專利名稱：馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及綠色地被植物領(lǐng)域，尤其是種苗快繁的生物技術(shù)技術(shù)背景馬藺[Iris lacteal pall.var chinensis(Fisch.)]是鳶尾科鳶尾屬多年生草本宿根植物，具有很強的抗旱，抗寒，耐鹽堿，抗病蟲能力，近年來逐漸被用作水保護坡、園林綠化觀賞地被建設(shè)的優(yōu)良材料。然而，由于存在馬藺種子硬實率高和常溫培養(yǎng)條件下的發(fā)芽率與發(fā)芽勢低的繁殖局限性，以及異型雜交使種子繁殖不能保證品種基因型一致的缺點，因此，非常迫切去尋求一套馬藺快速繁殖的技術(shù)體系，不僅可以加快馬藺繁殖速度，節(jié)約成本，不受季節(jié)限制成批上市，為馬藺種苗產(chǎn)業(yè)化提供技術(shù)保障，而且為城市園林綠化觀賞地被建設(shè)和道路、河堤護坡等及時大量提供種苗奠定基礎(chǔ)。這項技術(shù)是業(yè)內(nèi)人士重視且呼吁迫切解決的重要技術(shù)問題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種快速無性繁殖，成活率高，不受季節(jié)影響，大幅降低建植成本，在水保護坡和城市觀賞地被建設(shè)中易于推廣的馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)，包括整個過程中各環(huán)節(jié)的最佳培養(yǎng)基和操作過程。
實現(xiàn)發(fā)明的目的的技術(shù)方案如下馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)，包括外植體制備，愈傷組織誘導(dǎo)，綠苗分化，繼代增殖，生根培養(yǎng)和試管苗移栽六個階段的構(gòu)建技術(shù)。
(1)外植體制備時將馬藺種子去除堅硬種皮后，經(jīng)2.33％次氯酸鈉溶液浸泡滅菌，再用無菌水清洗，(2)愈傷組織誘導(dǎo)，將外植體接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在無光條件下，室溫24-26℃進行愈傷誘導(dǎo)，
(3)綠苗分化，將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化芽培養(yǎng)基上，在光照強度為1000LX下進行24hr/d光照，24-26℃進行分化芽培養(yǎng)，(4)繼代增殖，將分化芽叢轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上，在光照強度為1000LX下進行24hr/d光照，在室溫24-26℃進行繼代增殖，(5)生根培養(yǎng)，將經(jīng)過繼代增殖培養(yǎng)的分化芽轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上，在光照強度為1000LX下進行24hr/d光照，24-26℃進行生根培養(yǎng)，(6)試管苗移栽，當(dāng)根密度平均達到3.33，根長6-10cm，平均株高9-10cm時，即可野外直接移栽，將組培苗移栽入土，保持土壤溫潤，并搭蓬保護，半月后拆蓬。
在整個繁殖過程中所涉及到的各種培養(yǎng)基制備方法如下愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在MS培養(yǎng)基中加入6g/l瓊脂粉，60g/l蔗糖，和植物激素，用INNaOH溶液調(diào)節(jié)PH至6.0再經(jīng)高壓蒸氣消毒滅菌即可使用。MS培養(yǎng)基中硝酸銨在正常情況下，激素配方為2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)4mg/l+6-芐基腺嘌呤(BA)2-5mg/l，或2，4-D 2mg/l+6糠基腺嘌呤(KT)1.5mg/l；如MS培養(yǎng)基中硝酸銨含量加倍時，植物激素配方為2，4-D 2-4mg/l+BA1-2mg/l，或2，4-D 4mg/l+KT 0.5-1.5mg/l。
分化芽培養(yǎng)基是在MS培養(yǎng)基中加入6g/l瓊脂粉，30g/l蔗糖和植物激素，再用INNaOH溶液調(diào)節(jié)PH值至6.0，再經(jīng)過高壓蒸汽消毒滅菌。
當(dāng)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中生長素/分裂素(2，4-DKT)為1∶0.75時，植物激素配方為BA4mg/l+奈乙酸(NAA)0.5mg/l，或BA 2mg/l+NAA 0.5mg/l。
繼代增殖培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基本成分，再加入6g/l瓊脂粉，30g/l蔗糖，及植物激素，再用INNaOH溶液調(diào)節(jié)PH至6.0，再經(jīng)過高壓蒸汽滅菌消毒后作為繼代增殖培養(yǎng)基。如愈傷組織分化芽培養(yǎng)基中的植物激素組分為BA4mg/l+(NAA)0.5mg/l的，則繼代增殖培養(yǎng)基中的植物激素采用BA2-4mg/l+NAA0-0.5mg/l；或采用BA2-4mg/l，再轉(zhuǎn)入BA0.5-1mg/l+NAA 0-0.5mg/l；如愈傷組織分化芽培養(yǎng)基中的植物激素組分為BA2mg/l+NAA0.5mg/l的，則繼代增殖培養(yǎng)基中的植物激素采用BA2mg/l+NAA 0.1-0.2mg/l。
生根培養(yǎng)基是在1/2MS培養(yǎng)基中加入6g/l瓊脂粉，30g/l蔗糖，用INNaOH溶液調(diào)節(jié)PH至6.0，再經(jīng)高壓蒸氣消毒滅菌。
本發(fā)明具有下列特點(1)提前出苗，節(jié)省時間，種子經(jīng)愈傷組織誘導(dǎo)后進行分化芽培養(yǎng)，經(jīng)過1-2個月愈傷組織即可分化出芽叢，縮短了出芽叢時間。
(2)成活率高用傳統(tǒng)的種子繁殖方法，成活率低，一般＜50％，采用本發(fā)明后成活率提高到95％以上。
(3)不受季節(jié)的影響，適于全年繁殖，可大批量供應(yīng)種苗。
(4)在試管苗移栽時，不需煉苗，采用直接出瓶移栽的方法，將組培苗移栽入土，簡化了程序，降低了成本。
具體實施例方式
現(xiàn)通過下述優(yōu)選的實施方式對本發(fā)明作進一步的說明。
(1)選取成熟飽滿的馬藺種子，去除硬種皮后，用紗布包好，經(jīng)2.33％次氯酸鈉溶液浸泡，攪動，消毒滅菌25分鐘，在超凈工作臺上用無菌水清洗7次，每次2-3分鐘。
(2)采用MS培養(yǎng)基基本成分，加入6g/l瓊脂粉，60g/l蔗糖，和植物激素，用IN氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至6.0，置入培養(yǎng)皿或三角瓶中高壓蒸氣滅菌消毒后，作為愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基。將外植體接種到培養(yǎng)基上，培養(yǎng)條件控制在黑暗無光，室溫26℃下，誘導(dǎo)1個月左右即可出現(xiàn)良好的愈傷組織。
(3)將愈傷組織轉(zhuǎn)移到激素含量分別是BA 4mg/l+NAA(奈乙酸)0.5mg/l或BA 2mg/l+NAA 0.5mg/l的分化芽培養(yǎng)基上，培養(yǎng)條件控制在24hr/d光照，室溫26℃下，光照強度1000lx下，經(jīng)過1-2個月愈傷組織即可分化出芽叢。
(4)將經(jīng)含有植物激素為BA 4mg/l+NAA(奈乙酸)0.5mg/l的培養(yǎng)基中愈傷分化芽培養(yǎng)的轉(zhuǎn)入含有BA 2-4mg/l+NAA 0-0.5mg/l；植物激素的繼代增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)25天，在光照強度為1000LX下25hr/d光照，溫度保持在24-26℃，得到良好的繼代增殖。
(5)將經(jīng)過繼代增殖的分化芽叢轉(zhuǎn)移到綠苗生根培養(yǎng)基上，以光照強度為1000LX條件下進行24hr/d光照，溫度保持在24℃，經(jīng)過一個月的再生苗生根。
(6)當(dāng)再生苗生根的根密度平均達到3.33，根長6-10cm，平均株高9-10cm時，葉片生長茂密、健康，達到野外直接移栽標(biāo)準(zhǔn)。采用不需煉苗直接出瓶移栽的方法，將組培苗移栽入土，沙性土壤為佳，移栽后早春需搭建塑料大蓬或夏季需搭建遮陽蓬以模擬密閉環(huán)境，半月后拆蓬。期間要澆水保持土壤濕潤。期成活率達95％以上。
權(quán)利要求
1.馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)，包括外植體制備，愈傷組織誘導(dǎo)，綠苗分化，繼代增殖，生根培養(yǎng)和試管移栽，其特征為(1)外植體制備時將馬藺種子去除堅硬種皮后，經(jīng)2.33％次氯酸鈉溶液浸泡滅菌，再用無菌水清洗，(2)愈傷組織誘導(dǎo)，將外植體接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在無光條件下，室溫24-26℃進行愈傷誘導(dǎo)，(3)綠苗分化，將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化芽培養(yǎng)基上，在光照強度為1000LX下進行24hr/d光照，24-26℃進行分化芽培養(yǎng)，(4)繼代增殖，將分化芽叢轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)莖上，在光照強度為1000LX下進行24hr/d光照，在室溫24-26℃進行繼代增殖，(5)生根培養(yǎng)，將經(jīng)過繼代增殖培養(yǎng)的分化芽轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上，在光照強度為1000LX下進行24hr/d光照，24-26℃進行生根培養(yǎng)，(6)試管苗移栽，當(dāng)根密度平均達到3.33，根長6-10cm，平均株高9-10cm時，即可野外直接移栽，將組培苗移栽入土，保持土壤溫潤，并搭蓬保護，半月后拆蓬。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)，其特點為愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在MS培養(yǎng)基中加入6g/l瓊脂粉，60g/l蔗糖，和植物激素，用INNaOH溶液調(diào)節(jié)PH至6.0再經(jīng)高壓蒸氣消毒滅菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)，其特征為當(dāng)MS培養(yǎng)基中硝酸銨是正常情況下激素配方如下2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)4mg/l+6-芐基腺嘌呤(BA)，或2，4-D2mg/l+6糠基腺嘌呤(KT)1.5mg/l。
4.根據(jù)權(quán)利要求書2所述馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)，其特征為當(dāng)MS培養(yǎng)基中硝酸銨含量加倍，植物激素配方如下2，4-D2-4mg/l+BA1-2mg/l，或2，4-D4mg/l+KT 0.5-1.5mg/l。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)，其特征為分化芽培養(yǎng)基是在MS培養(yǎng)基中加入6g/l瓊脂粉，30g/l蔗糖和植物激素，再用INNaOH溶液調(diào)節(jié)PH值至6.0，再經(jīng)過高壓蒸汽消毒滅菌。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)，其特征為當(dāng)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中生長素/分裂素(2，4-DKT)為1:0.75時，植物激素配方如下BA4mg/l+奈乙酸(NAA)0.5mg/l，或BA 2mg/l+NAA 0.5MG/l。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)，其特征為繼代增殖培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基基本成分，再加入6g/l瓊脂粉，30g/l蔗糖，及植物激素，再用INNaOH溶液調(diào)節(jié)PH至6.0，再經(jīng)過高壓蒸汽消毒滅菌，
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)，其特征為繼代增殖培養(yǎng)基中植物激素配方為BA 2-4mg/l+NAA 0-0.5mg/l或先經(jīng)含有植物激素BA2-4mg/l的培養(yǎng)基，再轉(zhuǎn)入含有植物激素BA0.5-1mg/l+NAA-0.5mg/l的培養(yǎng)基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)，其特征為生根培養(yǎng)基是在1/2MS培養(yǎng)基中加入6g/l瓊脂粉，30g/l蔗糖，用INNaOH溶液調(diào)節(jié)PH至6.0，再經(jīng)高壓蒸氣滅菌消毒。
全文摘要
本發(fā)明為馬藺組培快繁體系構(gòu)建技術(shù)，涉及綠色地被植物領(lǐng)域，作為優(yōu)良的綠化草種的馬藺，存在著硬實率高和發(fā)芽率、發(fā)芽勢低的繁殖局限性，為了克服這些缺點，本發(fā)明研究出了在外植體制備，愈傷組織誘導(dǎo)，綠苗分化，繼代增殖生根培養(yǎng)，和試管苗移栽過程中各環(huán)節(jié)的操作規(guī)程和培養(yǎng)基采用了在MS培養(yǎng)基的基本成分中添加了瓊脂粉，蔗糖和多個過程中的專用植物激素，調(diào)節(jié)pH至6.0，本發(fā)明具有成活率高，達到95％以上，不受季節(jié)影響，可大批供應(yīng)種苗，提前出芽叢節(jié)省時間，和簡化程序，降低成本的特點。
文檔編號A01H4/00GK1545862SQ20031011847
公開日2004年11月17日 申請日期2003年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月18日
發(fā)明者孟林, 趙茂林, 高洪文, 肖闊, 孟 林 申請人:北京草業(yè)與環(huán)境研究發(fā)展中心, 北京農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心