專利名稱：一種雷公藤提取物的制備方法
技術領域：
本發明屬于農藥原料的加工領域，具體地說是一種作為生物農藥配方中的重要成分雷公藤提取物的制備方法。
背景技術：
目前，我國使用的殺蟲劑多數是化學合成品，許多農藥中含有氯、磷有機物，雖然能有效殺滅害蟲，但殘留在糧食、蔬菜、水果上對人的健康也構成了極大的威脅。近年來，農藥中毒的人數多達10萬余人。同時，長期使用化學農藥也造成了害蟲的抗藥性，并且化學農藥中所含有的氯、銅、砷、鉛等重金屬元素，嚴重地污染了環境和農產品，不利于發展綠色企業、綠色食品。
通過對雷公藤屬植物的研究證實，其化學成分有生物堿13個，二萜13個，倍半萜12個，此外還有甙類、糖類、醇類、微量元素等，而且這些成分中有17個具有多種生物活性，包括抗炎、免疫抑制、抗菌、殺蟲、抗腫瘤、抗生育等作用，有效成分中以二萜類最多，依次為生物堿、三萜類、微量元素等。雷公藤浸提物對眾多害蟲和園林樹木害蟲較好的防治效果。在民間，其常作為農藥用以殺蟲、滅孑孓、滅螺、滅鼠等，有“菜蟲藥”之稱。利用雷公藤浸提物加工成合適的劑型用于蔬菜、桑葉、茶葉以及其它農作物上，是一種植物源農藥，來源于自然界，與環境相容性好，并符合環保要求，具有良好的市場前景，目前也出現了幾篇這方面的專利。
CN1289540公開了一種雷公藤殺蟲劑及其制法，是將雷公藤根皮經過一定的加工過程，制成可濕性粉劑、乳油、水乳劑及微乳劑等劑型的雷公藤殺蟲劑，對菜青蟲、小菜蛾、斜紋夜蛾等害蟲有顯著療效。
CN1317248公開了一種綠色殺蟲靈，其主要成分包括雷公藤生藥提取物TWI、TWII和TWIII，TWI∶TWII∶TWIII的重量比為1∶(0.8～1.2)∶(0.8～1.2)。或者主要成分包含雷公藤生藥提取物TWI、TWII或TWIII。所述的制備方法為采用雷公藤生藥，滲漉提取、上硅膠柱層析洗脫，得提取物TWI。或雷公藤生藥滲漉提取，上硅膠柱層析，不同洗脫液洗脫，收集成分TWII和TWIII。
CN1337157公開了涉及雷公藤非水提取物在農藥制備方面的用途。將雷公藤提取物與農藥助劑混合制成的農藥制劑能夠迅速殺滅棉花、蔬菜、水稻、菜葉、花卉等植物上的害蟲，如菜青蟲、棉鈴蟲、小菜蛾、菜蚜、桃蚜、稻粉虱等。雷公藤提取物與阿維菌素、蘇云金芽孢桿菌等生物農藥或高效氯氰菊酯、滅多威等化學農藥復配具有明顯的相互增效作用。
以上公開的三份發明專利申請，都存在著如下不足(1)現有雷公藤提取物的制備都用根皮而沒用葉，與制備治療類風濕性關節炎的雷公藤浸膏產生了原料上的沖突，且得到的雷公藤提取物中的活性成分含量少；(2)工藝繁瑣，操作較為復雜，收率低，生產成本高；(3)要和化學農藥混配使用，沒有真正體現出生物農藥的價值。
經研究認為雷公藤中主要活性成分為雷公藤內酯醇，同時雷公藤內酯醇也是其主要的毒性成分。而且發現雷公藤不同部位的內酯醇含量，以葉最高，花次之，其次為根，葉中含量是根的2.2倍。但國內各廠家在利用雷公藤植物根部浸提用于治療類風濕性關節炎的雷公藤浸膏的同時，往往將其毒性較大的葉丟棄。而雷公藤根部一般要在雷公藤種植了3～5年后才有使用價值，時間越長其藥用價值越大。在這期間，為減少營養消耗，每年夏秋兩季都要對雷公藤葉進行修剪，冬季其則自行脫葉，而這些雷公藤葉沒有得到充分利用，造成了極大的材料浪費。
發明內容
本發明所要解決的技術問題和提出的技術任務是克服上述現有技術的缺陷，提供一種利用雷公藤葉來制備雷公藤提取物的方法，以降低生產成本，提高雷公藤提取物中活性成分的含量，達到雷公藤原料的充分利用，避免與醫用產生雷公藤原料上的沖突。
本發明的技術方案是這樣的一種雷公藤提取物的制備方法，其特征是步驟如下將雷公藤葉(干重)浸泡在有機溶劑中，所述的雷公藤葉與有機溶劑的質量體積比為1∶10～45，回流提取浸泡物，提取時間為5～48小時，提取溫度在50～110℃；對上步得到的提取物作進一步的后處理。通過此種簡單工藝的制備方法，將雷公藤葉變廢為寶，大大降低了生產成本，達到了雷公藤原料的充分利用，避免了與醫用產生原料上的沖突；由于雷公藤葉中的內酯醇含量是根的2.2倍，較大地提高了雷公藤提取物中內酯醇的含量，用此雷公藤提取物制備得到的生物農藥制劑，其生物活性高，殺蟲效果好，殺蟲譜廣泛。
所述的雷公藤提取物的制備方法，對提取物的后處理有以下三種處理方法①直接將提取物濃縮至膏狀物；②用氯仿萃取后濃縮至膏狀物；③先用中性氧化鋁吸附，接著用氯仿洗脫，再后濃縮至膏狀物，上述三種處理方法中的濃縮溫度在30～70℃。
所述的雷公藤提取物的制備方法，第二種處理方法的具體步驟如下先將提取液濃縮至其原來體積的1/5～1/2，再加入濃縮后提取液體積5～20倍量的氯仿(優選8～12倍)，充分攪拌，靜置分層，對氯仿層進行濃縮至膏狀物即可。
所述的雷公藤提取物的制備方法，第三種處理方法的具體步驟如下先將提取物濃縮至其原有體積的1/8～1/3，接著在濃縮液中加入25％～35％的中性氧化鋁，充分攪拌，吸附完成后過濾，用8～10倍過濾物體積的氯仿浸泡中性氧化鋁，濃縮氯仿至膏狀物。
所述的雷公藤提取物的制備方法，有機溶劑為乙醇、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、丁酮、甲苯、二甲苯中的任一種或至少兩種的組合。
所述的雷公藤提取物的制備方法，雷公藤葉與有機溶劑的質量體積比優選為1∶20～25，提取時間優選為10～20小時，濃縮溫度優選在45～60℃，濃縮真空度控制在-0.08～0.09Mpa。
本發明工藝簡單，利用以前被大量廢棄的雷公藤葉制備一種高效生物農藥的原料(即雷公藤提取物)，將雷公藤葉變廢為寶，大大降低了生產成本，達到了雷公藤原料的充分利用，避免了與醫用產生原料上的沖突；本發明較大地提高了雷公藤提取物中內酯醇的含量，用本發明雷公藤提取物制得的生物農藥制劑，其生物活性更高，殺蟲效果好，殺蟲譜廣泛。
下面結合實施例對本發明作進一步的說明。
具體實施例方式
通過常規的制劑方法就可將本發明制得的雷公藤提取物制成生物農藥制劑，無需再添加化學助劑，所述的生物農藥制劑中雷公藤提取物含量(w/w)控制在0.5～60％之間，其劑型包括乳劑(EC)、微膠囊劑(MC)、濃乳劑(EW)微乳劑(ME)、可濕性粉劑(WP)等。將各種劑型作用于各種害蟲進行殺蟲試驗，就可以得到殺蟲譜，針對不同害蟲采用不同劑型。
實施例1稱取雷公藤碎葉(干重)30g，加入750ml無水乙醇，78℃回流15hr后過濾，再將其提取液濃縮至膏狀物，得產品4.3g，用25ml無水乙醇轉移至錐形瓶內。該濃縮物制成乳油劑型，濃度為2.0％，進行殺蟲活性試驗，具體殺蟲效果見表2。
實施例2稱取雷公藤碎葉30g，加入750ml無水乙醇，82℃、回流5hr、過濾，濾渣中再加入750ml無水乙醇，回流5hr、過濾，合并濾液減壓濃縮至原來體積的一半，再用18倍量氯仿萃取后濃縮至膏狀物，得膏狀物3.9g，收率為13.0％，將此膏狀物制成微乳液，濃度為20％。進行殺蟲活性試驗。發現其可有效防治蚜蟲、小菜蛾、斜紋夜蛾的三齡幼蟲等害蟲，防效可達90％以上，具體殺蟲效果見表2。
實施例3稱取雷公藤碎葉30g，加入750ml無水乙醇，82℃下回流5hr、過濾，再將其提取液濃縮得4.5g膏狀物，加入400ml氯仿萃取，有褐色沉淀，去沉淀再將氯仿溶解液濃縮至干，用25ml無水乙醇轉移至錐形瓶內。該制劑稀釋至2400ml時，經過48hr后觀察，其對斜紋夜蛾的三齡幼蟲的致死率可達80％以上，見下表1，具體殺蟲效果見表2。
表1 實施例3作用于一些害蟲的生物活性防治對象試蟲數死亡數死亡率CK50 0 0蚜蟲 48 40 83.3％小菜蛾49 41 83.4％斜紋夜蛾 50 48 90.0％棉鈴蟲48 41 85.4％實施例4稱取20g雷公藤粉碎葉于索氏抽提器中，85℃回流14hr，開始時用400ml乙酸乙酯回流，將提取液中加入80g中性Al2O3進行濃縮，濃縮至干后，將吸附后的Al2O3裝入索氏抽提器中用400ml氯仿回流共28hr，再將得到的提取液濃縮至干，用25ml無水乙醇轉移至錐形瓶內。該制劑稀釋2000～2400倍，可防治粘蟲、斜紋夜蛾、玉米螟等害蟲，但效果相對差一些。具體殺蟲效果見表2。
實施例5稱取雷公藤碎葉30g，加入750ml75％乙醇，70℃回流5hr，將提取液濃縮至一半時，加入120g中性氧化鋁，繼續濃縮至干后，加入500ml氯仿，充分攪拌0.5hr，過濾掉氧化鋁，濾液濃縮至干，用25ml無水乙醇轉移至錐形瓶內。該制劑稀釋至2000mg/L，可防治斜紋夜蛾、二化螟、灰飛虱、高粱蚜、桃蚜等害蟲，效果較好，具體殺蟲效果見表2。
實施例6稱取雷公藤碎葉30g，加入750ml乙酸乙酯，80℃下回流5hr，將提取液濃縮至一半時，加入120g中性氧化鋁，繼續濃縮至干后，加入500ml氯仿，充分攪拌0.5hr，過濾掉氧化鋁，濾液濃縮至干，用25ml無水乙醇轉移至錐形瓶內。該制劑稀釋至2000mg/L，也可防治實施例5中所述的害蟲。但經比較，其效果優于實施例5，具體殺蟲效果見表2。
上述的實施例用于殺蟲試驗的生物有(1)防治水稻害蟲二化螟、灰飛虱、褐飛虱、黑尾葉蟬、稻苞蟲等；
(2)防治麥類害蟲麥二叉蚜、麥長管蚜、麥紅吸漿蟲等；(3)防治雜糧害蟲粘蟲、玉米螟、高粱蚜、甘薯麥蛾等；(4)防治棉花害蟲棉鈴蟲、棉蚜、棉葉蟬、棉盲蝽等；(5)防治蔬菜害蟲菜青蟲、小菜蛾、蚜蟲、溫室粉虱等；(6)防治果樹害蟲柑橘長卷蛾、柑橘鳳蝶、吸果夜蛾、桃蛀螟、桃蚜等；對害蟲的作用方式有胃毒作用、觸殺作用、拒食作用、熏蒸作用等。
殺蟲試驗的方法浸漬法，浸漬時間為5s，浸漬后放于透明玻璃盒中，50頭/盒，并于28℃，RH＝80％，光照14h/天的恒溫箱中培養。24h、48h時檢查其死亡情況；點滴法，點滴量0.5μL/頭，和浸漬法相同的條件下觀察其24hr、48hr時的死亡情況。
下表列出了雷公藤不同制劑作用于不同害蟲的生物活性情況，可以看出其生物活性較高，殺蟲譜比較廣泛。提取物制成制劑前用氯仿萃取后殺蟲效果最好，而將提取物用Al2O3吸附后再用氯仿洗脫濃縮液的殺蟲效果相對來說差一些。
表2.雷公藤制劑作用于不同害蟲的生物活性
A乳油濃度為2.0％B微乳液濃度為20％I直接將提取物濃縮至膏狀物，再用一定的無水乙醇轉移稀釋II將提取物用氯仿萃取后濃縮至膏狀物III將提取物用中性氧化鋁吸附后用氯仿洗脫后再濃縮至膏狀物
權利要求
1.一種雷公藤提取物的制備方法，其特征是步驟如下將雷公藤葉浸泡在有機溶劑中，所述的雷公藤葉與有機溶劑的質量體積比為1∶10～45，回流提取浸泡物，提取時間為5～48小時，提取溫度在50～110℃；對上步所得的提取物作進一步的后處理。
2.根據權利要求1所述的雷公藤提取物的制備方法，其特征是對提取物的后處理有以下三種處理方法①直接將提取物濃縮至膏狀物；②用氯仿萃取后濃縮至膏狀物；③先用中性氧化鋁吸附，接著用氯仿洗脫，再后濃縮至膏狀物，上述三種處理方法中的濃縮溫度在30～70℃。
3.根據權利要求2所述的雷公藤提取物的制備方法，其特征是所述第二種處理方法的具體步驟如下先將提取液濃縮至其原來體積的1/5～1/2，再加入濃縮后提取液體積5～20倍量的氯仿，充分攪拌，靜置分層，對氯仿層進行濃縮至膏狀物即可。
4.根據權利要求3所述的雷公藤提取物的制備方法，其特征是所述氯仿加入的倍數優選8～12。
5.根據權利要求2所述的雷公藤提取物的制備方法，其特征是所述第三種處理方法的具體步驟如下先將提取物濃縮至其原有體積的1/8～1/3，接著在濃縮液中加入25％～35％的中性氧化鋁，充分攪拌，吸附完成后過濾，用8～10倍過濾物體積的氯仿浸泡中性氧化鋁，濃縮氯仿至膏狀物。
6.根據權利要求1所述的雷公藤提取物的制備方法，其特征是所述的有機溶劑為乙醇、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、丁酮、甲苯、二甲苯中的任一種或至少兩種的組合。
7.根據權利要求1所述的雷公藤提取物的制備方法，其特征是所述的雷公藤葉與有機溶劑的質量體積比優選為1∶20～25，提取時間優選為10～20小時，濃縮溫度優選在45～60℃，濃縮真空度控制在-0.08～0.09Mpa。
全文摘要
本發明是一種雷公藤提取物的制備方法。現有方法的原料都用根皮，與醫用產生了原料上的沖突，且得到的雷公藤提取物中的活性成分含量少，收率低，生產成本高。本發明的制備步驟如下將雷公藤葉浸泡在有機溶劑中，所述的雷公藤葉與有機溶劑的質量體積比為1∶10～45，回流提取浸泡物，提取時間為5～48小時，提取溫度在50～110℃；對上步所得的提取物作進一步的后處理，得到膏狀物。本發明用以前被大量廢棄的雷公藤葉制備雷公藤提取物，變廢為寶，避免了與醫用產生原料上的沖突，大大降低了生產成本；利用本發明制得的生物農藥制劑，其生物話性更高，殺蟲效果好，殺蟲譜廣泛。
文檔編號A01N65/14GK1656899SQ20041001647
公開日2005年8月24日 申請日期2004年2月20日 優先權日2004年2月20日
發明者許新德, 金一平, 葉雙明, 張定豐 申請人:浙江醫藥股份有限公司新昌制藥廠