專利名稱：盾葉薯蕷無(wú)菌克隆系珠芽誘導(dǎo)及其工廠化生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種盾葉薯蕷無(wú)菌克隆系珠芽誘導(dǎo)及其工廠化生產(chǎn)方法。
現(xiàn)有技術(shù)未見有盾葉薯蕷無(wú)菌克隆系珠芽誘導(dǎo)及其工廠化生產(chǎn)方法的報(bào)道。
本發(fā)明提供了一種盾葉薯蕷無(wú)菌克隆系珠芽誘導(dǎo)及其工廠化生產(chǎn)方法，該方法成功地實(shí)現(xiàn)了盾葉薯蕷無(wú)菌克隆系珠芽的誘導(dǎo)，解決了愈傷組織分化苗容易變異以及盾葉薯蕷無(wú)菌短枝生根難的問(wèn)題，并提高了移栽成活率。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案盾葉薯蕷無(wú)菌克隆系珠芽誘導(dǎo)及其工廠化生產(chǎn)方法，包括盾葉薯蕷無(wú)菌克隆珠芽誘導(dǎo)、生根、移栽步驟，取盾葉薯蕷一年生植株的幼嫩頂芽和腋芽為外植體，清洗后，在超菌臺(tái)上用75％酒精浸泡30s，再用0.1％升汞滅菌5-8min，最后用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，切成帶單個(gè)腋芽或頂芽的小節(jié)，初代培養(yǎng)基為MS無(wú)激素培養(yǎng)基PH5.8，在光照強(qiáng)度1000LX，光照時(shí)間12h/d，溫度25±1℃的培養(yǎng)條件下選取培養(yǎng)基6-BA0.2mg/l＋NAA0.1mg/l＋I(xiàn)AA0.1mg/l＋PH5.8進(jìn)行株芽誘導(dǎo)，然后轉(zhuǎn)入IAA0.5mg/l＋NAA0.5mg/l的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，珠芽生根20天后，把溫度降到23＋1℃培養(yǎng)1周，洗去苗根部的培養(yǎng)基，用0.1％的殺菌劑浸泡5min，栽于河沙或河沙∶腐質(zhì)土＝1∶1的混合土中，保持基質(zhì)濕度80％左右，外加遮光網(wǎng)和塑料膜覆蓋。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明存在的優(yōu)益效果為1、用生物技術(shù)，在無(wú)菌條件下誘導(dǎo)盾葉薯蕷產(chǎn)生珠芽，并篩選出珠芽發(fā)生率為86％、生根率為100％的培養(yǎng)基配方。經(jīng)查新，本發(fā)明的盾葉薯蕷無(wú)菌克隆系珠芽誘導(dǎo)及其工廠化生產(chǎn)方法尚未見報(bào)道。
2、本發(fā)明盾葉薯蕷無(wú)菌克隆系珠芽誘導(dǎo)的成功，不但解決了愈傷組織分化苗容易變異的問(wèn)題，同時(shí)還克服了盾葉薯蕷無(wú)菌短枝生根的難題，并提高了移栽成活率。
下面結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
實(shí)施例11、材料與方法取盾葉薯蕷一年生植株的幼嫩頂芽和腋芽為外植體，用肥皂和自來(lái)水清洗后，在超菌臺(tái)上用75％酒精浸泡30s，再用0.1％升汞滅菌5~8min，最后用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，切成帶單個(gè)腋芽或頂芽的小節(jié)。初代培養(yǎng)基為MS無(wú)激素培養(yǎng)基PH5.8)。在光照強(qiáng)度1000LX，光照時(shí)間12h/d，溫度25±1℃的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)基種類、激素和激素濃度對(duì)盾葉薯蕷生長(zhǎng)、株芽誘導(dǎo)及株芽生根的影響。2.1不同培養(yǎng)基對(duì)盾葉薯蕷生長(zhǎng)的影響5種培養(yǎng)基的激素均為6-BA0.2mg/l＋NAA0.01＋PH5.8，試驗(yàn)結(jié)果(表1)表明，MS培養(yǎng)基較適宜盾葉薯蕷的生長(zhǎng)。
表1小同培養(yǎng)基對(duì)盾葉薯蕷生長(zhǎng)的影響(接種60d的統(tǒng)計(jì)結(jié)果)
2.2不同激素及不同激素濃度對(duì)盾葉薯蕷珠芽誘導(dǎo)的影響試驗(yàn)結(jié)果表明(表2)，珠芽發(fā)生與激素有密切關(guān)系，誘導(dǎo)數(shù)量的多少與6-BA有關(guān)，珠芽大小與生長(zhǎng)素有關(guān)。最佳的激素組合為6-BA0.2＋I(xiàn)AA0.1＋NAA0.1。轉(zhuǎn)接60d后珠芽誘導(dǎo)率達(dá)86％，珠芽直徑大小0.17cm。珠芽產(chǎn)生的部位在節(jié)上，不影響叢芽和其它側(cè)芽的生長(zhǎng)，均可作為下一代的繁殖材料。2.3不同激素及不同激素濃度對(duì)盾葉薯蕷珠芽生根的影響從表3可以看出，激素種類及其不同的濃度對(duì)盾葉薯蕷珠芽生根影響不顯著，各個(gè)試驗(yàn)的生根率都能達(dá)到90％以上。因此，盾葉薯蕷珠芽的生根比較容易，但在IAA0.5＋NAA0.5的MS培養(yǎng)基中能達(dá)到最好的生根效果(100％)。
表2不同激素及不同激素濃度對(duì)盾葉薯蕷珠芽誘導(dǎo)的影響(接種60d的統(tǒng)計(jì)數(shù))
表3不同激素及不同激素濃度對(duì)盾葉薯蕷珠芽生根的影響(接種30d的統(tǒng)計(jì)數(shù))
2.4珠芽生根苗移栽珠芽生根20d后，把溫度降到23＋1℃培養(yǎng)1周左右，取出苗用自來(lái)水洗去根部的培養(yǎng)基，用0.1％的多菌靈浸泡5min，栽于河沙或河沙腐質(zhì)土＝1∶1的混合土中。保持基質(zhì)濕度80％左右，外加遮光網(wǎng)和塑料膜覆蓋，一周后揭膜，30d后的成活率達(dá)90％以上。盾葉薯蕷無(wú)菌克隆系珠芽誘導(dǎo)的成功，不但解決了愈傷組織分化苗容易變異的問(wèn)題，同時(shí)還克服了盾葉薯蕷無(wú)菌短枝生根的難題，并提高了移栽成活率。
權(quán)利要求
1.盾葉薯蕷無(wú)菌克隆系珠芽誘導(dǎo)及其工廠化生產(chǎn)方法，包括盾葉薯蕷無(wú)菌克隆珠芽誘導(dǎo)、生根、移栽步驟，其特征是取盾葉薯蕷一年生植株的幼嫩頂芽和腋芽為外植體，清洗后，在超菌臺(tái)上用75％酒精浸泡30s，再用0.1％升汞滅菌5-8min，最后用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，切成帶單個(gè)腋芽或頂芽的小節(jié)，初代培養(yǎng)基為MS無(wú)激素培養(yǎng)基PH5.8，在光照強(qiáng)度1000LX，光照時(shí)間12h/d，溫度25±1℃的培養(yǎng)條件下選取培養(yǎng)基6-BA0.2mg/l＋NAA0.1mg/l＋I(xiàn)AA0.1mg/l＋PH5.8進(jìn)行株芽誘導(dǎo)，然后轉(zhuǎn)入IAA0.5mg/l＋NAA0.5mg/l的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，珠芽生根20天后，把溫度降到23＋1℃培養(yǎng)1周，洗去苗根部的培養(yǎng)基，用0.1％的殺菌劑浸泡5min，栽于河沙或河沙∶腐質(zhì)土＝1∶1的混合土中，保持基質(zhì)濕度80％左右，外加遮光網(wǎng)和塑料膜覆蓋。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域,提供了一種盾葉薯蕷無(wú)菌克隆系珠芽誘導(dǎo)及其工廠化生產(chǎn)方法,該方法成功地實(shí)現(xiàn)了盾葉薯蕷無(wú)菌克隆系珠芽的誘導(dǎo),解決了愈傷組織分化苗容易變異以及盾葉薯蕷無(wú)菌短枝生根難的問(wèn)題,并提高了移栽成活率。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1335058SQ0112880
公開日2002年2月13日 申請(qǐng)日期2001年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月29日
發(fā)明者羅桂芬, 胡虹, 呂春朝, 李樹云, 王 華 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所