紊亂或相關病癥，或適干促進動物(包括人類)體重增加的組合物中的用途。
72.如權利要求70或71所述的化合物用途，其中所述GI功能紊亂或相關病癥包括腸應激綜合征(IBS)；炎性腸病(IBD)，包括大腸炎，克羅恩病和腹部疾病。
73.含有基本上如說明書所述并參照實施例5，6或10所述的氯化黃連素和40％氧化纖維素的組合物。
74.基本上如說明書所述并特別參照實施例4，7，8或10所述的治療方法。
全文摘要
本發明涉及治療胃腸功能紊亂及其相關病癥，包括腸應激綜合征；炎性腸病，大腸炎，克羅恩病和/或促進包括人類的動物體重增加的組合物，所述組合物包括通式(1)的黃連素或其衍生物(其中R
文檔編號A23K1/17GK1845738SQ200480024992
公開日2006年10月11日 申請日期2004年8月26日 優先權日2003年8月28日
發明者金國蓓, 吳文揚 申請人:澳大利亞生物醫學公司