專利名稱：巖生植物金發草的組織培養和快速繁殖方法
所屬領域本發明涉及植物的組織培養方法，特別是巖生植物金發草的組織培養和快速繁殖方法。
背景技術：
巖生植物金發草具有很強的耐旱抗瘠薄能力，在基礎設施建設中產生的人工創面恢復植被，營造良好的生態建設工程上可以發揮積極作用，具有較高的開發利用價值。目前，在實踐運用上，為通過直接播種種子來營造金發草植被。由于金發草種子很小，長度約0.8μm左右，呈長梭形，幼苗時期抗逆性差，很難成苗。
發明內容
本發明的目的即在于克服現有技術的缺點，提供一種巖生植物金發草的組織培養和快速繁殖方法，可成百倍地增殖快繁金發草幼苗，提高金發草籽的成活率。
本發明的目的通過以下技術方案來實現巖生植物金發草的組織培養和快速繁殖方法，包括種子滅菌消毒、無菌苗的產生、愈傷組織的誘導與繼代、植株的再生、煉苗移栽。
種子滅菌消毒利用70-75％乙醇和0.1％升汞分別處理約30sec和5min；再用無菌水充分沖洗；無菌苗的產生滅菌消毒過的種子接種于不加激素的MS固體培養基表面，26±1℃下培養10-15天，種子萌發出苗，45天后可發出4-5片葉子；愈傷組織的誘導與繼代取無菌苗的葉片或整個植株接種到愈傷組織誘導培養基上，或者直接將種子接種到愈傷組織誘導培養基上，愈傷組織誘導培養基為MS+2，4-D 0.01～4.0mg·L-1+NAA 0.0～3.0mg·L-1+6-BA0.0～0.3mg·L-1+3％蔗糖+1％瓊脂粉，pH 5.8，高壓滅菌。26±1℃下暗培養，約10天后開始長出愈傷組織，繼代則是每15-30天將愈傷組織轉接種到新的愈傷組織培養基上，以使愈傷組織不斷增值擴大；植株的再生將愈傷組織轉接種到分化培養基上，分化培養基為MS+6-BA 0.0～3.0mg·L-1+NAA 0.0～0.2mg·L-1+3％蔗糖+1％瓊脂粉，pH 5.8，高壓滅菌，在26±1℃，光照時間12h·d-1條件下培養約45天，即可再生出植株來。
煉苗移栽煉苗時間約一周。
通過上面的敘述可以看出，本發明具有以下優點巖生植物金發草的組織培養和快速繁殖方法，可成百倍地增殖快繁金發草幼苗，并且成活率可以達到90％以上，從而為有效解決金發草幼苗成活提供了新的可能的途徑。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步的描述實施例巖生植物金發草的組織培養和快速繁殖方法，包括種子滅菌消毒、無菌苗的產生、愈傷組織的誘導與繼代、植株的再生、煉苗移栽等步驟種子滅菌消毒金發草籽用70-75％乙醇和0.1％HgCl2分別處理約30sec和5min，并用無菌水沖洗5次；無菌苗的產生滅菌消毒過的種子接種于不加激素的MS固體培養基表面，26±1℃下培養，種子出芽時間較長，為10-15天，種子萌發出苗，幼苗期生長很慢，經45～60天的培養才出現4～5片葉子。
愈傷組織的誘導與繼代當無菌苗長到4～5片葉子時，以整株小苗或葉片置于愈傷組織誘導培養基上誘導愈傷組織，或者直接將種子接種到愈傷組織誘導培養基上，愈傷組織誘導培養基為MS+2，4-D1.0mg·L-1+NAA 2.0mg·L-1+6-BA0.2mg·L-1+3％蔗糖+1％瓊脂粉，pH 5.8，高壓滅菌。26±1℃下暗培養，約10天后，外植體開始膨大，長出淺黃綠色的愈傷組織。繼代則是每15-30天將愈傷組織轉接種到新的愈傷組織培養基上，以使愈傷組織不斷增值擴大；兩個月后，愈傷組織長成綠豆大小。幼苗做外植體的愈傷組織誘導率較高，誘導頻率為60％，高于以幼葉作外植體的愈傷組織誘導率(愈傷組織誘導頻率為33％)。
從金發草誘導出來的愈傷組織比較疏松，質量較好，每塊愈傷組織都是由很多顆粒狀的愈傷組織構成。
植株的再生待愈傷組織長到3mm以上時轉移到分化培養基上分化成苗，分化培養基為MS+6-BA 1.5mg·L-1+NAA 0.2mg·L-1+3％蔗糖+1％瓊脂粉，pH 5.8，高壓滅菌，在26±1℃，光照時間12h·d-1條件下培養約45天，即可再生出植株來。
由于金發草的愈傷組織質量好，不僅每一塊愈傷組織都能分化出植株來，而且每個愈傷組織塊中的顆粒狀愈傷組織都能再生出小植株來，統計其再生頻率可達98％以上。因此，金發草通過組織培養可得到大量的再生植株，苗的增殖系數在1∶20(愈傷組織塊數分化出的小苗數)以上。如果將愈傷組織繼代培養，增殖系數則可以成千百倍地增加。
在本研究條件下，小植株全部是從愈傷組織中分化出來的，沒有叢生苗的發生。分化出來的小植株很容易生根。可以將再生小植株轉到不含激素的MS培養基上，也可以在分化培養基上直接生根。顯微鏡初步觀察顯示，金發草愈傷組織中分化出胚狀體，然后由胚狀體發育為小植株。更為有意義的是金發草的愈傷組織繼代翌年以后仍然具有分化出小植株的能力。
煉苗移栽生根的組培苗由于密度太大，可以轉接到1/2MS培養基上，讓其長大。待植株長到約8cm長時，揭開瓶蓋煉苗約一周，即可移植到地里，成活率可以達到90％以上。
權利要求
1.巖生植物金發草的組織培養和快速繁殖方法，包括種子滅菌消毒、無菌苗的產生、愈傷組織的誘導與繼代、植株的再生、煉苗移栽，其特征在于種子滅菌消毒利用70-75％乙醇和0.1％升汞分別處理約30sec和5min，再用無菌水充分沖洗；無菌苗的產生滅菌消毒過的種子接種于不加激素的MS固體培養基表面，26±1℃下培養10-15天，種子萌發出苗，45天后可發出4-5片葉子。愈傷組織的誘導與繼代取無菌苗的葉片或整個植株接種到愈傷組織誘導培養基上，或者直接將種子接種到愈傷組織誘導培養基上，愈傷組織誘導培養基為MS+2，4-D0.01～4.0mg·L-1+NAA0.0～3.0mg·L-1+6-BA0.0～0.3mg·L-1+3％蔗糖+1％瓊脂粉，pH5.8，高壓滅菌，26±1℃下暗培養，約10天后開始長出愈傷組織，繼代則是每15-30天將愈傷組織轉接種到新的愈傷組織培養基上，以使愈傷組織不斷增值擴大；植株的再生將愈傷組織轉接種到分化培養基上，分化培養基為MS+6-BA0.0～3.0mg·L-1+NAA0.0～0.2mg·L-1+3％蔗糖+1％瓊脂粉，pH5.8，高壓滅菌，在26±1℃，光照時間12h·d-1條件下培養約45天，即可再生出植株來。煉苗移栽煉苗時間約一周。
2.根據權利要求1所述的巖生植物金發草的組織培養和快速繁殖方法，其特征在于愈傷組織中分化出來的再生小植株可以轉到不含激素的MS培養基上，也可以在分化培養基上直接生根。
3.根據權利要求1所述的巖生植物金發草的組織培養和快速繁殖方法，其特征在于生根的組培苗由于密度太大，可以轉接到1/2MS培養基上，讓其長大，待植株長到約8cm長時，煉苗約一周即可移植到地里。
全文摘要
本發明公開了一種巖生植物金發草的組織培養和快速繁殖方法，包括種子滅菌消毒、無菌苗的產生、愈傷組織的誘導與繼代、植株的再生、煉苗移栽，它是以長出4～5片葉片的無菌苗和葉片為外植體，接種到愈傷組織誘導培養基誘導愈傷組織，再接種到分化培養基分化成苗。愈傷組織誘導培養基為MS+2，4－D 1.0mg·L
文檔編號A01H4/00GK1762204SQ20041004087
公開日2006年4月26日 申請日期2004年10月21日 優先權日2004年10月21日
發明者王勝華, 陳放 申請人:四川大學