白靈菇的栽培方法及含有白靈菇的疾病預(yù)防改善劑的制作方法

專利名稱：白靈菇的栽培方法及含有白靈菇的疾病預(yù)防改善劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及白靈菇(Pleurotus nebrodensis)的栽培方法和含有白靈菇的疾病預(yù)防改善劑，特別涉及其收獲量的改善。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，由于飲食生活的多樣性和美食的盛行，通常在若干年后有肥胖化的傾向。另外，由于進(jìn)入超高齡化社會(huì)和緊張化社會(huì)，預(yù)測(cè)與年齡增加和生活習(xí)慣有關(guān)的疾病增加了。特別是有由于運(yùn)動(dòng)不足和肥胖增加引起高血壓癥的傾向。而且，已知高血壓癥易伴隨糖尿病或耐糖能障礙，或高脂血癥、脂質(zhì)代謝異常、肥胖等的成年人病。
過(guò)去，對(duì)高血壓癥的治療，使用Ca拮抗劑、β受體激動(dòng)劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶阻遏劑的方法是有效的方法，被廣泛使用。但是，長(zhǎng)期使用這些藥物會(huì)產(chǎn)生很多副作用。另外，肥胖的改善方法主要是運(yùn)動(dòng)療法和飲食療法，但是堅(jiān)持這些方法是困難的。因此，對(duì)產(chǎn)生的副作用小、持續(xù)攝取可能的自然食品或健康食品(包括功能性食品)的關(guān)心正日益提高。
另一方面，由于飲食文化的多樣化和對(duì)健康食品的認(rèn)識(shí)所產(chǎn)生的旺盛需要，食用真菌類的生產(chǎn)量也大增。因此，對(duì)各真菌類的生產(chǎn)技術(shù)也有發(fā)展。現(xiàn)在，除具有特殊生態(tài)的一部分真菌外，可進(jìn)行香菇屬、火菇屬、ブナシメジ、奇果菌屬、側(cè)耳屬、擔(dān)子菌屬、土霉屬等的任何真菌的人工栽培。
食用真菌的栽培方法，有香蕈等的原木栽培法，如火菇屬、側(cè)耳屬等那樣，以鋸末、米糠、麥糠、水等的混合培養(yǎng)基的容器菌床栽培方法。
容器栽培，由于培養(yǎng)基的組成對(duì)其生育有大的影響，為增收優(yōu)良的真菌，以前有各種各樣的材料作為培養(yǎng)基使用。
例如，將紅藻類粉末添加到培養(yǎng)基中的方法(特開(kāi)平06-113670)和蛋殼粉碎物加入培養(yǎng)基的方法(特開(kāi)平06253677)等。
但是，在以前的白靈菇栽培方法中，不能夠獲得充分的收獲量，迫切希望有提高收獲量的栽培方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，其目的是提供在短期內(nèi)可收獲充分量的子實(shí)體的白靈菇的栽培方法，及提供含有白靈菇的疾病預(yù)防改善劑。
為達(dá)到上述的目的，本發(fā)明人等進(jìn)行深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過(guò)施加電脈沖和/或溫度變化，能夠促進(jìn)白靈菇的子實(shí)體的產(chǎn)生，特別是發(fā)現(xiàn)了白靈菇具有優(yōu)良的疾病預(yù)防改善效果，從而完成了本發(fā)明。
即本發(fā)明的第1主題是提供在培養(yǎng)基中接種白靈菇種菌，使培養(yǎng)的菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)蔓延，其后產(chǎn)生子實(shí)體的白靈菇的栽培方法，其特征是在上述培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)前期維持的溫度在培養(yǎng)中期一旦下降，使溫度在培養(yǎng)后期急劇上升。
另外，本發(fā)明提供在培養(yǎng)基中接種白靈菇種菌，使培養(yǎng)的菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)蔓延，其后產(chǎn)生子實(shí)體的白靈菇的栽培方法，其特征是在上述產(chǎn)生時(shí)，維持產(chǎn)生前期低溫，同時(shí)提高產(chǎn)生后期的溫度。
另外，本發(fā)明提供在培養(yǎng)基中接種白靈菇種菌，使培養(yǎng)的菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)蔓延，其后產(chǎn)生子實(shí)體的白靈菇的栽培方法，其特征是在上述培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)前期維持的溫度在培養(yǎng)中期一旦下降，使溫度在培養(yǎng)后期急劇上升，在上述產(chǎn)生時(shí)，維持產(chǎn)生前期低溫，同時(shí)提高產(chǎn)生后期的溫度。
在上述栽培方法中，培養(yǎng)結(jié)束后施加5～60kV的電脈沖是合適的。
在上述培養(yǎng)方法中，上述培養(yǎng)前期的溫度是16～24℃，培養(yǎng)中期的溫度是6～14℃，培養(yǎng)后期的溫度是26～34℃是合適的。
在上述栽培方法中，上述培養(yǎng)期間，培養(yǎng)前期為35～45日，培養(yǎng)中期為5～15日，培養(yǎng)后期為5～15日是合適的。
在上述栽培方法中，培養(yǎng)時(shí)維持濕度為65～75％是合適的。
在上述栽培方法中，上述產(chǎn)生前期溫度是-5到+3℃，產(chǎn)生后期的溫度是14～22℃是合適的。
在上述栽培方法中，在產(chǎn)生期間上述溫度分2階段上升是合適的。
在上述栽培方法中，在上述產(chǎn)生時(shí)溫度上升的同時(shí)，維持濕度從75～85％的狀態(tài)上升到90～100％是合適的。
在上述栽培方法中，在上述產(chǎn)生時(shí)溫度上升的同時(shí)，提高二氧化碳的濃度和/或照明的光度是合適的。
在上述栽培方法中，在上述產(chǎn)生時(shí)在溫度上升前除去死滅菌層是合適的。
本發(fā)明的第2主題，是以包括步驟(a)-(d)為特征的白靈菇的栽培方法(a)在培養(yǎng)基中接種白靈菇種菌的步驟；(b)在步驟(a)后，在20～30℃的溫度條件下進(jìn)行培養(yǎng)，菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)蔓延的步驟；(c)在步驟(b)后，施加5～60kV的電脈沖的步驟；(d)在步驟(c)后，在10～20℃的溫度條件下產(chǎn)生子實(shí)體的步驟。
在前述的栽培方法中，在(d)步驟中，溫度一旦下降到-1～2℃后，上升到10～20℃是合適的。
本發(fā)明的第3主題是以白靈菇為主要成分的疾病預(yù)防改善劑。
在前述的疾病預(yù)防改善劑中，優(yōu)選含白靈菇干燥粉末和/或熱水提取物。
對(duì)于前述的疾病預(yù)防改善劑，適宜的疾病是選自高血壓癥、高脂血癥、肥胖中的1種或2種以上的疾病。
附圖的簡(jiǎn)單說(shuō)明


圖1表示本發(fā)明的被檢試藥制備方法的流程圖。
實(shí)施發(fā)明的最佳方案下面，詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。
首先，說(shuō)明本發(fā)明的白靈菇栽培方法。
(1)培養(yǎng)基的制備作為本發(fā)明中培養(yǎng)基的原料，在不影響本發(fā)明效果的前題下沒(méi)有特別限制，可以使用以前使用的培養(yǎng)基。例如，使用向米糠、麥糠等中加入水來(lái)調(diào)制的培養(yǎng)基。另外，也可混合菌絲活性劑等。
充填培養(yǎng)基的容器，在不影響本發(fā)明的效果的前題下沒(méi)有特別限制，可以充填在適當(dāng)?shù)娜萜髦?。通常使用在上方有開(kāi)口的瓶形容器(培養(yǎng)瓶)或袋狀容器(培養(yǎng)袋)。
(2)培養(yǎng)基殺菌通過(guò)蒸氣等的殺菌方法對(duì)所使用的培養(yǎng)基進(jìn)行殺菌。殺菌條件與以前的相同，沒(méi)有特別限制，例如在100℃殺菌4小時(shí)。
(3)種菌接種此后，冷卻到20℃，在充填培養(yǎng)基的容器的大致中央開(kāi)一適當(dāng)?shù)目祝臃N白靈菇的種菌。對(duì)于種菌的接種，在不影響本發(fā)明的效果的前題下沒(méi)有特別限制，通常按通用的方法進(jìn)行。孔的深度沒(méi)有特別限制，但是，從菌周的促進(jìn)考慮，優(yōu)選直到容器底部的深度。
(4)培養(yǎng)種菌接種后，培養(yǎng)的菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)蔓延。培養(yǎng)時(shí)，優(yōu)選室溫20～30℃，濕度為70～100％，培養(yǎng)直到菌絲充分蔓延。
培養(yǎng)條件在上述范圍內(nèi)沒(méi)有特別限制，但是為加速培養(yǎng)，在培養(yǎng)中期室溫一旦降低，優(yōu)選再提高溫度。
具體地說(shuō)，培養(yǎng)前期的室溫為20℃左右(16～24℃)，培養(yǎng)中期一旦降低到10℃左右(6～14℃)，優(yōu)選培養(yǎng)后期提高溫度為30℃左右(26～34)℃。
培養(yǎng)前期的時(shí)間優(yōu)選為40天，培養(yǎng)中期的時(shí)間優(yōu)選為10天，培養(yǎng)后期的時(shí)間優(yōu)選為10天。優(yōu)選濕度維持在70％左右(65～75％)(5)子實(shí)體的產(chǎn)生菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)蔓延后，通過(guò)施加電脈沖，促進(jìn)子實(shí)體早產(chǎn)生，提高收獲量。電脈沖為5～60kV，優(yōu)選20～30kV，更優(yōu)選20kV。小于5kV，不能充分發(fā)揮本發(fā)明的效果，相反超過(guò)60kV，有時(shí)難以產(chǎn)生子實(shí)體。施加電脈沖的時(shí)間，優(yōu)選是在培養(yǎng)結(jié)束后，與進(jìn)入子實(shí)體產(chǎn)生階段同時(shí)。
為了產(chǎn)生子實(shí)體，室溫降到比培養(yǎng)時(shí)低，優(yōu)選室溫10～20℃，濕度為80～100％。
子實(shí)體產(chǎn)生的溫度、濕度條件是上述的條件，但是為了使子實(shí)體提前產(chǎn)生，增加收獲量，室溫保持在低溫下，在途中升高溫度是合適的。具體地說(shuō)，在-1℃左右(-5～3℃)的狀態(tài)維持5天低溫刺激菌絲后，升溫至5℃左右(1～9℃)保持5日，其后升溫至18℃左右(14～22℃)并優(yōu)選維持在該溫度。這個(gè)期間由于菌絲的狀態(tài)適宜調(diào)整，而且溫度上升的同時(shí)，濕度優(yōu)選從80％(75～85％)提高到95％左右(90～100％)，另外優(yōu)選此時(shí)除去培養(yǎng)基表面的死滅菌層，深度可以是15mm。
而且，特別優(yōu)選與溫度上升大致同時(shí)，提高二氧化碳的濃度和/或照明的光度。
具體地說(shuō)，優(yōu)選二氧化碳的濃度從400ppm左右上升到2000ppm左右，照明光度從100勒克司左右上升到400勒克司左右。照明燈的顏色優(yōu)選藍(lán)色。
使用本發(fā)明的白靈菇，可制造疾病預(yù)防改善劑。本發(fā)明的疾病預(yù)防改善劑經(jīng)口服用，適用對(duì)疾病特別是高血壓癥、高脂血癥、肥胖的預(yù)防和改善。作為疾病預(yù)防改善劑使用時(shí)的攝取量，根據(jù)癥狀等的不同沒(méi)有特別限制，但是，成年人每日攝取白靈菇干燥粉1～15克，特別是6～9克是十分有效果的。
白靈菇能夠以干燥粉末的提取物服用。作為提取液，優(yōu)選用白靈菇子實(shí)體干燥粉末的熱水提取物。另外，提取物即可以是提取液，也可以是提取液的干燥物。
本發(fā)明的疾病預(yù)防改善劑，通常作為內(nèi)服藥服用。
作為內(nèi)服藥時(shí)，按通常的方法可制成散劑、錠劑、膠囊劑、顆粒劑、茶劑、乳劑、浸膏劑、液劑、糖漿等。而且，制劑化時(shí)，根據(jù)需要可使用制劑化載劑，例如賦形劑、結(jié)合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、著色劑、矯味矯臭劑、賦香劑等。另外，根據(jù)需要可使用適當(dāng)?shù)耐繉觿┑冗M(jìn)行包衣。
下面列舉實(shí)施例更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，但是本發(fā)明不受這些實(shí)施例的限制。
使用鋸末150重量份、麥糠100重量份、玉米粗粉10重量份和菌絲活性劑15重量份構(gòu)成的培養(yǎng)基，調(diào)整含水率為約65％。
將所使用的培養(yǎng)基平均約650克裝滿聚丙烯制的栽培瓶(口徑為52毫米、容積850毫升)加蓋。
在培養(yǎng)基的中央設(shè)置直徑為約10毫米的接種孔直到底部，在121℃通過(guò)蒸氣殺菌器殺菌4小時(shí)，殺菌后冷卻直到培養(yǎng)基的溫度在20℃以下，接種15克白靈菇種菌。
將接種種菌的瓶置于設(shè)定室溫為21℃/相對(duì)濕度為70％的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)40日，然后放置在室溫10℃/相對(duì)濕度為70％的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)10日，再于室溫30℃/相對(duì)濕度為70％的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)10日，菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)充分蔓延后，菌絲成熟。
在室溫-1℃/相對(duì)濕度80％給予數(shù)日低溫刺激，維持室溫5℃/相對(duì)濕度80％7日，此時(shí)除去直徑35mm，深15mm的菌床表面(菌搔)，然后維持室溫18℃/相對(duì)濕度95％，將二氧化碳濃度從400ppm提高到2000ppm，同時(shí)使藍(lán)色熒光燈的光度從100勒克司提高到400勒克司，使產(chǎn)生子實(shí)體。結(jié)果從除去菌搔21日起可以在每個(gè)培養(yǎng)瓶采取210g子實(shí)體。
而且在培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，施加5～60kV，特別是15～30kV的電脈沖，在短期間內(nèi)可以收獲更多的子實(shí)體，在給予溫度變化的同時(shí)施加電脈沖，確認(rèn)可以得到更好的效果。
電脈沖的影響
1.使用鋸末150重量份、麥糠100重量份、玉米粗粉10重量份和菌絲活性劑15重量份構(gòu)成的培養(yǎng)基，調(diào)整含水率為約65％。將所使用的培養(yǎng)基平均約650克裝滿聚丙烯制的栽培瓶(口徑為52毫米、容積850毫升)加蓋。
2.在121℃通過(guò)蒸氣殺菌器殺菌4小時(shí)，冷卻直到培養(yǎng)基的溫度在20℃以下。
3.在培養(yǎng)基的中央設(shè)置直徑為約20毫米的接種孔直到底部，接種15克白靈菇種菌。
4.將接種種菌的瓶置于設(shè)定室溫為25℃/相對(duì)濕度為70％的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)60日，菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)充分蔓延后，菌絲成熟。
5.對(duì)菌培養(yǎng)瓶施加規(guī)定電壓的電脈沖。
6.移入設(shè)定在10℃/相對(duì)濕度為90％的生育室內(nèi)，隔日觀察子實(shí)體的產(chǎn)生。
對(duì)各種電壓使用100個(gè)培養(yǎng)瓶。數(shù)日后產(chǎn)生子實(shí)體的培養(yǎng)瓶數(shù)及平均收獲量示于表1。而且平均收獲量是用每1培養(yǎng)瓶在各種電壓下產(chǎn)生的子實(shí)體的孢子收獲量的平均值表示。另外，日數(shù)是從施加電脈沖起計(jì)算的日數(shù)(從培養(yǎng)室移入生育室的日數(shù))。
表1

從表1確認(rèn)，如果施加電脈沖，子實(shí)體的產(chǎn)生日提前，收獲量增加。對(duì)于子實(shí)體的產(chǎn)生日，電壓越高越早，用20～30kV時(shí)從14日起，用10～15kV時(shí)從16日起，用5kV時(shí)從18日起產(chǎn)生子實(shí)體，用15kV直到26日，用20kV直至24日，用25kV直至22日，用30kV直到20日全部培養(yǎng)瓶都產(chǎn)生子實(shí)體。
另外收獲量，在20kV最多，是不施加20～30kV電脈沖時(shí)的收獲量的2倍以上。而且，施加高電壓進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，確認(rèn)在60kV時(shí)，子實(shí)體產(chǎn)生日提前，收獲量也增加。
因此，為了在短期間內(nèi)大量收獲白靈菇，在培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，施加5～60kV，特別是施加15～30kV的電脈沖，從收獲量的觀點(diǎn)看，確認(rèn)為20kV最適宜。
而且，如果采用如下的溫度條件，可在更短的期間內(nèi)收獲更多的子實(shí)體。因此，確認(rèn)優(yōu)選施加電脈沖和低溫刺激。
溫度條件在室溫-1℃/相對(duì)濕度90％保持5日、室溫上升5℃保持5日，此后，室溫上升到18℃。
1.高血壓預(yù)防改善劑(1)試驗(yàn)大鼠的飼育和被試驗(yàn)藥的施用方法I預(yù)備飼育(6-7周齡)從日本チヤ一ルスリバ一(株)購(gòu)入的6周齡的雄性自然發(fā)癥高血壓大鼠(SHR)和正常血壓的ウイスタ一京都大鼠(WKY)，在調(diào)節(jié)室溫22±1℃、濕度60±10％的飼育室中，用白色螢光燈進(jìn)行每日12小時(shí)(7～19時(shí)照明期)的光調(diào)節(jié)、自由攝取飼料和自來(lái)水1周，進(jìn)行預(yù)備飼育。
預(yù)備飼育后，測(cè)定各個(gè)體的體重和血壓，1組8只，血壓值的平均值大致相等的SHR大鼠分在A～H組，WKY大鼠分在I～J組。
II白靈菇提取物的調(diào)制方法將白靈菇的子實(shí)體的干燥物進(jìn)行粉碎，得到16目篩篩分的粉末。另外，將該粉末3、6、9、12克分別在600毫升熱水(80℃)中提取2小時(shí)，得到熱水提取液。下面分別取出3克提取物、6克提取物、9克提取物、12克提取物的提取液。
III被驗(yàn)藥施用方法(8～20周齡)按下述的要領(lǐng)，對(duì)各組的大鼠進(jìn)行投藥，從8周齡特別是12周齡直到20周齡飼育。各組自由攝取飼料和自來(lái)水。飼育室的環(huán)境，溫度22±1℃、濕度60±10％，用白色螢光燈1日12小時(shí)采光(7～19時(shí)照明期)。
各提取物全部經(jīng)口施用，每日午前10時(shí)進(jìn)行，提取物施用后，自由攝取滅菌水。
A組SHR大鼠(沒(méi)有施用)
B組SHR大鼠(施用3克提取物)...每日每公斤體重施用上述3克提取物的提取液10毫升。
C組SHR大鼠(施用6克提取物)...每日每公斤體重施用上述6克提取物的提取液10毫升。
D組SHR大鼠(施用9克提取物)...每日每公斤體重施用上述9克提取物的提取液10毫升。
E組SHR大鼠(施用12克提取物)...每日每公斤體重施用上述12克提取物的提取液10毫升。
F組SHR大鼠(施用3％干燥粉末)...自由攝取飼料與3％的白靈菇干燥粉末的混合物。
G組SHR大鼠(施用6％干燥粉末)...自由攝取含有3％的白靈菇干燥粉末的飼料混合物。
H組SHR大鼠(施用9％干燥粉末)...自由攝取含有9％的白靈菇干燥粉末的飼料混合物。
I組WKY大鼠(沒(méi)有施用)J組WKY大鼠(6％干燥粉末)自由攝取含有6％的白靈菇干燥粉末的飼料混合物。
(2)結(jié)果I血壓檢查血壓檢查每2周1次，在被驗(yàn)藥施用前進(jìn)行，求出各組大鼠的平均值。
表2

自然發(fā)癥的高血壓大鼠SHR大鼠(A～H組)與WKY大鼠(I～J組)進(jìn)行比較，血壓值升高。但是，在SHR大鼠中，與沒(méi)有施用組(A組)進(jìn)行比較，6、9、12克施用組(C～E組)；6、9％組(G，H組)從14周齡起確認(rèn)為血壓的上升被抑制。而且，驚奇的是，6％組(G組)從14周齡起，9、12克施用組(D，E組)和9％組(H組)從16周齡起、6克施用組(C組)從18周齡起，確認(rèn)血壓下降。
血壓上升抑制和血壓下降的作用，有用量越多的組越高的傾向。12克施用組(E組)中的血壓下降作用沒(méi)有9克施用組(D組)的高，認(rèn)為是伴隨藥效用量發(fā)現(xiàn)生物曲線。另外，本來(lái)正常血壓的WKY大鼠中沒(méi)有引起血壓下降(異常)。
如上所述，本發(fā)明的白靈菇高血壓癥的預(yù)防改善效果與用量有依存關(guān)系。另外，在正常血壓的情況下，由于沒(méi)有顯示出血壓的下降作用，因此不象以前的高血壓治療藥那樣簡(jiǎn)單地降低血壓，而且具有使血壓接近正常值的效果，可更安全地服用。再者，即使是干燥粉末，也具有其提取物那樣的效果。
II血液檢查實(shí)驗(yàn)最終日的前一日全部大鼠禁食，第2天進(jìn)行深度麻醉(戊巴比妥，45毫克/公斤，i.p.)，從左心室用20G采血針進(jìn)行可能的有限采血。
使用采取的血液，進(jìn)行下述項(xiàng)目的生化檢查(自動(dòng)化學(xué)分析裝置自動(dòng)實(shí)驗(yàn)放射免疫檢驗(yàn)法)求出平均值。結(jié)果示于表3表3

SHR大鼠(A～H組)與WKY大鼠(I～J組)進(jìn)行比較，LDL膽固醇、β脂蛋白、中性脂肪、白蛋白、尿氮、肌酸酐、尿酸、血管緊張素的值升高，總膽固醇、HDL膽固醇、總蛋白、A/G比、白血球數(shù)的值降低。但是，SHR大鼠中，與沒(méi)有施用組(A組)的進(jìn)行比較，確認(rèn)施用組(B～H組)的各項(xiàng)數(shù)據(jù)顯著改善。
血管緊張素血管緊張素是對(duì)肝臟產(chǎn)生的腎素基質(zhì)，通過(guò)腎線球體分泌的腎素作用生成的活性肽。高值表示的疾病，可列舉腎血管性高血壓癥。惡性高血壓癥等。因此，血管緊張素值被用作高血壓癥的指標(biāo)。
與A組比較，在B～H組中血管緊張素下降，比較接近正常的I組值，特別是B～E、G、H組中幾乎和I組值相等。即使在這種血管緊張素值情況下，也確認(rèn)了高血壓預(yù)防改善效果。
膽固醇膽固醇是構(gòu)成生物細(xì)胞膜等的必須成分，分為對(duì)生物有益的膽固醇(HDL)和對(duì)生物無(wú)益的膽固醇(LDL)。LDL促進(jìn)動(dòng)脈硬化，HDL起除去附著在血管壁上的LDL的作用。因此，通過(guò)測(cè)定這些膽固醇值，可推測(cè)脂質(zhì)代謝異常的疾病。
與A組比較，發(fā)現(xiàn)在B～H組中，HDL上升和LDL下降，接近I組值，特別是與D～E、H組的值與I組幾乎相等。另外，總膽固醇值也與正常的I組的值接近。因此，確認(rèn)伴隨高血壓預(yù)防改善效果，具有脂質(zhì)代謝異常的預(yù)防改善效果。
β脂蛋白、中性脂肪β脂蛋白的主要機(jī)能是從肝臟向各臟器運(yùn)送膽固醇。因此β脂蛋白值作為脂質(zhì)代謝異常疾病的指標(biāo)。
與A組進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)在B～H組中β脂蛋白值的下降與用量之間有依存關(guān)系，接近正常值。
而且，與A組比較，在B～H組中，也發(fā)現(xiàn)中性脂肪的下降與用量之間的依存關(guān)系。因此，通過(guò)β脂蛋白、中性脂肪值可確認(rèn)脂質(zhì)代謝異常的預(yù)防改善。
尿素氮、肌酸酐、尿酸尿素氮、肌酸酐、尿酸的測(cè)定，用作肝、腎機(jī)能的指標(biāo)。
與A組上比較，在D、E、G、H組中，尿素氮、肌酸酐、尿酸值下降，接近正常的I組值。因此，確認(rèn)伴隨高血壓預(yù)防改善效果，也具有肝、腎機(jī)能的改善效果。
總蛋白、白蛋白、A/G比、白血球數(shù)另外，與A組進(jìn)行比較，在B～H組中發(fā)現(xiàn)總蛋白、A/G比、白血球數(shù)的上升和白蛋白值的下降與用量的依存關(guān)系，接近正常的I組值。
如上所述，通過(guò)白靈菇的施用，確認(rèn)伴隨高血壓預(yù)防改善作用，發(fā)揮了脂質(zhì)代謝異常的改善效果、肝、腎機(jī)能的改善效果。另外，在正常的大鼠中，通過(guò)施用，這些值沒(méi)有顯示出令人注目的變化(異常)，因此安全性高。
2.高脂血癥預(yù)防改善劑、肥胖預(yù)防改善劑Zucker大鼠遺傳形式采取常染色體性的單純劣性遺傳樣式，呈現(xiàn)僅保持人病因遺傳子(fa遺傳子)的個(gè)體(fa/fa)的肥胖(Zucker肥胖大鼠(ZUC)-fa/fa)，不呈現(xiàn)雜接合體(fa/+)和野生型(+/+)肥胖(Zucker-瘦大鼠(ZUC)-瘦)。Zucker肥胖大鼠，比通過(guò)恰好生后4周齡的體重增加及外觀確認(rèn)肥胖狀態(tài)，恰好直到10周齡急速肥胖，此后慢慢肥胖。而且已知顯示高脂血癥、高胰島素血癥、高凝血血癥和耐糖性的異常。使用這種Zucker瘦大鼠和Zucker-肥胖大鼠進(jìn)行比較，進(jìn)行高脂血癥預(yù)防改善效果和肥胖預(yù)防改善效果的試驗(yàn)。
(1)試驗(yàn)大鼠的飼育和被試藥的施用方法I預(yù)備飼育(5～6周齡)從日本チヤ一ルスリバ一(株)購(gòu)入的5周齡的雄性Zucker-肥胖大鼠和雌性Zucker-瘦大鼠，在調(diào)節(jié)室溫22±1℃、濕度為60±10％的飼育室中，用白色螢光燈進(jìn)行1日12小時(shí)(7～19時(shí)照明期)有光調(diào)節(jié)，自由地?cái)z取飼料和自來(lái)水預(yù)備飼育1周。
預(yù)備飼育后，進(jìn)行各個(gè)體的體重測(cè)定和糖負(fù)荷試驗(yàn)，分類成1組5只，體重的平均值基本相同的Zucker-肥胖大鼠為K-O組和Zucker-瘦大鼠為P-Q組。
II白靈菇提取物的調(diào)制方法與前述的相同。
III被驗(yàn)藥施用方法(6～16周齡)按下述的要領(lǐng)，對(duì)各組大鼠進(jìn)行被驗(yàn)藥施用，飼育10周，直到16周齡。各組自由地?cái)z取飼料和自來(lái)水。飼育室的環(huán)境，溫度22±1℃、濕度為60±10％的飼育室中，用白色螢光燈進(jìn)行1日12小時(shí)采光(7～19時(shí)照明期)。
各被驗(yàn)藥全部經(jīng)口施用，每日午前10時(shí)進(jìn)行，施用后自由地?cái)z取滅菌水。
K組Zucker-肥胖大鼠(沒(méi)有施用)
L組Zucker-肥胖大鼠(施用3克提取物)...每日每公斤體重施用前述3克提取液10毫升。
M組Zucker-肥胖大鼠(施用6克提取物)...每日每公斤體重施用前述6克提取液10毫升。
N組Zucker-肥胖大鼠(施用9克提取物)...每日每公斤體重施用前述9克提取液10毫升。
O組Zucker-肥胖大鼠(施用12克提取物)...每日每公斤體重施用前述12克提取液10毫升。
P組Zucker-瘦大鼠(沒(méi)有施用)Q組Zucker-瘦大鼠(施用9克提取物)...每日每公斤體重施用前述9克提取液10毫升。
(2)結(jié)果I體重變化體重測(cè)定每周1次，在被驗(yàn)藥施用前進(jìn)行，求出各組的平均值。結(jié)果示于表4。
表4

Zucker-肥胖大鼠(K～O組)與Zucker-瘦大鼠(P～Q組)進(jìn)行比較，體重急劇增加。但是，在Zucker-肥胖大鼠中，與沒(méi)有施用組相比，在施用組(L～O組)中，發(fā)現(xiàn)從10周齡體重的增加被抑制。體重增加的抑制效果，用量多的組效果越高。
另外，即使是正常體重的Zucker-瘦大鼠，也確認(rèn)在正常的范圍內(nèi)的體重增加的抑制。
如上所述，對(duì)于本發(fā)明的白靈菇，發(fā)現(xiàn)了肥胖的抑制效果與用量的依存關(guān)系，對(duì)于正常的情況，也有適度的脂肪沉積的抑制效果。
II血液檢查在實(shí)驗(yàn)結(jié)束日的前一天全部大鼠禁食，第2天進(jìn)行深度麻醉(戊巴比妥，45毫克/公斤，i.p.)，從左心室用20G采血針進(jìn)行可能的有限采血。
使用采取的血液，進(jìn)行下述項(xiàng)目的生化檢查(自動(dòng)化學(xué)分析裝置自動(dòng)實(shí)驗(yàn)放射免疫檢驗(yàn)法)求出平均值。結(jié)果示于表5。
表5

從表5可知，Zucker-肥胖大鼠(K～O組)與Zucker-瘦大鼠(P～Q組)進(jìn)行比較，總膽固醇、游離膽固醇、β脂蛋白、中性脂防、磷脂、總脂質(zhì)、尿素氮、AST(GOT)、AST(GPT)胰島素值升高，HDL膽固醇、游離脂肪酸、肌酸酐、尿酸的值降低。但是，在Zucker-肥胖大鼠中，與沒(méi)有施用的組(K組)進(jìn)行比較，施用組(L～O組)的各項(xiàng)目中，確認(rèn)具有顯著的預(yù)防改善效果。
中性脂肪、游離脂肪酸、磷脂、總脂質(zhì)與K組比較，在L～O組中，發(fā)現(xiàn)中性脂肪、磷脂、總脂質(zhì)下降，游離酸上升的傾向。游離脂肪酸由于大部分沉積在脂肪組織的中性脂肪被分解，在血液中放出，因此在心肌、骨格肌肉、腎等主要臟器燃燒，在末梢組織中作為能源利用，其結(jié)果，顯示出改善肥胖的作用。另外，與中性脂肪、總脂質(zhì)顯著下降相比，作為細(xì)胞膜的構(gòu)成的重要的磷脂下降少，在正常的P組值以下。另外，上述的作用，即使在正常的大鼠中，也確認(rèn)在正常的范圍內(nèi)。如上所述，確認(rèn)對(duì)高脂血癥、肥胖的預(yù)防改善作用。
膽固醇如上所述的膽固醇值，作為脂質(zhì)代謝異常的指標(biāo)。
與K組相比，在L～O組中，對(duì)生物有益的膽固醇(HDL)上升，總膽固醇、游離膽固醇與用量之間呈下降的傾向。如上所述，由膽固醇值可以確認(rèn)為脂質(zhì)代謝的改善效果。
β脂蛋白如上所述，β脂蛋白值作為脂質(zhì)代謝異常疾病的指標(biāo)。
與K組相比，在L～O組中，β脂蛋白值與用量之間呈下降的依存關(guān)系，接近正常的P組值。因此，β脂蛋白值被確認(rèn)為是脂質(zhì)代謝改善的效果。
胰島素胰島素是胰臟的β細(xì)胞分泌的荷爾蒙，通過(guò)促進(jìn)肌肉、脂肪組織中的葡萄糖的攝入和抑制肝臟中的糖釋放而降低血糖。另外，與糖的積累、脂肪的積累、酮體下降、蛋白質(zhì)合成等的有關(guān)。因此，胰島素的測(cè)定作為糖代謝異常的指標(biāo)。
與K組相比，在L～O組中發(fā)現(xiàn)胰島素的下降與用量的依存關(guān)系，接近正常的P組值。因此，確認(rèn)伴隨肥胖預(yù)防改善效果，也改善糖代謝。
尿素氮、肌酸酐、尿酸、AST尿素氮、肌酸酐、尿酸、AST用作肝、腎機(jī)能的指標(biāo)。
與K組相比，在L～O組中，發(fā)現(xiàn)尿素氮、AST的下降和肌酸酐、尿酸值上升的傾向與用量之間的依存關(guān)系，在O組中，幾乎與正常的P組的值相同。因此，確認(rèn)伴隨肥胖預(yù)防改善效果，也改善作肝、腎機(jī)能。
另外，通過(guò)施用提取液，本來(lái)正常的總蛋白、白蛋白、A/G比等沒(méi)有出現(xiàn)異常。
如上所述，通過(guò)白靈菇的施用，確認(rèn)發(fā)揮高脂血癥的預(yù)防改善效果、肥胖的預(yù)防改善效果和與此相伴隨的脂質(zhì)代謝異常的改善效果、糖代謝的改善效果、肝、腎機(jī)能的改善效果。
3.人臨床檢查下面，說(shuō)明本發(fā)明的疾病預(yù)防改善劑對(duì)人體臨床檢查。
被檢試藥的調(diào)制(
圖1)將白靈菇100克干燥粉末和1升滅菌水加入三角瓶中，在95℃的水浴中提取1小時(shí)后，冷卻至室溫。通過(guò)減壓過(guò)濾分離得到第1濾液和殘?jiān)?。向殘?jiān)尤?00毫升滅菌水，在95℃的水浴中提取1小時(shí)后，冷卻至室溫。通過(guò)減壓過(guò)濾分離得到第2濾液和殘?jiān)?。將?濾液與第2濾液混合，于60℃減壓濃縮。而且，在95℃殺菌10分鐘后，于60℃濃縮成50％固形物。向該固形物添加50％賦形劑，加熱溶解，凍冷干燥使其粉末化。60目篩篩分，通過(guò)擠出造粒法造粒。
33歲、42歲、50歲的三個(gè)人男性每日6克服用通過(guò)上述方法制備的被檢試藥，進(jìn)行服用前、服用1個(gè)月、服用3個(gè)月、服用6個(gè)月的血液檢查。結(jié)果示于表6。
表6

正常值總膽固醇120～220mg/dl、HDL膽固醇41～84mg/dl、中性脂肪30～180mg/dl、β脂蛋白150～500mg/dl。服用前的男性的總膽固醇、中性脂肪、β脂蛋白的值超過(guò)正常值，除1人外，HDL在正常值以下。
但是，通過(guò)服用白靈菇干燥粉末，發(fā)現(xiàn)改善了這些值，服用6個(gè)月3人所有的值都改善到正常范圍內(nèi)。因此，確認(rèn)對(duì)服用白靈菇的人具有疾病預(yù)防改善作用。另外，通過(guò)服用，下痢、嘔吐、排尿異常等的副作用一起消除。
通過(guò)以上的說(shuō)明，按照本發(fā)明的白靈菇的栽培方法，通過(guò)施加電脈沖和/或給予溫度變化，在短時(shí)期內(nèi)可收獲大量的子實(shí)體。
再者，含有本發(fā)明的白靈菇的疾病預(yù)防改善劑，具有優(yōu)良的疾病預(yù)防改善效果。
權(quán)利要求
1.在培養(yǎng)基中接種白靈菇種菌，使培養(yǎng)的菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)蔓延，其后產(chǎn)生子實(shí)體的白靈菇栽培方法，其特征是在上述培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)前期維持的溫度在培養(yǎng)中期一旦下降，使溫度在培養(yǎng)后期急劇上升。
2.在培養(yǎng)基中接種白靈菇種菌，使培養(yǎng)的菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)蔓延，其后產(chǎn)生子實(shí)體的白靈菇栽培方法，其特征是在上述產(chǎn)生時(shí)，維持產(chǎn)生前期低溫，同時(shí)提高產(chǎn)生后期的溫度。
3.在培養(yǎng)基中接種白靈菇種菌，使培養(yǎng)的菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)蔓延，其后產(chǎn)生子實(shí)體的白靈菇栽培方法，其特征是在上述培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)前期維持的溫度在培養(yǎng)中期一旦下降，使溫度在培養(yǎng)后期急劇上升，在上述產(chǎn)生時(shí)，維持產(chǎn)生前期低溫，同時(shí)提高產(chǎn)生后期的溫度。
4.按照權(quán)利要求1～3中任何一項(xiàng)的白靈菇栽培方法，其特征是在培養(yǎng)結(jié)束后施加5～60kV的電脈沖。
5.按照權(quán)利要求1或3的白靈菇栽培方法，其特征是在上述培養(yǎng)前期的溫度是16～24℃，培養(yǎng)中期的溫度是6～14℃，培養(yǎng)后期的溫度是26～34℃。
6.按照權(quán)利要求5的白靈菇栽培方法，其特征是在上述培養(yǎng)期間，培養(yǎng)前期為35～45日，培養(yǎng)中期為5～15日，培養(yǎng)后期為5～15日。
7.按照權(quán)利要求1或3的白靈菇栽培方法，其特征是在培養(yǎng)時(shí)維持濕度為65～75％。
8.按照權(quán)利要求2或3的白靈菇栽培方法，其特征是在上述產(chǎn)生前期溫度是-5～+3℃，產(chǎn)生后期的溫度是14～22℃。
9.按照權(quán)利要求8的白靈菇栽培方法，其特征是在產(chǎn)生期間溫度分2階段上升。
10.按照權(quán)利要求2或3的白靈菇栽培方法，其特征是在上述產(chǎn)生時(shí)，在溫度上升的同時(shí)，從維持濕度75～85％的狀態(tài)上升到90～100％。
11.按照權(quán)利要求2或3的白靈菇栽培方法，其特征是在上述產(chǎn)生時(shí)，在溫度上升的同時(shí)，提高二氧化碳的濃度和/或照明的光度。
12.按照權(quán)利要求2或3的白靈菇栽培方法，其特征是在上述產(chǎn)生時(shí)，在溫度上升前除去死滅菌層。
13.白靈菇的栽培方法，其特征是包括下述的步驟(a)在培養(yǎng)基中接種白靈菇種菌；(b)在步驟(a)后，在20～30℃的溫度條件下培養(yǎng)使菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)蔓延；(c)在步驟(b)后，施加5～60kV的電脈沖；(d)在步驟(c)后，在10～20℃的條件下產(chǎn)生子實(shí)體。
14.按權(quán)利要求13記載的栽培方法，其特征是在步驟(d)中，溫度一旦下降到-1～2℃，再上升到10～20℃。
15.以白靈菇作為主要成分的疾病預(yù)防改善劑。
16.權(quán)利要求15記載的疾病預(yù)防改善劑，其特征是含有白靈菇的干燥粉末和/或熱水提取物。
17.權(quán)利要求15記載的疾病預(yù)防改善劑，其特征是所述疾病是選自高血壓癥、高脂血癥、肥胖中的一種或兩種以上。
全文摘要
本發(fā)明的目的是提供在短期內(nèi)收獲充分量的子實(shí)體的白靈菇栽培方法，并且提供含有該白靈菇的疾病預(yù)防改善劑。本發(fā)明的白靈菇的栽培方法，通過(guò)施加電脈沖和/或給予溫度變化，在短期間內(nèi)可收獲足夠量的子實(shí)體。本發(fā)明的含有白靈菇的疾病預(yù)防改善劑具有優(yōu)良的疾病預(yù)防改善效果。
文檔編號(hào)A01G1/04GK1511443SQ20031012463
公開(kāi)日2004年7月14日 申請(qǐng)日期2003年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月26日
發(fā)明者北島良信, 江口文陽(yáng), 北本豐, 陽(yáng) 申請(qǐng)人:北島良信, 江口文陽(yáng), 北本豐