專利名稱：一種鉀細(xì)菌及利用該細(xì)菌生產(chǎn)微生物肥料菌種劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明所述的技術(shù)方案屬于農(nóng)業(yè)肥料領(lǐng)域，具體的講，是屬于生物肥料領(lǐng)域中的微生物肥料領(lǐng)域，依據(jù)國(guó)際專利分類法，屬于C05F 11/08領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
我國(guó)人口多、耕地少，且隨著人口增長(zhǎng)、工業(yè)和城市的發(fā)展耕地逐年遞減。據(jù)有關(guān)部門(mén)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)人口平均每年增加1600萬(wàn)，而耕地每年減少400萬(wàn)畝。1950年人口5.5億，耕地16.5億畝，人均耕地2.99畝，1980年人均耕地1.51畝，1990年人均耕地降到1.1畝，大大低于世界人均耕地4.03畝的水平，也低于亞洲人均耕地2.1畝的水平。為此，我國(guó)增加農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量的唯一可行途徑是提高單位面積產(chǎn)量。才能滿足工業(yè)發(fā)展和人口增加對(duì)農(nóng)產(chǎn)品的需求，化肥也就順理成章的得到了廣泛應(yīng)用。
長(zhǎng)期以來(lái)不合理使用化學(xué)肥料帶來(lái)的土壤板結(jié)、地力下降、生態(tài)破壞、環(huán)境污染以及農(nóng)副產(chǎn)品品質(zhì)下降問(wèn)題，已經(jīng)受到國(guó)家有關(guān)部門(mén)和農(nóng)業(yè)科技界的高度重視?；实拇罅渴┯?，造成了土壤肥力下降，土壤板結(jié)和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本不斷提高的弊病。近幾十年來(lái)，我國(guó)一直努力探索合理施肥、克服化肥的弊端及提高化肥利用率的有效途徑。
農(nóng)業(yè)肥料包括化學(xué)肥料和生物肥料，是我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)不可替代的重要生產(chǎn)資料。其中，生物肥料作為農(nóng)業(yè)生物工程學(xué)科的重要分支和土壤肥料學(xué)的重要組成部分，近十年無(wú)論在基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究方面都得到了迅速發(fā)展。而農(nóng)業(yè)肥料中的微生物肥料(屬于生物肥料的一種)作為一種重要的農(nóng)業(yè)技術(shù)措施在發(fā)展高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、高效農(nóng)業(yè)中的作用越來(lái)越被人們所認(rèn)識(shí)，這給它的開(kāi)發(fā)、推廣、應(yīng)用提供了相當(dāng)大的發(fā)展空間，特別是在發(fā)展有機(jī)農(nóng)業(yè)、生產(chǎn)A級(jí)、AA級(jí)綠色食品中的不可替代性，充分體現(xiàn)了它潛在的魅力。
近幾年來(lái)我國(guó)微生物肥料發(fā)展很快，有多家企業(yè)從事生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)，品種不斷增加，同時(shí)也有一些國(guó)外產(chǎn)品打入國(guó)內(nèi)市場(chǎng)。由于菌種等原因，目前市場(chǎng)的產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，生產(chǎn)應(yīng)用上出現(xiàn)了一些問(wèn)題。據(jù)最近幾年農(nóng)業(yè)部監(jiān)督抽查、跟蹤抽查，國(guó)家統(tǒng)檢的情況看，抽查合格率不到60％，產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題主要是有效菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，保質(zhì)期過(guò)短。微生物肥料中有效活菌數(shù)是產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)，有效活菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，產(chǎn)品質(zhì)量就得不到保證，反映出來(lái)的是應(yīng)用效果不穩(wěn)定，其中原因主要是菌種問(wèn)題，菌種在制備為微生物菌種劑后，在保藏過(guò)程中的存活能力下降，存活時(shí)間變短。在生產(chǎn)使用過(guò)程中表現(xiàn)為菌種活性下降，生產(chǎn)性能減弱，繁殖速度變慢，抗逆性差。因此，菌種問(wèn)題一直困擾我國(guó)微生物肥料的生產(chǎn)和發(fā)展。在這樣的情況下，本發(fā)明提供的菌種和利用該菌種生產(chǎn)的微生物菌種劑可以非常好的解決菌數(shù)達(dá)標(biāo)和保質(zhì)期延長(zhǎng)的問(wèn)題，這使得本發(fā)明顯得十分重要和有意義。
發(fā)明內(nèi)容
微生物肥料是以微生物生命活動(dòng)的作用導(dǎo)致得到特定肥料效應(yīng)的一種制品，是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中所使用肥料的一種，與傳統(tǒng)化肥和有機(jī)肥在要領(lǐng)和內(nèi)涵上有所不同。微生物肥料生產(chǎn)成本低，使用方便，應(yīng)用效果好，不污染環(huán)境，施用后不僅增產(chǎn)，而且能提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和減少傳統(tǒng)化肥用量。微生物肥料是生產(chǎn)綠色食品的肥料，是保護(hù)綠色環(huán)境的肥料，是很有發(fā)展前途的肥料。目前該項(xiàng)目再我國(guó)正處于新的發(fā)展階段。
要解決的技術(shù)問(wèn)題在國(guó)家有關(guān)部門(mén)充分重視使用化學(xué)肥料帶來(lái)的土壤板結(jié)、地力下降、生態(tài)破壞、環(huán)境污染以及農(nóng)副產(chǎn)品品質(zhì)下降問(wèn)題后，生物肥料中的微生物肥料得到了迅猛的發(fā)展，但是，由于菌種等原因，目前市場(chǎng)的產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，在生產(chǎn)應(yīng)用上出現(xiàn)了一些問(wèn)題。據(jù)最近幾年農(nóng)業(yè)部監(jiān)督抽查、跟蹤抽查，國(guó)家統(tǒng)檢的情況看，抽查合格率不到60％，產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題主要是有效菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，保質(zhì)期過(guò)短。微生物肥料中有效活菌數(shù)是產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)，有效活菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，產(chǎn)品質(zhì)量就得不到保證，反映出來(lái)的是應(yīng)用效果不穩(wěn)定、保質(zhì)期短，其中原因主要是菌種問(wèn)題，菌種在制備為微生物菌種劑后，在保藏過(guò)程中的存活能力下降，存活時(shí)間變短。這個(gè)問(wèn)題實(shí)際上是由于這些微生物菌種劑所使用的菌種要么不能產(chǎn)生芽孢，要么產(chǎn)生芽孢的能力比較弱，或者產(chǎn)生的芽孢萌發(fā)能力差，不能很好度過(guò)微生物菌種劑生產(chǎn)過(guò)程中的脅迫條件和庫(kù)存、保藏過(guò)程，從而在生產(chǎn)使用過(guò)程中表現(xiàn)為菌種活性下降，生產(chǎn)性能減弱，繁殖速度變慢等等。菌種問(wèn)題一直困擾我國(guó)微生物肥料的生產(chǎn)和發(fā)展。在這樣的情況下，本發(fā)明提供的新菌種和利用新技術(shù)方案生產(chǎn)的微生物菌種劑可以非常好的解決菌數(shù)達(dá)標(biāo)和保質(zhì)期延長(zhǎng)的問(wèn)題，這使得本發(fā)明顯得十分重要和有意義。
技術(shù)方案首先，需要明確的是本發(fā)明中提到的百分比和比例均是指重量百分比和重量比例。
本發(fā)明提供了一種解決上述問(wèn)題的技術(shù)方案，具體的，本發(fā)明提供了一種微生物(膠凍樣芽孢桿菌，Bacillus mucilaginosus)，具體的，菌種被命名為“新鉀1號(hào)”(已于2004年4月15日它在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC1131)，該微生物從高產(chǎn)農(nóng)田中分離，并經(jīng)馴化，長(zhǎng)期以來(lái)性狀穩(wěn)定。
該菌種的生物學(xué)特性為菌體桿狀，大小1-1.2*2-5微米，革蘭氏陽(yáng)性，細(xì)胞有異染色粒和β-羥基丁酸鹽，芽孢中生或次端生，橢圓形，不使菌體膨大，桿狀菌體有成鏈趨勢(shì)，鏈的穩(wěn)定性決定菌落形態(tài)，在牛肉蛋白胨培養(yǎng)基上菌落為乳白色，多數(shù)為圓形，表面略粗糙，邊緣不規(guī)則，無(wú)光澤，無(wú)色素，直徑2-6毫米。能利用多種氮源、碳源，生長(zhǎng)溫度20-55℃，最佳生長(zhǎng)溫度37℃，最適PH7.1。在不良條件下，菌體轉(zhuǎn)化產(chǎn)生芽孢，芽孢對(duì)不良環(huán)境抗逆性強(qiáng)，可耐受100℃高溫和干燥等惡劣條件。
申請(qǐng)人認(rèn)為，因?yàn)榫N是新的，所以該菌種使用傳統(tǒng)的微生物菌種劑生產(chǎn)方法生產(chǎn)微生物菌種劑的技術(shù)方案具有新穎性，如果生產(chǎn)出的微生物菌種劑能夠克服上述的缺點(diǎn)(有效菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，保質(zhì)期過(guò)短)，具有突出的特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步，就具有了創(chuàng)造性和實(shí)用性，具有了被授予專利權(quán)的基本條件。
傳統(tǒng)的微生物菌種劑生產(chǎn)中用到的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法在《鉀細(xì)菌》(陳延偉等編，農(nóng)業(yè)出版社，1959年，北京)一書(shū)中有詳細(xì)的描述。
同時(shí)，申請(qǐng)人在本發(fā)明中，對(duì)新鉀1號(hào)的發(fā)酵條件進(jìn)行摸索，得出了1個(gè)非常適用于該菌種的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件(該培養(yǎng)基和發(fā)酵條件也適用于其他部分菌種)。申請(qǐng)人認(rèn)為，因?yàn)榫N是新的，本發(fā)明提供的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件也是新的，所以該菌種使用本發(fā)明提供的新的微生物發(fā)酵條件生產(chǎn)微生物菌種劑的技術(shù)方案具有新穎性，如果生產(chǎn)出的微生物菌種劑能夠克服上述的缺點(diǎn)(有效菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，保質(zhì)期過(guò)短)，具有突出的特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步，就具有了創(chuàng)造性和實(shí)用性，具有了被授予專利權(quán)的基本條件。
該新的培養(yǎng)方案所使用到的培養(yǎng)基有
新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)蔗糖5g/L，硫酸鎂0.5g/L，碳酸鈣0.1g/L，氯化鈉1.0g/L，三氯化鐵0.005g/L，磷酸氫二鈉2g/L，瓊脂1.5％-2.0％，PH調(diào)至6.5-7.8。
新1液體培養(yǎng)基該培養(yǎng)基不含瓊脂，其他成分和含量與新1培養(yǎng)基相同，PH調(diào)至6.5-7.8。
新2培養(yǎng)基淀粉10g/L，蔗糖10g/L，硫酸鎂1g/L，硫酸氨2g/L，酵母浸出汁0.2g/L，碳酸鈣3g/L，氯化鈉1g/L，磷酸二氫鉀1g/L，PH調(diào)至6.5-7.8。
新3培養(yǎng)基淀粉10g/L，蔗糖1g/L，玉米粉1g/L，硫酸鎂0.5g/L，酵母浸出汁0.2g/L，硫酸氨1g/L，磷酸二氫鉀1.5g/L，碳酸鈣1g/L，PH調(diào)至6.5-7.8。
新4培養(yǎng)基淀粉7g/L，蔗糖1g/L，玉米粉1g/L，硫酸鎂0.5g/L，酵母浸出汁0.1g/L，硫酸氨1g/L，磷酸二氫鉀1g/L，碳酸鈣1g/L，PH調(diào)至6.5-7.8。
以上所有培養(yǎng)基均在使用前經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121℃，1.1kg/cm3，30分鐘)，冷卻。
微生物菌種劑的具體生產(chǎn)方式一、菌種保藏及活化培養(yǎng)菌種以劃線培養(yǎng)的方式在新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)上保藏，短期保藏條件為4℃，每2月活化1次；長(zhǎng)期保藏條件為-20℃，每6個(gè)月活化1次。
二、微生物培養(yǎng)1、微生物培養(yǎng)(傳統(tǒng)微生物發(fā)酵生產(chǎn)方法)培養(yǎng)基淀粉10％，豆餅粉10％，磷酸氫二鉀0.2％，硫酸銨0.1％，硫酸鎂0.05％，氯化鐵0.001％，碳酸鈣0.01％，酵母膏0.01％，PH7.2-7.4。
將菌種活化后接入1000ml上述培養(yǎng)基中，三角瓶搖瓶160RPM30-38℃培養(yǎng)16小時(shí)，然后按1％接種量接種到200L種子發(fā)酵罐中(仍為同種培養(yǎng)基)，通氣，30-38℃培養(yǎng)16小時(shí)，再按10％接種量接到2000L發(fā)酵罐中(仍為同種培養(yǎng)基)，30-38℃培養(yǎng)20小時(shí)后升溫至40-45℃在培養(yǎng)10小時(shí)，待80％菌體產(chǎn)生芽孢后停止發(fā)酵。
2、微生物培養(yǎng)(本發(fā)明提供的方法)1)白保存斜面取種后，劃線接入斜面培養(yǎng)基(新1培養(yǎng)基)，30-38℃培養(yǎng)箱靜置黑暗條件下培養(yǎng)36小時(shí)；2)用無(wú)菌水沖洗斜面，形成菌懸液；3)將1體積菌懸液接入約20體積的新1液體培養(yǎng)基中，30-38℃有氧培養(yǎng)至菌體濃度為108個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；4)將步驟3)得到的菌懸液加入到約5-10倍體積的新2培養(yǎng)基中，30-38℃有氧培養(yǎng)至菌體濃度為108個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；5)將步驟4)得到的菌懸液加入到約50-100倍體積的新3培養(yǎng)基中，35-38℃有氧培養(yǎng)至菌體濃度為108個(gè)/ml數(shù)量級(jí)；6)將步驟5)得到的菌懸液加入到約5-10倍體積的新4培養(yǎng)基中，35-38℃培養(yǎng)有氧培養(yǎng)至菌體濃度為109個(gè)/ml數(shù)量級(jí)。
三、微生物菌種劑的生產(chǎn)將優(yōu)質(zhì)草炭粉(市售)進(jìn)行干熱滅菌后冷卻，根據(jù)想要得到微生物菌種劑中微生物的含量加入到發(fā)酵結(jié)束(傳統(tǒng)微生物發(fā)酵生產(chǎn)方法的或本發(fā)明提供的生產(chǎn)方法的)得到的發(fā)酵液中，進(jìn)行充分?jǐn)嚢瑁迷炝C(jī)造粒，低溫烘干，包裝入庫(kù)成為微生物菌種劑產(chǎn)品，使用時(shí)根據(jù)需要與普通化肥或有機(jī)載體混合即可成為微生物肥料。
有益的效果使用本發(fā)明所提供的菌種生產(chǎn)的微生物菌種劑有較高的有效菌數(shù)和較長(zhǎng)的保質(zhì)期。
在本菌種使用傳統(tǒng)發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的菌種劑，入庫(kù)時(shí)進(jìn)行有效菌數(shù)檢測(cè)，其結(jié)果明顯優(yōu)于市售其他微生物菌種劑中的有效菌數(shù)，有效菌數(shù)是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的3.3倍。解決了菌種數(shù)不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題。
在本菌種使用本發(fā)明提供的發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的菌種劑入庫(kù)時(shí)進(jìn)行有效菌數(shù)檢測(cè)，其結(jié)果明顯優(yōu)于市售其他微生物菌種劑中的有效菌數(shù)，有效菌數(shù)是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的4倍。也解決了菌種數(shù)不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題。
本菌種使用傳統(tǒng)發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的菌種劑在倉(cāng)庫(kù)中保存2年后，進(jìn)行有效菌數(shù)檢測(cè)，其結(jié)果明顯優(yōu)于市售其他微生物菌種劑中的有效菌數(shù)，有效菌數(shù)是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的3倍。解決了保質(zhì)期短的問(wèn)題。
本菌種使用本發(fā)明提供的發(fā)酵方式進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的菌種劑在倉(cāng)庫(kù)中保存2年后，進(jìn)行有效菌數(shù)檢測(cè)，其結(jié)果明顯優(yōu)于市售其他微生物菌種劑中的有效菌數(shù)，有效菌數(shù)是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的3.6倍。解決了保質(zhì)期短的問(wèn)題。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1利用傳統(tǒng)方法對(duì)新鉀1號(hào)進(jìn)行發(fā)酵制備微生物菌種劑培養(yǎng)基淀粉0.5％，蔗糖0.1％，磷酸氫二鉀0.2％，硫酸銨0.1％，硫酸鎂0.05％，氯化鐵0.001％，碳酸鈣0.01％，酵母膏0.02％，PH7.2-7.4。
將菌種活化后接入1000ml上述培養(yǎng)基中，三角瓶搖瓶160RPM37℃培養(yǎng)16小時(shí)，然后按1％接種量接種到200L種子發(fā)酵罐中(仍為同種培養(yǎng)基)，通氣，37℃培養(yǎng)16小時(shí)，再按10％接種量接到2000L發(fā)酵罐中(仍為同種培養(yǎng)基)，37℃培養(yǎng)20小時(shí)后升溫至42℃在培養(yǎng)10小時(shí)，待80％菌體產(chǎn)生芽孢后停止發(fā)酵。檢測(cè)菌體濃度，達(dá)到109，然后按1∶4的重量百分比與進(jìn)行干熱滅菌后冷卻的優(yōu)質(zhì)草炭粉(市售)混合，再進(jìn)行造粒，低溫烘干成為微生物菌種劑。
實(shí)施例2利用本發(fā)明提供的方法對(duì)新鉀1號(hào)進(jìn)行發(fā)酵制備微生物菌種劑先對(duì)菌種進(jìn)行活化，再用5ml無(wú)菌水沖洗斜面，形成菌懸液，菌懸液接入500ml三角瓶，該三角瓶含100ml新1液體培養(yǎng)基，使用搖床培養(yǎng)18小時(shí)，培養(yǎng)條件為37℃，180-200rpm，檢測(cè)菌體濃度，在濃度達(dá)到108數(shù)量級(jí)，進(jìn)行下一步；將500ml三角瓶中的100ml菌液轉(zhuǎn)接入2000ml三角瓶中，該三角瓶含700ml新2培養(yǎng)基，使用搖床培養(yǎng)20小時(shí)，培養(yǎng)條件為37℃，180-200rpm；檢測(cè)菌體濃度，在濃度達(dá)到108數(shù)量級(jí)，進(jìn)行下一步；將2000ml三角瓶中的菌液接入1m3發(fā)酵罐中，接入量為6升，該發(fā)酵罐中含有500L新3培養(yǎng)基，發(fā)酵條件為溫度36-38℃，罐壓0.5kg/cm，通氣量20m3/h，培養(yǎng)8小時(shí)；檢測(cè)菌體濃度，在濃度達(dá)到108數(shù)量級(jí)，進(jìn)行下一步；將1m3發(fā)酵罐中的菌液接入5m3發(fā)酵罐，接入量為500升，該發(fā)酵罐含有3m3新4培養(yǎng)基，發(fā)酵條件為溫度36-38℃，罐壓0.5kg/cm，通氣量120m3/h，培養(yǎng)15小時(shí)。檢測(cè)菌體濃度，在濃度達(dá)到109數(shù)量級(jí)，停止發(fā)酵。然后按1∶4的比例與進(jìn)行干熱滅菌后冷卻的優(yōu)質(zhì)草炭粉(市售)混合，再進(jìn)行造粒，低溫烘干成為微生物菌種劑。
實(shí)施例3對(duì)利用傳統(tǒng)方法制備的微生物菌種劑在未長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)按照常規(guī)的稀釋平板記數(shù)法檢測(cè)微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克(庫(kù)存半個(gè)月)，用無(wú)菌水溶解，用無(wú)菌水稀釋至菌體數(shù)為20-100個(gè)/ml，然后移取1ml稀釋液到無(wú)菌培養(yǎng)皿中，加入適量新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)，充分混合后凝固，在37℃保溫箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，重復(fù)三次以上，以平均值乘以該一克微生物菌種劑稀釋為菌體濃度為20-100個(gè)/ml時(shí)的毫升數(shù)即為每克微生物菌種劑的菌種數(shù)。我們對(duì)利用傳統(tǒng)方法制備的微生物菌種劑在未長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為6.6*108個(gè)/克，為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的3.3倍(國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為2.0*108個(gè)/克)。解決了菌種劑微生物數(shù)目不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題。
實(shí)施例4對(duì)利用本發(fā)明提供的方法制備的微生物菌種劑在未長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)按照常規(guī)的稀釋平板記數(shù)法檢測(cè)微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克(庫(kù)存半個(gè)月)，用無(wú)菌水溶解，用無(wú)菌水稀釋至菌體數(shù)為20-100個(gè)/ml，然后移取1ml稀釋液到無(wú)菌培養(yǎng)皿中，加入適量新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)，充分混合后凝固，在37℃保溫箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，重復(fù)三次以上，以平均值乘以該一克微生物菌種劑稀釋為菌體濃度為20-100個(gè)/ml時(shí)的毫升數(shù)即為每克微生物菌種劑的菌種數(shù)。我們對(duì)利用本發(fā)明提供的方法制備的微生物菌種劑在未長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為8*108個(gè)/克，為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的4倍。解決了菌種劑微生物數(shù)目不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題。
實(shí)施例5對(duì)利用傳統(tǒng)方法制備的微生物菌種劑在長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)按照常規(guī)的稀釋平板記數(shù)法檢測(cè)微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克(庫(kù)存兩年)，用無(wú)菌水溶解，用無(wú)菌水稀釋至菌體數(shù)為20-100個(gè)/ml，然后移取1ml稀釋液到無(wú)菌培養(yǎng)皿中，加入適量新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)，充分混合后凝固，在37℃保溫箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，重復(fù)三次以上，以平均值乘以該一克微生物菌種劑稀釋為菌體濃度為20-100個(gè)/ml時(shí)的毫升數(shù)即為每克微生物菌種劑的菌種數(shù)。我們對(duì)利用傳統(tǒng)方法制備的微生物菌種劑在長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存(兩年)的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為6*108個(gè)/克，為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的3倍。解決了菌種劑微生物數(shù)目不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題和保藏期太短的問(wèn)題。
實(shí)施例6對(duì)利用本發(fā)明提供的方法制備的微生物菌種劑在長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)按照常規(guī)的稀釋平板記數(shù)法檢測(cè)微生物菌種劑中的活菌含量。稱取微生物菌種劑1克(庫(kù)存兩年)，用無(wú)菌水溶解，用無(wú)菌水稀釋至菌體數(shù)為20-100個(gè)/ml，然后移取1ml稀釋液到無(wú)菌培養(yǎng)皿中，加入適量新1培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基)，充分混合后凝固，在37℃保溫箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)，統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，重復(fù)三次以上，以平均值乘以該一克微生物菌種劑稀釋為菌體濃度為20-100個(gè)/ml時(shí)的毫升數(shù)即為每克微生物菌種劑的菌種數(shù)。我們對(duì)利用本發(fā)明提供的方法制備的微生物菌種劑在長(zhǎng)時(shí)間庫(kù)存(兩年)的條件下進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為7.2*108個(gè)/克，為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的3.6倍。解決了菌種劑微生物數(shù)目不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題和保藏期太短的問(wèn)題。
實(shí)施例7未長(zhǎng)期庫(kù)存的微生物菌種劑與肥料混合后使用的效果將雞糞、粉碎玉米芯、煤渣以1∶2∶3重量百分比混合均勻，調(diào)整含水量為30％，在溫度大于30℃的條件下堆積7-10天，把庫(kù)存半個(gè)月的微生物菌種劑與之以1∶9的重量百分比混合，制成微生物肥料。
將制成的微生物肥料在不同作物上進(jìn)行與基質(zhì)肥以及等價(jià)常規(guī)肥比較的小區(qū)肥效實(shí)驗(yàn)，每個(gè)小區(qū)面積0.16畝，實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)。實(shí)驗(yàn)時(shí)每畝施微生物肥料25公斤；基質(zhì)肥(經(jīng)由雞糞、粉碎玉米芯、煤渣以1∶2∶3重量百分比混合均勻，調(diào)整含水量為30％后，在溫度大于30℃的條件下堆積7-10天制成)每畝施25公斤；等價(jià)常規(guī)肥(磷酸二氨∶尿素∶氯化鉀為3∶3∶2混合)每畝施25公斤。均作為基肥，一次施完，不追加?？瞻讓?duì)照不施肥。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下(數(shù)據(jù)均為各肥料相對(duì)于空白對(duì)照的增產(chǎn)百分比)
結(jié)果表明，該微生物菌種劑能夠很好發(fā)揮作用，具有良好的增產(chǎn)效果。
實(shí)施例8長(zhǎng)期庫(kù)存(兩年)的微生物菌種劑與肥料混合后使用的效果將雞糞、粉碎玉米芯、煤渣以1∶2∶3重量百分比混合均勻，調(diào)整含水量為30％，在溫度大于30℃的條件下堆積7-10天，把庫(kù)存兩年的微生物菌種劑與之以1∶9的重量百分比混合，制成微生物肥料。
將制成的微生物肥料在不同作物上進(jìn)行與基質(zhì)肥以及等價(jià)常規(guī)肥比較的小區(qū)肥效實(shí)驗(yàn)，每個(gè)小區(qū)面積0.16畝，實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)。實(shí)驗(yàn)時(shí)每畝施微生物肥料25公斤；基質(zhì)肥(經(jīng)由雞糞、粉碎玉米芯、煤渣以1∶2∶3重量百分比混合均勻，調(diào)整含水量為30％后，在溫度大于30℃的條件下堆積7-10天制成)每畝施25公斤；等價(jià)常規(guī)肥(磷酸二氨∶尿素∶氯化鉀為3∶3∶2混合)每畝施25公斤。均作為基肥，一次施完，不追加?？瞻讓?duì)照不施肥。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下(數(shù)據(jù)均為各肥料相對(duì)于空白對(duì)照的增產(chǎn)百分比)
結(jié)果表明，該微生物菌種劑能夠很好的解決保質(zhì)期問(wèn)題，由它制備的肥料相對(duì)于未長(zhǎng)期保存的微生物菌種劑制備的肥料在使用效果上沒(méi)有顯著差別，解決了本發(fā)明想要解決的問(wèn)題。
權(quán)利要求
1.一種鉀細(xì)菌，其特征在于它在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏號(hào)為CGMCC1131。
2.一種鉀細(xì)菌微生物菌種劑，其特征在于該菌種劑含有權(quán)利要求1所述的鉀細(xì)菌。
3.權(quán)利要求2所述的鉀細(xì)菌微生物菌種劑，其特征在于它由權(quán)利要求1所述的鉀細(xì)菌經(jīng)過(guò)公知的微生物發(fā)酵方法進(jìn)行發(fā)酵并進(jìn)一步加工制成。
4.權(quán)利要求2所述的鉀細(xì)菌微生物菌種劑，其特征在于它由權(quán)利要求1所述的鉀細(xì)菌經(jīng)過(guò)本發(fā)明提供的微生物發(fā)酵方法進(jìn)行發(fā)酵并進(jìn)一步加工制成。
5.一種微生物肥料，其特征在于該肥料含有權(quán)利要求1所述的鉀細(xì)菌。
6.權(quán)利要求5所述的微生物肥料，其特征在于它是由權(quán)利要求2或3或4所述的鉀細(xì)菌微生物菌種劑經(jīng)過(guò)進(jìn)一步加工，與公知化肥和或有機(jī)載體混合而成。
7.一種生產(chǎn)微生物菌種劑的方法，其特征在于使用了權(quán)利要求1所述的鉀細(xì)菌進(jìn)行發(fā)酵。
8.權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于對(duì)權(quán)利要求1所述的鉀細(xì)菌的發(fā)酵是以公知的發(fā)酵方法進(jìn)行的。
9.權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于對(duì)權(quán)利要求1所述的鉀細(xì)菌的發(fā)酵是以本發(fā)明提供的發(fā)酵方法進(jìn)行的。
10.一種生產(chǎn)微生物肥料的方法，其特征在于使用了權(quán)利要求1所述的鉀細(xì)菌。
11.權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于它是由權(quán)利要求2或3或4所述的鉀細(xì)菌微生物菌種劑經(jīng)過(guò)進(jìn)一步加工，與公知化肥和或有機(jī)載體混合而成。
全文摘要
本發(fā)明所述的技術(shù)方案屬于生物肥料領(lǐng)域中的微生物肥料領(lǐng)域。國(guó)家統(tǒng)檢的情況看，微生物肥料抽查合格率不到60％，產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題主要是有效菌數(shù)不達(dá)標(biāo)，保質(zhì)期過(guò)短。菌種在制備為微生物菌種劑后，在保藏過(guò)程中的存活能力下降、存活時(shí)間短。因此在生產(chǎn)過(guò)程中表現(xiàn)菌種活性下降，生產(chǎn)性能減弱，繁殖速度慢，抗逆性差。本發(fā)明提供的新菌種和利用新技術(shù)方案生產(chǎn)的微生物菌種劑可以非常好的解決菌種數(shù)達(dá)標(biāo)和保質(zhì)期延長(zhǎng)的問(wèn)題，這使本發(fā)明顯得十分重要和有意義。
文檔編號(hào)C12N1/20GK1624111SQ20041008885
公開(kāi)日2005年6月8日 申請(qǐng)日期2004年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月8日
發(fā)明者麻林濤, 王莉 申請(qǐng)人:麻林濤, 王莉