專利名稱：曼地亞紅豆杉快速繁殖方法
技術領域：
本發明涉及一種植物繁殖再生方法，尤其是曼地亞紅豆杉微體快速繁殖方法。
背景技術：
曼地亞紅豆杉，紅豆杉科，紅豆杉屬，系東北紅豆杉和歐洲紅豆杉的雜交種，是第四紀冰川后遺留下來的世界珍稀瀕危物種，我國一級保護植物。原產加拿大和美國、海拔100-2000米的酸性沙質山地。我國1996年從加拿大引進，我國現有母本僅數萬株，資源非常稀少。該樹體內含有非常昂貴的抗癌原料——紫杉醇，是目前全球最有療效的抗癌藥物之一。1992年，美國FDA首次批準將紫杉醇用于治療轉移性卵巢癌，后又批準用于治療晚期轉移性乳腺癌。目前紫杉醇合成制藥已在美國、英國、加拿大、瑞典、奧地利等國家上市應用。我國衛生部也于1995年批準紫杉醇的制劑和原料藥作為II類新藥(西藥)，用于治療卵巢癌、乳腺癌、肺癌和鼻咽癌等。
曼地亞紅豆杉生長速度快、側根發達，對環境適應能力強，可廣泛應用于營建水土保持林、水源涵養林，是正在實施的天然林保護工程退耕還林工程等國家重點生態建設工程首選的經濟型樹種之一。
曼地亞紅豆杉資源非常稀少，在我國生長僅6年的歷史，到目前為止還沒有一套完整可行的高效繁育技術，為了保護我國瀕危野生紅豆杉資源，擴大優質紅豆杉的種群，實現人工優質紅豆杉產業化種植，成為了該行業專家們一直想解決的難題。
發明內容
本發明的目的是提供一種取材小、繁育時間短、成活率高、成本低、易推廣的曼地亞紅豆杉快速繁殖方法。
該繁殖方法，是利用曼地亞紅豆杉的“全能性”和“全息性”，以植物組織培養為原理，并結合常規扦插育苗和全光霧扦插育苗技術，取曼地亞紅豆杉器官的一部分(曼地亞紅豆杉的微型材料)經研發的“G·P克隆補液”處理后，直接接種在大田的沙床(或沙質土)上，后結合“G·P克隆補液”和配套管理技術進行管理，約經25天即可生根。
本發明的具體方案是一種曼地亞紅豆杉快速繁殖方法，按如下步驟進行(1)育苗床及育苗棚的準備A育苗床以西偏5°的方向作床，苗床長8米，寬2.7米，床中深挖一地溝，溝長8米，寬30cm，深40cm，地溝將苗床分成相等的兩個小苗床，各寬1.2米。
B在苗床上方搭小拱棚(以竹片為材料)，要求棚高12米，棚長8米；并覆白色塑料膜(厚度不限)，膜長11米，兩棚口分別下垂1.5用以覆蓋棚口。
C將河沙(粗細均可)或沙質土平鋪在小苗床上，厚度為5cm，鋪后要求沙層松軟，并用高錳酸鉀800倍液將沙層消毒，將棚口塑料膜拉下蓋住棚口，24小時后掀開塑料膜備用。
(2)配制適合曼地亞紅豆杉生長的一套補液“G·P克隆補液”1號IBA(吲哚丁酸) 1540～1660mgNAA(萘乙酸) 242～265mg6-BA(6-芐基氨基嘌呤)0.4～0.56mg蒸餾水 加至1000ml要點根據濃度配制出混合液，用少量的95％的酒精溶解IBA和NAA，后再加入適量的水。6-BA先用1mol·L-1的HCl溶解，再加水定溶。配制完畢后，用酸度計測量其PH值，該溶液的PH值為6.0，若偏酸用1mol·L-1NaOH來調節，若偏堿用1mol·L-1HCl來調節。“G·P克隆補液”2號KNO3(硝酸鉀) 1580～1620mgCaCl2·2H2O(氯化鈣) 395～410mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”3號NH4NO3(硝酸銨) 1440～1460mgMgSO4·7H2O(硫酸鎂) 325～335mgKH2PO4(磷酸二氫鉀) 96～110mg
蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”4號MnSO4·4H2O(硫酸錳) 18.5～22.5mgZnSO4·7H2O(硫酸鋅) 10～12.5mgH3BO3(硼酸) 9.6～11mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”5號Na2MoO4·2H2(鉬酸鈉) 0.2～0.3mgCuSO4·5H2O(硫酸銅) 0.025～0.035mgCoCl2·6H2O(氯化鈷) 0.025～0.035mgKI(碘化鉀) 0.85～1.24mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”6號FeSO4·7H2O(硫酸鐵) 46～53mgNa2-EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)； 38.5～45mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”7號Vit.B6(鹽酸吡哆辛) 0.78～0.85mgGly(甘氨酸)2.25～2.65mg肌醇 75.5～80mg椰乳 120～128mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”8號C2H22O11(蔗糖) 15800～16150mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”9號過氧化氫 85000～120000mg蒸餾水 加至1000ml(3)母本繁育材料的準備將曼地亞紅豆杉的枝條(枝條的年齡不限，但不宜過粗)用鋒利的刀片或剪刀從母樹上采集下來，穗條不需消毒(該技術接種操作過程實施帶菌操作，不需任何消毒)。
保持曼地亞紅豆杉枝條的溫度和濕度，在暗光條件下將枝條切成0.5cm左右長的莖段或莖尖，保留葉片，下切口保持平口。
(4)接種快速的將切好的莖段或莖尖材料的下切口在“G·P克隆補液”1號液中速蘸，速蘸時間不超過1秒，材料浸蘸深度為0.5～0.15cm。
將浸蘸后的材料立即接種在經處理的小拱棚內的沙床上，要求沙床濕度以沙拳捏不成團為宜，接種深度為下切口接觸沙床母本材料不倒為宜。接種密度為每平方米800-1000株。接種完畢后，用“G·P克隆補液”9號液將苗床及小拱棚噴霧一遍(該技術采用拉桿式人工噴霧器人工噴霧，以更好的調節噴霧強度)，強度以葉面不滴液為宜。
(5)接種后的管理溫度曼地亞紅豆杉4-10月份接種苗管理，白天一般棚內溫度控制在25-28度為宜，若溫度過高靠噴霧調節水分降溫，若溫度過低則采用封棚口的方法增溫，晚上封一部分棚口(即留小口)，棚內溫度一般控制在15-20度，但要注意通風。
曼地亞紅豆杉11月至次年3月份接種苗管理，白天一般棚內溫度控制在12-16度(苗床鋪設地熱線更佳)，溫度過低可封棚控制溫度，但要隨時通風。晚上一般棚內溫度控制在8-12度為宜。
濕度(水分)濕度管理主要有棚內濕度，接種苗葉面濕度和苗床濕度管理。4-10份接種，棚內濕度要求要大，接種苗濕度要求時時保持一層薄薄的水膜，即干即補(補水工具為拉桿式噴霧器，方法為人工噴霧，若采用自動噴霧或電腦控制噴霧則達不到理想的效果，成活率降低)，苗床濕度要求也要大。其余時間接種，棚內濕度要求小，接種苗濕度也要求時時保持一層薄薄的水膜，即干即補，苗床濕度要求相對較小。
光照4-10月份接種苗白天要進行遮光處理，光照較強時可用75％遮光網遮光，必要時可用2層遮光網(接種材料上有部分葉片，適當的光照可進行光合作用，產生部分養料)。其余時間接種，可根據實際情況進行適當遮光或不遮光。遮光網一般搭建在育苗棚上方2米處。
通風(氧氣及二氧化碳)通風在育苗過程中非常重要，氣溫過高時要敞開兩端棚口，經常通風，氣溫過低時也要根據實際情況間隔式通風。通風可交換棚風外空氣，排出廢氣，增強氧氣及二氧化碳，增加曼地亞紅豆杉的光合作用，并可減少病害的發生。
養分(營養)曼地亞紅豆杉在育苗過程中，要消耗大量的養料。為此在整個育苗過程中，配制了適合曼地亞紅豆杉的一套補液。具體施用方案如下“G·P克隆補液”9號施用時間第1、11、19、27、35天“G·P克隆補液”2號施用時間第4、12、20、28天“G·P克隆補液”3號施用時間第5、13、21、29天“G·P克隆補液”6號施用時間第6、14、22、30天“G·P克隆補液”7號施用時間第7、15、23、31天“G·P克隆補液”8號施用時間第8、16、24、32天“G·P克隆補液”4號施用時間第9、17、25、33天“G·P克隆補液”5號施用時間第10、18、26、34天說明“G·P克隆補液”2-9號均為噴霧施用，專用于曼地亞紅豆杉的礦物元素的補充。育苗過程中共用補液35天，其中第2-3天不用任何補液，每天補液施用時間為最后一次噴霧時間，噴霧強度以葉片不滴液為宜。
(6)生根、煉苗及出圃經過培養，第25天時，育苗床即有60％左右的曼地亞紅豆杉生根，到第30天時，生根率可達99％。第30-35天，逐漸減輕噴霧強度，第36天時停止補液的施用，即可將小拱棚掀開進行煉苗，到第50天時，小苗已經發出嫩芽，即可進行出圃移植或進行繼代繁育。
A本發明中“G·P克隆補液”1號液各原料的優選重量配比是IBA(吲哚丁酸) 1585～1610mgNAA(萘乙酸)248～255mg6-BA(6-芐基氨基嘌呤) 0.45～0.53mg蒸餾水 加至1000mlB本發明中“G·P克隆補液”2號液各原料的優選重量配比是KNO3(硝酸鉀) 1590～1610mgCaCl2·2H2O(氯化鈣) 398～405mg蒸餾水 加至1000mlC本發明中“G·P克隆補液”3號液各原料的優選重量配比是NH4NO3(硝酸銨) 1445～1455mgMgSO4·7H2O(硫酸鎂)326～332mgKH2PO4(磷酸二氫鉀) 98～105mg蒸餾水加至1000mlD本發明中“G·P克隆補液”4號液各原料的優選重量配比是MnSO4·4H2O(硫酸錳)19.5～21.5mgZnSO4·7H2O(硫酸鋅)10.5～12mgH3BO3(硼酸)9.8～10.05mg蒸餾水加至1000mlE本發明中“G·P克隆補液”5號液各原料的優選重量配比是Na2MoO4·2H2(鉬酸鈉) 0.22～0.29mgCuSO4·5H2O(硫酸銅) 0.026～0.032mgCoCl2·6H2O(氯化鈷) 0.026～0.034mgKI(碘化鉀) 0.95～1.04mg蒸餾水 加至1000mlF本發明中“G·P克隆補液”6號液各原料的優選重量配比是FeSO4·7H2O(硫酸鐵) 48～52.5mgNa2-EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)； 39～44mg
蒸餾水加至1000mlG本發明中“G·P克隆補液”7號液各原料的優選重量配比是Vit.B6(鹽酸吡哆辛)0.79～0.82mgGly(甘氨酸) 2.26～2.62mg肌醇 76～78.5mg椰乳 124～127.5mg蒸餾水加至1000mlH本發明中“G·P克隆補液”8號液各原料的優選重量配比是C2H22O11(蔗糖) 15940～16050mg蒸餾水加至1000mlI本發明中“G·P克隆補液”9號液各原料的優選重量配比是過氧化氫 88000～110000mg蒸餾水加至1000mlA本發明中“G·P克隆補液”1號液各原料的最佳重量配比是IBA(吲哚丁酸) 1600mgNAA(萘乙酸) 250mg6-BA(6-芐基氨基嘌呤) 0.5mg蒸餾水加至1000mlB本發明中“G·P克隆補液”2號液各原料的最佳重量配比是KNO3(硝酸鉀) 1600mgCaCl2·2H2O(氯化鈣) 400mg蒸餾水 加至1000mlC本發明中“G·P克隆補液”3號液各原料的最佳重量配比是NH4NO3(硝酸銨)1450mgMgSO4·7H2O(硫酸鎂) 330mgKH2PO4(磷酸二氫鉀)100mg蒸餾水 加至1000mlD本發明中“G·P克隆補液”4號液各原料的最佳重量配比是MnSO4·4H2O(硫酸錳) 20mgZnSO4·7H2O(硫酸鋅) 11mgH3BO3(硼酸) 10mg
蒸餾水加至1000mlE本發明中“G·P克隆補液”5號液各原料的最佳重量配比是Na2MoO4·2H2(鉬酸鈉) 0.25mgCuSO4·5H2O(硫酸銅)0.03mgCoCl2·6H2O(氯化鈷)0.03mgKI(碘化鉀) 1mg蒸餾水 加至1000mlF本發明中“G·P克隆補液”6號液各原料的最佳重量配比是FeSO4·7H2O(硫酸鐵) 50mgNa2-EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)； 40mg蒸餾水加至1000mlG本發明中“G·P克隆補液”7號液各原料的最佳重量配比是Vit.B6(鹽酸吡哆辛) 0.8mgGly(甘氨酸)2.6mg肌醇 78mg椰乳 125mg蒸餾水 加至1000mlH本發明中“G·P克隆補液”8號液各原料的最佳重量配比是C2H22O11(蔗糖)16000mg蒸餾水 加至1000mlI本發明中“G·P克隆補液”9號液各原料的最佳重量配比是過氧化氫 100000mg蒸餾水 加至1000ml本發明在植物組織培養技術、全光霧扦插技術、常規育苗技術有機結合的基礎上，大膽創新，形成了一套全新的繁育技術，克服了現有育苗技術的全部缺點。
本發明從接種至出圃均一次性成功，不需任何移動，克服了組織培養的不定芽誘導培養、芽生長培養、生根培養等繁雜工序。本發明在“G·P克隆補液”1號液中加入了較高的細胞分裂素和生長素，能高效快速的促進曼地亞紅豆杉接種苗生根。同時在培養過程中，結合曼地亞紅豆杉的生理、生長特性，提供了曼地亞紅豆杉所需的大量元素、微量元素、有機成份、微生素等，并結合適當的光、溫、水、氣等條件，特別是光的利用，能使曼地亞紅豆杉在培養過程中進行光合作用，補充體內所需的養料，這都大大的提高了曼地亞紅豆杉接種苗的成活率和培養的成功率。
采用本發明提供的方法進行培養，到第12天時，曼地亞紅豆紅杉即有大量的愈傷組織產生，并出現小白點，第17天時即有新根生出，第25天時，育苗床即有60％左右的曼地亞紅豆杉生根，到第30天時，生根率可達99％。第30-35天，逐漸減輕噴霧強度，第36天時停止補液的施用，即可將小拱棚掀開進行煉苗，到第50天時，小苗已經發出嫩芽，即可進行出圃移植或進行繼代繁育。
利用本發明每年可用極少的母本材料繁殖大量的優質小苗，是現有傳統技術所不能及的。同時本發明具有取材小、培養速度快、繁殖率高、成本低、易推廣、繁殖種苗不變異等特點，突破了曼地亞紅豆杉原有繁育技術的取材大、繁育時間長、成活率低、成本高、難推廣等技術難題。
曼地亞紅豆杉可用種子繁殖，但時間長，成活率低，現均不采用此法。現有曼地亞紅豆杉繁育技術主要是組織培養法、常規扦插法、全光霧扦插法，但至目前為止，利用率很底，一是因為母本資源少，二是繁育時間長，不利于規模化生產。現有繁育技術該三種方法和本發明方法相比較，本發明能克服現有曼地亞紅豆杉繁育技術的全部缺點，具體對比情況如下表所示曼地亞紅豆杉微體高效快速繁殖方法與現有育苗技術技術指標對比表微體高效快繁 常規扦插技術指標組織培育法全光霧扦插法法 法實驗室、試管培育條件 大田 大田 大田繁育代數5-7代 4-6無 1代/年育苗時間 全年全年 無 2個月育苗設備 簡易復雜 較復雜簡單技術傳授 易 差 較差 易繁育成本 較低 高 較高 低繁殖材料消微小(0.5cm) 微小 大 大耗根系長勢 異常發達 非常弱 壯 較壯生根時間 25天左右 40天左右 50天左右60-90天移苗 一次性成苗 需需 不需生根率99％ 95％ 67％45％移植成活率 100％80-90％96％98％繁育污染率 微 高微 微推廣生產易 難 較難 易具體實施方式
下面結合實例對本發明進一步詳細說明實施例一(1)育苗床及育苗棚的準備A育苗床以西偏5°的方向作床，苗床長8米，寬2.7米，床中深挖一地溝，溝長8米，寬30cm，深40cm，地溝將苗床分成相等的兩個小苗床，各寬1.2米。
B在苗床上方搭小拱棚(以竹片為材料)，要求棚高12米，棚長8米；并白色塑料膜(厚度不限)，膜長11米，兩棚口分別下垂1.5用以覆蓋棚口。
C將河沙(粗細均可)或沙質土平鋪在小苗床上，厚度為5cm，鋪后要求沙層松軟，并用高錳酸鉀800倍液將沙層消毒，將棚口塑料膜拉下蓋住棚口，24小時后掀開塑料膜備用。
(2)配制“G·P克隆補液”A本實例中“G·P克隆補液”1號液各原料的重量配比是IBA(吲哚丁酸) 1600mgNAA(萘乙酸) 250mg6-BA(6-芐基氨基嘌呤) 0.5mg蒸餾水加至1000mlB本實例中“G·P克隆補液”2號液各原料的重量配比是KNO3(硝酸鉀) 1600mg
CaCl2·2H2O(氯化鈣) 400mg蒸餾水 加至1000mlC本實例中“G·P克隆補液”3號液各原料的重量配比是NH4NO3(硝酸銨) 1450mgMgSO4·7H2O(硫酸鎂) 330mgKH2PO4(磷酸二氫鉀) 100mg蒸餾水 加至1000mlD本實例中“G·P克隆補液”4號液各原料的重量配比是MnSO4·4H2O(硫酸錳) 20mgZnSO4·7H2O(硫酸鋅) 11mgH3BO3(硼酸) 10mg蒸餾水 加至1000mlE本實例中“G·P克隆補液”5號液各原料的重量配比是Na2MoO4·2H2(鉬酸鈉) 0.25mgCuSO4·5H2O(硫酸銅) 0.03mgCoCl2·6H2O(氯化鈷) 0.03mgKI(碘化鉀) 1mg蒸餾水 加至1000mlF本實例中“G·P克隆補液”6號液各原料的重量配比是FeSO4·7H2O(硫酸鐵) 50mgNa2-EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)； 40mg蒸餾水 加至1000mlG本實例中“G·P克隆補液”7號液各原料的重量配比是Vit.B6(鹽酸吡哆辛) 0.8mgGly(甘氨酸) 2.6mg肌醇78mg椰乳125mg蒸餾水 加至1000mlH本實例中“G·P克隆補液”8號液各原料的重量配比是C2H22O11(蔗糖) 16000mg蒸餾水 加至1000ml
I本實例中“G·P克隆補液”9號液各原料的重量配比是過氧化氫 100000mg蒸餾水 加至1000ml(3)母本繁育材料的準備將曼地亞紅豆杉的枝條(枝條的年齡不限，但不宜過粗)用鋒利的刀片或剪刀從母樹上采集下來，穗條不需消毒(該技術接種操作過程實施帶菌操作，不需任何消毒)。
保持曼地亞紅豆杉枝條的溫度和濕度，在暗光條件下將枝條切成0.5cm長的莖段或莖尖，保留葉片，下切口保持平口。
(4)接種快速的將切好的莖段或莖尖材料的下切口在“G·P克隆補液”1號液中速蘸，速蘸時間不超過1秒，材料浸蘸深度為0.1cm。
將浸蘸后的材料立即接種在經處理的小拱棚內的沙床上，要求沙床濕度以沙拳捏不成團為宜，接種深度為下切口接觸沙床母本材料不倒為宜。接種密度為每平方米800-1000株。接種完畢后，用“G·P克隆補液”9號液將苗床及小拱棚噴霧一遍(該技術采用拉桿式人工噴霧器人工噴霧，以更好的調節噴霧強度)，強度以葉面不滴液為宜。
(5)接種后的管理溫度曼地亞紅豆杉4-10月份接種苗管理，白天一般棚內溫度控制在25-28度為宜，若溫度過高靠噴霧調節水分降溫，若溫度過低則采用封棚口的方法增溫，晚上一般封一半棚口(即留小口)，棚內溫度一般控制在15-20度，但要注意通風。
曼地亞紅豆杉11月至次年3月份接種苗管理，白天一般棚內溫度控制在12-16度(苗床鋪設地熱線更佳)，溫度過低可封棚控制溫度，但要隨時通風。晚上一般棚內溫度控制在8-12度為宜。
濕度(水分)濕度管理主要有棚內濕度，接種苗葉面濕度和苗床濕度管理。4-10份接種，棚內濕度要求要大，接種苗濕度要求時時保持一層薄薄的水膜，即干即補(補水工具為拉桿式噴霧器，方法為人工噴霧，若采用自動噴霧或電腦控制噴霧則達不到理想的效果，成活率降低)，苗床濕度要求也要大。其余時間接種，棚內濕度要求小，接種苗濕度也要求時時保持一層薄薄的水膜，即干即補，苗床濕度要求相對較小。
光照4-10月份接種苗白天要進行遮光處理，光照較強時可用75％遮光網遮光，必要時可用2層遮光網(接種材料上有部分葉片，適當的光照可進行光合作用，產生部分養料)。其余時間接種，可根據實際情況進行適當遮光或不遮光。遮光網一般搭建在育苗棚上方2米處。
通風(氧氣及二氧化碳)通風在育苗過程中非常重要，氣溫過高時要敞開兩端棚口，經常通風，氣溫過低時也要根據實際情況間隔式通風。通風可交換棚風外空氣，排出廢氣，增強氧氣及二氧化碳，增加曼地亞紅豆杉的光合作用，并可減少病害的發生。
養分(營養)曼地亞紅豆杉在育苗過程中，要消耗大量的養料。為此在整個育苗過程中，配制了適合曼地亞紅豆杉的一套補液。具體施用方案如下“G·P克隆補液”9號施用時間第1、11、19、27、35天“G·P克隆補液”2號施用時間第4、12、20、28天“G·P克隆補液”3號施用時間第5、13、21、29天“G·P克隆補液”6號施用時間第6、14、22、30天“G·P克隆補液”7號施用時間第7、15、23、31天“G·P克隆補液”8號施用時間第8、16、24、32天“G·P克隆補液”4號施用時間第9、17、25、33天“G·P克隆補液”5號施用時間第10、18、26、34天
(6)生根、煉苗及出圃經過培養，第25天時，育苗床即有60％左右的曼地亞紅豆杉生根，到第30天時，生根率可達99％。第30-35天，逐漸減輕噴霧強度，第36天時停止補液的施用，即可將小拱棚掀開進行煉苗，到第50天時，小苗已經發出嫩芽，即可進行出圃移植或進行繼代繁育。
實例二本實例中的各項準備工作和配套技術管理方法均與實例一一致，不同的是“G·P克隆補液”的配制原料重量比不同，詳細情況如下A本實例中“G·P克隆補液”1號液各原料的重量配比是IBA(吲哚丁酸) 1590mgNAA(萘乙酸) 248mg6-BA(6-芐基氨基嘌呤 0.48mg蒸餾水加至1000mlB本實例中“G·P克隆補液”2號液各原料的重量配比是KNO3(硝酸鉀)1590mgCaCl2·2H2O(氯化鈣)398mg蒸餾水加至1000mlC本實例中“G·P克隆補液”3號液各原料的重量配比是NH4NO3(硝酸銨)1445mgMgSO4·7H2O(硫酸鎂) 326mgKH2PO4(磷酸二氫鉀)98mg蒸餾水 加至1000mlD本實例中“G·P克隆補液”4號液各原料的重量配比是MnSO4·4H2O(硫酸錳) 19.8mgZnSO4·7H2O(硫酸鋅) 10.5mgH3BO3(硼酸) 9.8mg蒸餾水 加至1000mlE本實例中“G·P克隆補液”5號液各原料的重量配比是Na2MoO4·2H2(鉬酸鈉) 0.22mgCuSO4·5H2O(硫酸銅) 0.028mgCoCl2·6H2O(氯化鈷) 0.026mg
KI(碘化鉀) 0.98mg蒸餾水 加至1000mlF本實例中“G·P克隆補液”6號液各原料的重量配比是FeSO4·7H2O(硫酸鐵) 49.5mgNa2-EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)； 39mg蒸餾水 加至1000mlG本實例中“G·P克隆補液”7號液各原料的重量配比是Vit.B6(鹽酸吡哆辛)0.79mgGly(甘氨酸) 2.26mg肌醇 76mg椰乳 124.6mg蒸餾水加至1000mlH本實例中“G·P克隆補液”8號液各原料的重量配比是C2H22O11(蔗糖) 15940mg蒸餾水加至1000mlI本實例中“G·P克隆補液”9號液各原料的重量配比是過氧化氫 88500mg蒸餾水加至1000ml實例三本實例中的各項準備工作和配套技術管理方法均與實例一一致，不同的是“G·P克隆補液”的配制原料重量比不同，詳細情況如下A本實例中“G·P克隆補液”1號液各原料的重量配比是IBA(吲哚丁酸) 1610mgNAA(萘乙酸) 255mg6-BA(6-芐基氨基嘌呤) 0.45mg蒸餾水加至1000mlB本實例中“G·P克隆補液”2號液各原料的重量配比是KNO3(硝酸鉀) 1610mgCaCl2·2H2O(氯化鈣) 402mg蒸餾水 加至1000mlC本實例中“G·P克隆補液”3號液各原料的重量配比是
NH4NO3(硝酸銨) 1450mgMgSO4·7H2O(硫酸鎂) 332mgKH2PO4(磷酸二氫鉀) 105mg蒸餾水 加至1000mlD本實例中“G·P克隆補液”4號液各原料的重量配比是MnSO4·4H2O(硫酸錳) 21mgZnSO4·7H2O(硫酸鋅) 12mgH3BO3(硼酸) 10mg蒸餾水 加至1000mlE本實例中“G·P克隆補液”5號液各原料的重量配比是Na2MoO4·2H2(鉬酸鈉)0.29mgCuSO4·5H2O(硫酸銅) 0.03mgCoCl2·6H2O(氯化鈷) 0.033mgKI(碘化鉀) 1mg蒸餾水 加至1000mlF本實例中“G·P克隆補液”6號液各原料的重量配比是FeSO4·7H2O(硫酸鐵) 52mgNa2-EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)； 40mg蒸餾水 加至1000mlG本實例中“G·P克隆補液”7號液各原料的重量配比是Vit.B6(鹽酸吡哆辛) 0.8mgGly(甘氨酸) 2.6mg肌醇 78.5mg椰乳 127.5mg蒸餾水 加至1000mlH本實例中“G·P克隆補液”8號液各原料的重量配比是C2H22O11(蔗糖)16050mg蒸餾水 加至1000mlI本實例中“G·P克隆補液”9號液各原料的重量配比是過氧化氫 105000mg蒸餾水 加至1000ml
為證明本發明的實施情況，發明人將第一個實例實施情況進行了全面的實驗，實驗情況如下1.實驗材料曼地亞紅豆杉枝條。
2.材料提供單位重慶遠大生態農業發展有限公司。
3.實驗方法實驗方法及所有的材料準備，步驟，補液配制均與第一個實例相同，實驗結果如下表一愈傷組織產生情況結果表
表二生根情況結果表
表二發芽情況結果表
4、實驗結論①曼地亞紅豆杉各種枝條均可用此發明方法繁殖。
②本發明可使曼地亞紅豆杉在25天左右生根，30天內生根率達到99％。
③本發明可在50天內進行第二代快速繁殖，每株小苗可擴繁8-10株。
④本發明可以在較短的時間內，獲得大量的曼地亞紅豆杉種苗，對保護我國紅豆杉資源，推廣種植起決定性因素。
⑤本發明不與現有曼地亞紅豆杉繁殖技術雷同，是一項全新的曼地亞紅豆杉繁殖方法，在我國還沒有相關技術出現。
權利要求
1.一種曼地亞紅豆杉快速繁殖方法，其特征在于按如下步驟進行(1)育苗床及育苗棚的準備A育苗床以西偏5°的方向作床，苗床長8米，寬2.7米，床中深挖一地溝，溝長8米，寬30cm，深40cm，地溝將苗床分成相等的兩個小苗床，各寬1.2米；B在苗床上方用竹片搭小拱棚，要求棚高12米，棚長8米；并覆白色塑料膜，膜長11米，兩棚口分別下垂1.5用以覆蓋棚口；C將河沙或沙質土平鋪在小苗床上，厚度為5cm，鋪后要求沙層松軟，并用高錳酸鉀800倍液將沙層消毒，將棚口塑料膜拉下蓋住棚口，24小時后掀開塑料膜備用；(2)配制適合曼地亞紅豆杉生長的一套補液“G·P克隆補液”1號IBA(吲哚丁酸) 1540～1660mgNAA(萘乙酸) 242～265mg6-BA(6-芐基氨基嘌呤) 0.4～0.56mg蒸餾水加至1000ml要點根據濃度配制出混合液，用少量的95％的酒精溶解IBA和NAA，后再加入適量的水。6-BA先用1mol·L-1的HCl溶解，再加水定溶。配制完畢后，用酸度計測量其PH值，該溶液的PH值為6.0，若偏酸用1mol·L-1NaOH來調節，若偏堿用1mol·L-1HCl來調節。“G·P克隆補液”2號KNO3(硝酸鉀)1580～1620mgCaCl2·2H2O(氯化鈣)395～410mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”3號NH4NO3(硝酸銨) 1440～1460mgMgSO4·7H2O(硫酸鎂)325～335mgKH2PO4(磷酸二氫鉀) 96～110mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”4號MnSO4·4H2O(硫酸錳) 18.5～22.5mgZnSO4·7H2O(硫酸鋅) 10～12.5mgH3BO3(硼酸) 9.6～11mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”5號Na2MoO4·2H2(鉬酸鈉) 0.2～0.3mgCuSO4·5H2O(硫酸銅) 0.025～0.035mgCoCl2·6H2O(氯化鈷) 0.025～0.035mgKI(碘化鉀) 0.85～1.24mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”6號FeSO4·7H2O(硫酸鐵) 46～53mgNa2-EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)；38.5～45mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”7號Vit.B6(鹽酸吡哆辛) 0.78～0.85mgGly(甘氨酸) 2.25～2.65mg肌醇75.5～80mg椰乳120～128mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”8號C2H22O11(蔗糖) 15800～16150mg蒸餾水 加至1000ml“G·P克隆補液”9號過氧化氫85000～120000mg蒸餾水 加至1000ml(3)母本繁育材料的準備將曼地亞紅豆杉的枝條用鋒利的刀片或剪刀從母樹上采集下來，穗條不需消毒；保持曼地亞紅豆杉枝條的溫度和濕度，在暗光條件下將枝條切成0.5cm左右長的莖段或莖尖，保留葉片，下切口保持平口；(4)接種將切好的莖段或莖尖材料的下切口在“G·P克隆補液”1號液中速蘸，速蘸時間不超過1秒，材料浸蘸深度為0.5～0.15cm；將浸蘸后的材料立即接種在經處理的小拱棚內的沙床上，要求沙床濕度以沙拳捏不成團為宜，接種深度為下切口接觸沙床母本材料不倒為宜，接種密度為每平方米800-1000株；接種完畢后，用“G·P克隆補液”9號液將苗床及小拱棚噴霧一遍，強度以葉面不滴液為宜；(5)接種后的管理溫度曼地亞紅豆杉4-10月份接種苗管理，白天一般棚內溫度控制在25-28度為宜，晚上封一部分棚口，棚內溫度控制在15-20度，保證良好的通風；曼地亞紅豆杉11月至次年3月份接種苗管理，白天棚內溫度控制在12-16度，晚上棚內溫度控制在8-12度；濕度濕度管理主要有棚內濕度，接種苗葉面濕度和苗床濕度管理；4-10份接種，棚內濕度要求要大，接種苗濕度要求時時保持一層薄薄的水膜，即干即補，補水工具為拉桿式噴霧器，方法為人工噴霧，苗床濕度要求也要大，其余時間接種，棚內濕度要求小，接種苗濕度也要求時時保持一層薄薄的水膜，即干即補，苗床濕度要求相對較小；光照4-10月份接種苗白天要進行遮光處理，光照較強時可用75％遮光網遮光，必要時可用2層遮光網；其余時間接種，可根據實際情況進行適當遮光或不遮光，遮光網一般搭建在育苗棚上方2米處；通風氣溫過高時要敞開兩端棚口，經常通風，氣溫過低時也要根據實際情況間隔式通風；養分在整個育苗過程中，分階段施加適合曼地亞紅豆杉生長的一套補液，具體施用方案如下“G·P克隆補液”9號施用時間第1、11、19、27、35天“G·P克隆補液”2號施用時間第4、12、20、28天“G·P克隆補液”3號施用時間第5、13、21、29天“G·P克隆補液”6號施用時間第6、14、22、30天“G·P克隆補液”7號施用時間第7、15、23、31天“G·P克隆補液”8號施用時間第8、16、24、32天“G·P克隆補液”4號施用時間第9、17、25、33天“G·P克隆補液”5號施用時間第10、18、26、34天說明“G·P克隆補液”2-9號均為噴霧施用，專用于曼地亞紅豆杉的礦物元素的補充；育苗過程中共用補液35天，其中第2-3天不用任何補液，每天補液施用時間為最后一次噴霧時間，噴霧強度以葉片不滴液為宜；(6)生根、煉苗及出圃經過培養，第25天時，育苗床即有60％左右的曼地亞紅豆杉生根，到第30天時，生根率可達99％，第30-35天，逐漸減輕噴霧強度，第36天時停止補液的施用，即可將小拱棚掀開進行煉苗，到第50天時，小苗已經發出嫩芽，即可進行出圃移植或進行繼代繁育。
2.按照權利要求1所述的曼地亞紅豆杉快速繁殖方法，其特征在于A所說的“G·P克隆補液”1號液中各原料的重量配比是IBA(吲哚丁酸) 1585～1610mgNAA(萘乙酸) 248～255mg6-BA(6-芐基氨基嘌呤) 0.45～0.53mg蒸餾水加至1000mlB所說的“G·P克隆補液”2號液中各原料的重量配比是KNO3(硝酸鉀) 1590～1610mgCaCl2·2H2O(氯化鈣) 398～405mg蒸餾水加至1000mlC所說的“G·P克隆補液”3號液中各原料的重量配比是NH4NO3(硝酸銨) 1445～1455mgMgSO4·7H2O(硫酸鎂)326～332mgKH2PO4(磷酸二氫鉀) 98～105mg蒸餾水 加至1000mlD所說的“G·P克隆補液”4號液中各原料的重量配比是MnSO4·4H2O(硫酸錳) 19.5～21.5mgZnSO4·7H2O(硫酸鋅) 10.512mgH3BO3(硼酸) 9.8～10.05mg蒸餾水加至1000mlE所說的“G·P克隆補液”5號液中各原料的重量配比是Na2MoO4·2H2(鉬酸鈉) 0.22～0.29mgCuSO4·5H2O(硫酸銅) 0.026～0.032mgCoCl2·6H2O(氯化鈷) 0.026～0.034mgKI(碘化鉀)0.95～1.04mg蒸餾水加至1000mlF所說的“G·P克隆補液”6號液中各原料的重量配比是FeSO4·7H2O(硫酸鐵) 48～52.5mgNa2-EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)； 39～44mg蒸餾水 加至1000mlG所說的“G·P克隆補液”7號液中各原料的重量配比是Vit.B6(鹽酸吡哆辛) 0.79～0.82mgGly(甘氨酸)2.26～2.62mg肌醇 76～78.5mg椰乳 124～127.5mg蒸餾水 加至1000mlH所說的“G·P克隆補液”8號液中各原料的重量配比是C2H22O11(蔗糖) 15940～16050mg蒸餾水 加至1000mlI所說的“G·P克隆補液”9號液中各原料的重量配比是過氧化氫 88000～110000mg蒸餾水 加至1000ml
3.按照權利要求1所述的曼地亞紅豆杉快速繁殖方法，其特征在于A所說的“G·P克隆補液”1號液中各原料的重量配比是IBA(吲哚丁酸) 1600mgNAA(萘乙酸)250mg6-BA(6-芐基氨基嘌呤) 0.5mg蒸餾水 加至1000mlB所說的“G·P克隆補液”2號液中各原料的重量配比是KNO3(硝酸鉀) 1600mgCaCl2·2H2O(氯化鈣) 400mg蒸餾水加至1000mlC所說的“G·P克隆補液”3號液中各原料的重量配比是NH4NO3(硝酸銨) 1450mgMgSO4·7H2O(硫酸鎂) 330mgKH2PO4(磷酸二氫鉀) 100mg蒸餾水加至1000mlD所說的“G·P克隆補液”4號液中各原料的重量配比是MnSO4·4H2O(硫酸錳) 20mgZnSO4·7H2O(硫酸鋅) 11mgH3BO3(硼酸) 10mg蒸餾水加至1000mlE所說的“G·P克隆補液”5號液中各原料的重量配比是Na2MoO4·2H2(鉬酸鈉) 0.25mgCuSO4·5H2O(硫酸銅)0.03mgCoCl2·6H2O(氯化鈷)0.03mgKI(碘化鉀) 1mg蒸餾水 加至1000mlF所說的“G·P克隆補液”6號液中各原料的重量配比是FeSO4·7H2O(硫酸鐵) 50mgNa2-EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)； 40mg蒸餾水 加至1000mlG所說的“G·P克隆補液”7號液中各原料的重量配比是Vit.B6(鹽酸吡哆辛) 0.8mgGly(甘氨酸)2.6mg肌醇 78mg椰乳 125mg蒸餾水 加至1000mlH所說的“G·P克隆補液”8號液中各原料的重量配比是C2H22O11(蔗糖) 16000mg蒸餾水 加至1000mlI所說的“G·P克隆補液”9號液中各原料的重量配比是過氧化氫 100000mg蒸餾水 加至1000ml
全文摘要
本發明涉及一種曼地亞紅豆杉快速繁殖方法，它利用曼地亞紅豆杉的“全能性”和“全息性”，以植物組織培養為原理，并結合常規扦插育苗和全光霧扦插育苗技術，取曼地亞紅豆杉器官的一部分(曼地亞紅豆杉的微型材料)經研發配制的“G·P克隆補液”處理后，直接接種在大田的沙床(或沙質土)上，后結合“G·P克隆補液”和配套管理技術進行管理，約經25天即可生根。該發明具有取材小、培養速度快、繁殖率高、成本低、易推廣、繁殖種苗不變異等特點，突破了曼地亞紅豆杉原有繁育技術的取材大、繁育時間長、成活率低、成本高、難推廣等技術難題。
文檔編號A01G23/00GK1451267SQ0311788
公開日2003年10月29日 申請日期2003年5月17日 優先權日2003年5月17日
發明者邱子林, 趙玖學, 周波 申請人:重慶遠大生態農業發展有限公司, 重慶黑格實業集團