專利名稱：葛仙米、地木耳培養(yǎng)中污染的控制方法
技術領域：
本發(fā)明涉及微藻生物技術領域，更具體涉及葛仙米、地木耳培養(yǎng)中污染的控制方法。
背景技術：
念珠藻是藍藻門Cyanophyta藍藻綱Cyanophyceae段殖藻目Hormogonales念珠藻科Nostocaceae的一類分布地域廣、生態(tài)環(huán)境復雜、形態(tài)結構多樣的藻類類群，其植物體膠狀或革狀，成熟植物體有球形、葉狀、絲狀、泡狀等多種形狀，中空或?qū)嵭?，營漂浮或著生生長。其原植體由許多直徑數(shù)微米的纖細藻絲集結成肉眼可見的群體，群體形狀因“種”而異，如發(fā)菜(Nostoc flageliforme Kütz.)、地木耳(Nostoc commune)、葛仙米(Nostoc sphaeroides)在新鮮狀態(tài)下分別呈頭發(fā)狀、扁平耳狀或小球(珠)狀，干燥后程度不等地有所縮變，均具有豐富的營養(yǎng)價值，在《本草綱目》、《本草綱目拾遺》、《陜西中草藥》、《梧州府志》、《全國中草藥匯編》等書籍中已有記載。念珠藻不僅在自然界普遍發(fā)生，而且自古以來都是我國民間的傳統(tǒng)食物；其中葛仙米，學名擬球狀念珠藻，具有食療、保健、滋補等功效；同時又具有藥性，常食用能清熱解毒，涼血明目，促進新陳代謝；葛仙米的天然生產(chǎn)狀況已經(jīng)衰落，需求和生產(chǎn)產(chǎn)量的矛盾不可回避。隨著人類活動加劇，近年來，葛仙米的生長地逐漸縮小，產(chǎn)量也不斷減少.其天然年產(chǎn)量不足一噸，而且日趨減少，遠遠滿足不了需求，隨著近年來的旅游資源開發(fā)，過度的采集又帶來了生態(tài)、環(huán)境破壞和自然資源萎縮。然而葛仙米產(chǎn)品在東南亞國際市場很受歡迎，在國內(nèi)市場難尋其“仙蹤”。地木耳，俗稱地皮菜、地耳、地衣、地軟，營養(yǎng)價值高，是典型的高蛋白、低脂肪、低熱值的綠色保健食品；野生地木耳的生長受到自然界干旱少雨的限制，處于自生自滅狀態(tài)，同時地木耳對大氣污染十分敏感，生活環(huán)境具有一定的選擇性，隨著環(huán)境污染范圍的擴大，其生長區(qū)域逐年減少，過去很多生長地木耳的地方都難見其蹤跡。近年來，在世界范圍內(nèi)的野生食物開發(fā)利用熱潮中，地木耳也已進入人們的的菜譜；但由于野生地木耳的資源十分有限，極大地限制了人們對地木耳的食物需求。為了滿足人們物質(zhì)生活水平提高的需要，開展葛仙米、地木耳的人工養(yǎng)殖研究勢在必行。
葛仙米、地木耳培養(yǎng)過程中會受到各種污染生物的威脅，主要有雜藻、浮游動物、及蚊子的幼蟲，污染生物使產(chǎn)量減少，蚊子的幼蟲以念珠藻為食，在收獲時很難除去，影響成品的質(zhì)量；嚴重時，使培養(yǎng)無法進行。中國專利文獻一種培養(yǎng)葛仙米的方法，分類號C12N 1/12，申請日1999.10.22，
公開日2001.05.09，申請?zhí)?9120005.5，申請人中國科學院水生生物研究所，該專利中僅僅提到在葛仙米培養(yǎng)中微生物污染嚴重時需徹底更換培養(yǎng)液，并對反應器進行滅菌處理，未提出具體的操作方法。中國專利文獻一種培養(yǎng)地木耳的方法，分類號C12N 1/12，申請?zhí)?3119091.X，申請人中國科學院水生生物研究所，該專利僅僅涉及在地木耳培養(yǎng)中污染嚴重時需徹底更換培養(yǎng)液，對反應器或培養(yǎng)池滅菌，也未提出地木耳污染控制的具體方法。經(jīng)檢索未見到一種葛仙米、地木耳培養(yǎng)中污染的預防、控制方法被公開或使用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在于提供一種葛仙米、地木耳培養(yǎng)中污染的控制方法，該方法簡單易行，除去污染生物的效率高，可以將培養(yǎng)池中污染的生物量控制在葛仙米、地木耳總生物量的1％以內(nèi)，在收獲時采用清洗的方法，進一步減少了雜藻、浮游動物的量。
為了達到上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案進行葛仙米、地木耳的人工養(yǎng)殖，污染控制方法的步驟是1、在用葛仙米和地木耳群體制備藻絲或者藻殖段時整個過程均采用無菌處理；藻絲或藻殖段的培養(yǎng)也在無菌條件下進行，一般每8-20天更換一次培養(yǎng)液，換培養(yǎng)液時在超凈工作臺中進行，直至葛仙米、地木耳的球形群體直徑增大到0.04-0.1毫米。2、當葛仙米、地木耳直徑至0.04-0.1毫米時，培養(yǎng)過程可不需要嚴格的無菌處理，但在不同培養(yǎng)容器中轉(zhuǎn)接或擴大培養(yǎng)規(guī)模時，要用水清洗培養(yǎng)容器、培養(yǎng)池內(nèi)壁，用水洗后，最好用60-95％的乙醇溶液在容器內(nèi)壁擦洗一遍，或者用0.001％-5％的高錳酸鉀擦洗一遍或者浸泡2-6小時。3、對生產(chǎn)用的種藻進行清洗或篩洗在開放式培養(yǎng)中，培養(yǎng)液會被雜藻、浮游動物等污染，在更換培養(yǎng)液時，藻體表面會附著這些污染物，當藻體直徑在0.2毫米以上時，可以利用葛仙米、地木耳在水中的沉降速度較快，雜藻沉降速度慢，浮游動物也集中在上清液中，倒掉上清中的污染；反復傾倒沉降可除去大部分的污染生物；當藻體直徑在1毫米以上時，可以用孔徑為0.7-1毫米的不銹鋼篩對藻體進行篩洗。4、為了避免配制培養(yǎng)液的水中可能帶來的各種浮游生物及其卵的污染，用8-16層紗布將水過濾后再使用。5、室外培養(yǎng)中蚊子的幼蟲很容易在培養(yǎng)池中繁殖，并在池底以藻為巢，可通入0.5％-20％的二氧化碳30分鐘-4小時，液體缺氧而殺死蚊子幼蟲；或在培養(yǎng)池底筑一小坑，等蚊子幼蟲聚積在小坑后將其除去。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有以下優(yōu)點和效果解決了葛仙米、地木耳人工培養(yǎng)過程污染的控制，可以有效的預防、控制培養(yǎng)池中的污染的量，使培養(yǎng)能順利進行，保證培養(yǎng)藻體的質(zhì)量。設備簡單，安全性高，操作方便，對藻的生長無不良影響，成本低，能有效的將培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液的污染生物量控制在1％以內(nèi)，葛仙米、地木耳成品的污染生物量控制在0.05％，適合工廠規(guī)?；a(chǎn)中污染的控制。
具體實施例方式
人工養(yǎng)殖的葛仙米、地木耳主要為球形，少為啞鈴形、橢圓形；由藻絲或藻殖段長成直徑為5-7毫米的成品，需要2-3個月時間；將葛仙米、地木耳由藻絲或藻殖段培養(yǎng)為5-7毫米的成品期間，每8-20天更換一次培養(yǎng)液。在葛仙米、地木耳培養(yǎng)中污染的預防控制方法的步驟如下1、在制種階段采用純培養(yǎng)制備藻絲或藻殖段時所用的錐形瓶、玻璃勻漿器、涂棒、移液管、培養(yǎng)液、水、培養(yǎng)容器均需在高壓蒸汽滅菌15分鐘，藻絲的制備在無菌條件下操作進行，需要通氣培養(yǎng)時通入無菌氣體；葛仙米、地木耳的藻絲或藻殖段需要15-30天才能長成0.05毫米以上的微球體，期間更換培養(yǎng)基時在超凈工作臺中進行，培養(yǎng)時通入無菌的空氣。
在本發(fā)明中所涉及到的培養(yǎng)液均為下面的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液為磷酸氫二鉀20-60mg/L、硫酸鎂40-80mg/L、氯化鈣20-40mg/L、檸檬酸4-8mg/L、檸檬酸鐵銨5-9mg/L、乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mg/L、碳酸鈉5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者為水；其中微量元素為每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化錳1-2g、硫酸鋅0.1-0.25g、鎳酸鈉0.2-0.4g、硫酸銅0.02-0.1g、硝酸鈷0.03-0.05g、余者為水；2、接種前對培養(yǎng)池、培養(yǎng)容器進行清洗當葛仙米、地木耳球體直徑長到0.04-0.1毫米時，可以在室內(nèi)或室外采用開放式培養(yǎng)，在室內(nèi)可用1-10升試劑瓶、玻璃缸等透明容器培養(yǎng)葛仙米、地木耳；室外可采用長0.4-1.2米，寬0.1-0.8米，高0.2-0.5米的方框或表面積為6-1000平方米的跑道式培養(yǎng)池培養(yǎng)。在接種前，用優(yōu)質(zhì)地表水或自來水刷洗培養(yǎng)容器或培養(yǎng)池內(nèi)壁，重復1-3遍；最好先用優(yōu)質(zhì)地表水或自來水將培養(yǎng)容器或培養(yǎng)池內(nèi)壁刷洗一遍；再用60-95％的乙醇溶液或0.1-5％的高錳酸鉀溶液刷洗一遍，也可用0.001-0.1％的高錳酸鉀溶液浸泡2-6個小時；最后再用水清洗1-3遍。
3、對生產(chǎn)用的種藻進行清洗或篩洗在開放式培養(yǎng)中，培養(yǎng)液會被雜藻、浮游動物等污染，在更換培養(yǎng)液時，藻體表面會附著這些污染生物；當藻體直徑在0.2毫米以上時，葛仙米、地木耳在接種前，可用水對藻體進行清洗，葛仙米、地木耳球形群體在水中沉降速度較快，雜藻、浮游動物沉降速度較慢，通過向葛仙米、地木耳容器注水，靜置30秒-4分鐘，倒掉上清液，重復2-4次，可以除去70-90％的污染生物。當培養(yǎng)的藻體直徑大于1毫米時，也可用孔徑大小為0.7-1毫米篩子進行篩洗，對于工廠大規(guī)模生產(chǎn)，可用一定孔徑的重力斜篩進行清洗，該方法能除去80-95％的污染生物；在開放式培養(yǎng)中，培養(yǎng)液中含有雜藻和輪蟲、纖毛類等浮游動物，用上述方式有較好的效果；對于收獲的成品球體也可以用上述方法進行清洗。對于清洗葛仙米、地木耳的水可用4-12層紗布過濾后可反復使用。
4、配制培養(yǎng)液的水過濾可用自來水或二級以上(包括)地表水配制培養(yǎng)液，為了避免水中可能帶來的各種污染，用8-16層紗布進行過濾后再使用。
5、殺死或清除浮游動物室外開放培養(yǎng)易受到蚊子幼蟲污染，除去蚊子幼蟲，可在更換培養(yǎng)液時，將收獲的藻體盛于一長0.5-4米，寬0.5-4米，深0.3-2米的方框內(nèi)，同時向方框內(nèi)注入1-5倍藻體重量的水或培養(yǎng)液，通入0.5-20％的二氧化碳30分鐘-4小時，可因水或培養(yǎng)液缺氧而殺死蚊子幼蟲，然后在將藻體接入培養(yǎng)池中繼續(xù)培養(yǎng)，也可直接向培養(yǎng)池中通入0.5-20％的二氧化碳而殺死蚊子幼蟲；或在培養(yǎng)池底筑一小坑，蚊子幼蟲喜歡聚集在培養(yǎng)池中水流較緩的地方，等蚊子幼蟲聚積在小坑后將其除去。
權利要求
1.一種葛仙米地木耳培養(yǎng)中污染的控制方法，它包括下列步驟A、在制種階段采用純培養(yǎng)制備藻絲所用錐形瓶、玻璃勻漿器、涂棒、移液管、培養(yǎng)液、水、培養(yǎng)容器在高壓蒸汽滅菌，藻絲的制備在無菌條件下操作進行，葛仙米、地木耳的藻絲長成微球體，更換培養(yǎng)基時在超凈工作臺中進行，培養(yǎng)時通入無菌的氣體；B、接種前對培養(yǎng)池、培養(yǎng)容器進行清洗，當葛仙米、地木耳球體直徑長到0.04-0.1毫米時，采用開放式培養(yǎng)，在接種前，用自來水刷洗培養(yǎng)容器或培養(yǎng)池內(nèi)壁，重復1-3遍；或用水將培養(yǎng)容器或培養(yǎng)池內(nèi)壁刷洗一遍，再用60-95％的乙醇溶液或0.1-5％的高錳酸鉀溶液刷洗一遍，也可用0.001-0.1％的高錳酸鉀溶液浸泡2-6個小時，最后用水清洗1-3遍；C、對生產(chǎn)用的種藻進行清洗或篩洗，在開放式培養(yǎng)中，當藻體直徑在0.2毫米時，葛仙米、地木耳在接種前，用水對藻體進行清洗，向葛仙米、地木耳容器注水，靜置30秒-4分鐘，倒掉上清液，重復2-4次；當培養(yǎng)的藻體直徑1毫米時，用孔徑大小為0.7-1毫米篩子進行篩洗，清洗葛仙米、地木耳的水用4-12層紗布過濾；D、用8-16層紗布對配制培養(yǎng)液的水進行過濾再使用；E、殺死或清除浮游動物，更換培養(yǎng)基時，將收獲的藻體盛于框內(nèi)，向框內(nèi)注入1-5倍藻體重量的水或培養(yǎng)液，通入0.5-20％的二氧化碳30分鐘-4小時，因水或培養(yǎng)液缺氧而殺死蚊子幼蟲，然后在將藻體接入培養(yǎng)池中繼續(xù)培養(yǎng)，也可直接向培養(yǎng)池中通入0.5-20％的二氧化碳而殺死蚊子幼蟲；或在培養(yǎng)池底筑一小坑，蚊子幼蟲聚積在小坑后將其除去。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種葛仙米、地木耳培養(yǎng)中污染的控制方法，首先在制種階段采用純培養(yǎng)；其次是接種前對培養(yǎng)池、培養(yǎng)容器進行清洗；第三是對生產(chǎn)用的種藻進行清洗或篩選；第四是配制置培養(yǎng)液的水過濾，用紗布過濾；第五是殺死或清除浮游動物。本發(fā)明方法簡單易行，效率高，操作方便，成本低，能有效的將培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液的污染物生物量控制在1％內(nèi)，適合工廠化生產(chǎn)中污染的控制。
文檔編號A01G33/00GK1544612SQ20031011145
公開日2004年11月10日 申請日期2003年11月25日 優(yōu)先權日2003年11月25日
發(fā)明者鄧中洋, 胡征宇 申請人:中國科學院水生生物研究所