專利名稱：秋石斛蘭優質種苗組織培養快速繁殖方法
技術領域：
本發明涉及秋石斛蘭的優質種苗快速繁殖方法和所使用的培養基。
背景技術：
秋石斛蘭又稱蝴蝶石斛，多是以原產于新幾內亞的熱帶原生種蝴蝶石斛(Dendrobiumphalaenopsis)為親本育成的雜交品種。新幾內亞、澳大利亞是秋石斛類原種的故鄉，雜交品種栽培最多的是以泰國為主產地的“熊貓1號”，其它較流行的品種有“仙綈”、“瑪麗”、諾曼等。
秋石斛無明顯的休眠期，葉片可維持數年不脫落；每年秋天可見花序從假鱗莖的頂部及附近的節上抽出。花莖比較長，每莖有十多朵花，有時一個假鱗莖可開出多枝花并連續開花數年，可作切花也可作盆花栽培。秋石斛根據其花的大小把它分成二類一類是大花型秋石斛，其花形及花在花序上的著生方式極像蝴蝶蘭，只是唇瓣較蝴蝶蘭的唇瓣簡單得多，如雜種蝴蝶石斛，可作盆花或切花之用；另一類是小花型秋石斛，主要特點是萼片細長，向上斜立，有反卷狀。花朵厚實，花期特別長，也特別適宜作盆花切花之用。
秋石斛在我國花卉市場出現比較早，這類石斛蘭最大的特點是在高溫高濕和短日照的環境下，才能形成花芽，適合于熱帶和高溫溫室栽培。一般花期在秋季，但常常只要條件許可，在其它季節也可能開花。秋石斛(Dendrobium)的原種主要分布于大洋洲的澳大利亞和巴布亞新幾內亞的熱帶叢林中，常附生于低地雨林的大樹上或石壁上，它們的共同特點是花期局限于秋季，但目前，經過人工雜交培育，已經出現了許多花色不同，花期全年開放的流行品種。現在秋石斛切花產量最大的地區為泰國、馬來西亞和夏威夷等熱帶地區，我國栽培量還較少，作為一種新型的高檔切花品種，市場需求量較大。
我國大陸近年來引進了不少秋石斛蘭品種，但種苗生產主要靠分株，繁殖速度慢。已生產出的優質的秋石斛蘭種苗，市場十分看好。目前，國內還未見秋石斛蘭種苗組織培養快速繁殖成功的報道，也未有秋石斛蘭種苗快速繁殖的專利。
發明內容
本發明提供了多種秋石斛蘭原種和雜種的組織培養繁殖方法和所使用的培養。對外植體的選擇，培養條件和培養基成分進行了系統闡述，應用價值高。通過叢生芽途徑進行秋石斛蘭優良品種的組織培養獲得大量性狀穩定的試管苗，為滿足秋石斛蘭優質種苗市場的需要提供一條有效的途徑。
本發明所述的秋石斛蘭優質種苗快速繁殖方法包括以下步驟1.材料此發明已實驗的材料有蝴蝶石斛(Dendrobium phalaenepsis)、羊角石斛(Dendrobium stratiotes)、熊貓1號(Dendrobium Ekapol Pandal’)、熊貓2號(Dendrobium Ekapol Panda 2’)、泰國白(Dendrobium Thailand White)、莊富(Dendrobium Joam Ku)、紫蝶(Dendrobium Isumi Kiyoshi)、花臉(Dendrobium Kelrme)等，材料均取自華南植物園。
2.外植體的消毒取秋石斛蘭當年生具5-6個節的嫩芽，去除葉片后，用自來水沖洗干凈后剪成兩段，在超凈工作臺上用70％的酒精浸泡1分鐘，再用0.1％升汞溶液滅菌10分鐘，無菌水沖洗5次后，用無菌吸水紙吸干，剪取2-3厘米帶節的莖段和莖尖，接種到原球莖和叢生芽誘導培養基上。
3.原球莖和叢生芽的誘導誘導培養基為MS+6-芐基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水培養基上，在培養溫度(26±2)℃條件下，10天左右莖尖開始生長，20天左右莖段節上有新芽形成并生長，當6-芐基嘌呤為4-5時新芽基部有原球莖產生。培養基含蔗糖30克/升，pH 5.5-5.8，瓊脂0.7％。光照度1500～2000lx，光照12小時/天。
4.叢生芽增殖將利用莖段和莖尖培養得到的叢生芽，剪去部分葉片轉移到叢生芽增殖培養基MS+6-芐基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水，能誘導原球莖和叢生芽形成；原球莖能在較高的6-芐基嘌呤濃度培養基上增殖，原球莖轉入較低6-芐基嘌呤濃度的培養基時會分化出叢生芽，叢生芽在較低6-芐基嘌呤濃度的培養基上能增殖。光照度1500～2000lx，光照12小時/天。
5.生根壯苗培養叢生芽增殖多代后，可將叢生芽切割成單個芽，接種在1/2MS培養基+萘乙酸0.5-1.0毫克/升+香蕉汁100克/升+活性碳0.5克/升的生根壯苗培養基上進行生根壯苗培養。40天左右能形成株高3-4厘米的完整植株。光照度1500～2000lx，光照12小時/天。
6.試管苗移栽春季為移栽的適宜季節。試管苗移栽時，在自然光照下煉苗5-10天，將秋石斛蘭小苗從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養基，在0.1％的高錳酸鉀溶液中浸泡5分鐘后涼干，以小塑料盆為栽培容器，以浸泡過的泥炭蘚為栽培基質，保持適當通風和足夠的濕度，移栽的成活率均可達95％-100％。冬季時采用溫室種植，溫度維持在15℃以上，否則易引起落葉甚至死亡。
本發明提供的方法生產出的秋石斛蘭種苗具有遺傳穩定性高，出苗快，苗壯，種苗品質好、抗性強、生長良好等優勢。本發明所述的方法能成功地進行優良品種的秋石斛蘭優質種苗的組織培養和快速繁殖，由于是采用無性繁殖，實施該方法只需有簡單的植物組織培養設備即可進行，是利用植物組織細胞的全能性和植物組織培養等生物技術進行植物優質種苗的規模化生產，具有投入少，產出高的優勢。
具體實施例方式
實施例11、取材蝴蝶石斛。
2、外植體的消毒取蝴蝶石斛當年生具5-6個節的嫩芽，去除葉片后，用自來水沖洗干凈后剪成兩段，在超凈工作臺上用70％的酒精浸泡1分鐘，再用0.1％升汞溶液滅菌10分鐘，無菌水沖洗5次后，用無菌吸水紙吸干，剪取2-3厘米帶節的莖段和莖尖，接種到原球莖和叢生芽誘導培養基上。
3、原球莖和叢生芽的誘導誘導培養基為MS+6-芐基嘌呤2-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水培養基上，在培養溫度(26±2)℃條件下，10天左右莖尖開始生長，20天左右莖段節上有新芽形成并生長，當6-芐基嘌呤為4-5時新芽基部有原球莖產生。培養基含蔗糖30克/升，pH 5.5-5.8，瓊脂0.7％。光照度1500～2000lx，光照12小時/天。
4、叢生芽增殖將利用莖段和莖尖培養得到的叢生芽，剪去部分葉片轉移到叢生芽增殖培養基MS+6-芐基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水，能誘導原球莖和叢生芽形成。當6-芐基嘌呤濃度為1-2毫克/升時只有叢生芽，無原球莖，當6-芐基嘌呤濃度為3-4毫克/升時既有叢生芽，又有原球莖，當6-芐基嘌呤濃度為5毫克/升以上時，生成的原球莖多，誘導出的叢生芽數量少。原球莖能在較高的6-芐基嘌呤濃度培養基上增殖，原球莖轉入較低6-芐基嘌呤濃度的培養基時會分化出叢生芽，叢生芽在較低6-芐基嘌呤濃度的培養基上能增殖。
5、生根壯苗培養叢生芽增殖多代后，可將叢生芽切割成單個芽，接種在1/2MS培養基+萘乙酸0.5-1.0毫克/升+香蕉汁100克/升+活性碳0.5克/升的生根壯苗培養基上進行生根壯苗培養。40天左右能形成株高3-4厘米的完整植株。
6、試管苗移栽春季為移栽的適宜季節。試管苗移栽時，在自然光照下煉苗5-10天，將蝴蝶石斛小苗從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養基，在0.1％的高錳酸鉀溶液中浸泡5分鐘后涼干，以小塑料盆為栽培容器，以浸泡過的泥炭蘚為栽培基質，溫度維持在15℃以上，保持適當通風和足夠的濕度，移栽的成活率均可達90％。
權利要求
1.一種秋石斛蘭優質種苗組織培養快速繁殖方法，以秋石斛蘭優良種質，利用新芽為外植體，采用獨特的培養基進行叢生芽增殖并獲得優質種苗，其特征在于該方法包括以下步驟1).材料秋石斛蘭優良種質；2).外植體的消毒取秋石斛蘭當年生具5-6個節的嫩芽，去除葉片后，用水沖洗干凈后剪成兩段，在超凈工作臺上用70％的酒精浸泡1分鐘，再用0.1％升汞溶液滅菌10分鐘，無菌水沖洗5次后，用無菌吸水紙吸干，剪取2-3厘米帶節的莖段和莖尖，接種到原球莖和叢生芽誘導培養基上；3).原球莖和叢生芽的誘導誘導培養基為MS+6-芐基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水培養基上，在培養溫度26±2℃條件下，10天莖尖開始生長，20天左右莖段節上有新芽形成并生長，當6-芐基嘌呤為4-5時新芽基部有原球莖產生，培養基含蔗糖30克/升，pH5.5-5.8，瓊脂0.7％；4).叢生芽增殖將利用莖段和莖尖培養得到的叢生芽，剪去部分葉片轉移到叢生芽增殖培養基MS+6-芐基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水，能誘導原球莖和叢生芽形成，原球莖能在較高的6-芐基嘌呤濃度培養基上增殖，原球莖轉入較低6-芐基嘌呤濃度的培養基時會分化出叢生芽，叢生芽在較低6-芐基嘌呤濃度的培養基上能增殖；5).生根壯苗培養叢生芽增殖多代后，可將叢生芽切割成單個芽，接種在1/2 MS培養基+萘乙酸0.5-1.0毫克/升+香蕉汁100克/升+活性碳0.5克/升的生根壯苗培養基上進行生根壯苗培養，40天能形成株高3-4厘米的完整植株；6).試管苗移栽試管苗移栽時，在自然光照下煉苗5-10天，將秋石斛蘭小苗從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養基，在0.1％的高錳酸鉀溶液中浸泡5分鐘后涼干，以小塑料盆為栽培容器，以浸泡過的泥炭蘚為栽培基質，保持適當通風和足夠的濕度，冬季時采用溫室種植，溫度維持在15℃以上。
2.根據權利要求1中所述秋石斛蘭優質種苗快速繁殖方法，其特征在于步驟6)中試管苗移栽的適宜季節為春季。
3.根據權利要求1中所述秋石斛蘭優質種苗快速繁殖方法，其特征在于步驟中的培養條件為光照度1500～2000lx，光照12小時/天。
4.根據權利要求1中所述秋石斛蘭優質種苗快速繁殖方法，其特征在于所述的材料為蝴蝶石斛、羊角石斛、熊貓1號、熊貓2號、泰國白、莊富、紫蝶、花臉，材料均取自華南植物園。
全文摘要
本發明涉及秋石斛蘭的優質種苗快速繁殖方法和所使用的培養基。秋石斛蘭又稱蝴蝶石斛，作為一種新型的高檔切花品種，市場需求量較大。我國大陸近年來引進了不少秋石斛蘭品種，但種苗生產主要靠分株，繁殖速度慢。已生產出的優質的秋石斛蘭種苗，市場十分看好。本發明提供多種秋石斛蘭原種和雜種的組織培養繁殖方法和所使用的培養基。通過叢生芽途徑進行秋石斛蘭優良品種的織培養獲得大量性狀穩定的試管苗，本發明提供的方法生產出的秋石斛蘭種苗具有遺傳穩定性高，出苗快，苗壯，種苗品質好、抗性強、生長良好等優勢。
文檔編號A01H4/00GK1631109SQ200410077729
公開日2005年6月29日 申請日期2004年12月29日 優先權日2004年12月29日
發明者李桂雙, 段俊, 曾宋君, 陳之林, 陳建通 申請人:中國科學院華南植物園