專利名稱：用6－dmap誘導牡蠣三倍體的育苗方法
技術領域：
本發明公開了一種用6-DMAP(6-二甲氨基嘌呤)誘導牡蠣三倍體的育苗方法，屬于海洋生物養殖技術領域。主要用于牡蠣養殖。
在現有技術中，作為我國貝類養殖支柱產業的牡蠣養殖，一直是養二倍體牡蠣。這種二倍體牡蠣，由于在其繁殖季節里必然要產卵或排精，因而使其軟體消瘦，產量低，而且其風味和品質均受到很大影響。
本發明的目的在于提供一種方法比較簡單實用，可操作性強，能夠有效地和大規模地培育出育性差、生長快、品質優，一年四季都能保持鮮美口味的三倍體牡蠣苗種，為牡蠣養殖提供優良品種并在生產上能夠直接推廣應用的用6-DMAP誘導牡蠣三倍體的育苗方法。
根據三倍體育種的一般機理和6-DMAP的性能特點，針對現有技術中所存在的主要問題，本發明的基本構思是通過解剖方法獲取牡蠣的精卵，經對卵子體外促熟(卵子從性腺中剝離出后，用人工的方法如用維生素液浸泡法使其在體外加速成熟)后，人工受精，并利用6-DMAP作為誘導劑，處理牡蠣的受精卵，抑制第二極體的釋放，從而獲得三倍體。
本發明所述的用6-DMAP誘導牡蠣三倍體的育苗方法，其特征在于該方法包括下列步驟1．解剖打開貝殼進行檢查，鏡檢分雌雄，隔離存放；2．取卵先解剖雌性生殖腺取出卵子，經過濾后進行體外促熟并將環境溫度調至23～25℃；3．取精子再解剖雄性生殖腺取出精子并通過鏡檢選取活潑的成熟精子；4．人工授精按雌雄比=15～30∶1的比例將上述的3選取的精子放入卵液中并迅速均勻攪動使卵子受精；5．誘導當第一極體出現率達30～50％時，往受精卵液中按30～90mg/L加入6-DMAP，處理10～15分鐘；6．分池孵化；7．擇優選幼當胚胎發育至D形幼蟲時，將優良的D形幼蟲選入其它池進行幼蟲培育。
上述的步驟2中對卵子的過濾先使用100～250目篩絹，再用500目篩絹過濾。
在上述的第4和第5兩個步驟之間還可在受精后5～15分鐘后對受精卵進行洗卵。
在上述的最后一個步驟7之前，即當胚胎發育至4～16細胞期時還可分別用滴片法和壓片法或者用流式細胞計檢查三倍體率。
在上述的步驟6中所述的分池孵化，可按每毫升20～120個受精卵的密度進行分池孵化。
本發明的優點是方法比較簡單，所需儀器設備不多而且全為水產養殖業常用儀器設備，因而培育成本較低，用6-DMAP誘導屬于首創，經濟實惠可操作性強，能直接在生產上大規模推廣應用，三倍體誘導率可穩定在70％以上，用此法育出的苗種養成的三倍體牡蠣，育性差，生長快，產量高，養成單產比二倍體增產20％以上，品質優，一年四季保持鮮美的口味，倍受人們的青睞。
本發明的實施例之一是；取體長10厘米以上體質健壯并經過親貝蓄養促熟的太平洋牡蠣，打開貝殼先用肉眼觀察再用顯微鏡復查分選雌雄并分別隔離，然后分別取出它們的生殖腺，隔離存放；先解剖(撕破)雌性生殖腺取出卵子，經過先用200目篩絹過濾再用500目篩絹過濾后進行體外促熟；再解剖(撕破)雄性生殖腺取出精子并通過鏡檢選出活潑之成熟精子；按照雌雄比=20∶1的比例將選出的精子放入1～2千萬個卵/升的卵液中，并迅速均勻攪動使卵在溫度24℃條件下人工受精；10分鐘后進行洗卵；當第一極體出現率達40％時，往受精卵液中按60mg/L加6-DMAP，處理13分鐘后即按每毫升80個受精卵的密度分池孵化；當胚胎發育至4細胞期時用滴片法檢查，發育至8～16細胞期時用壓片法檢查三倍體率；當胚胎發育至D形幼蟲時，將優良的D形幼蟲選入其它池按常規進行幼蟲培育。
實施例之二是將實施例一中的雌雄比改為30∶1；受精溫度改為23℃，受精后5分鐘洗卵，當第一極體出現率達30％時按90mg/L加6-DMAP，處理10分鐘，按每升20個受精卵分池，其它皆同實施例之一。
實施例之三是將實施例之一中的雌雄比例改為15∶1，受精溫度改為25℃，受精后15分鐘洗卵，當第一極體出現率達50％時，按30mg/L加6-DMAP，處理15分鐘，按每毫升120個受精卵分池，其它皆同實施例之一。
作為上述實施例的變更1、受精卵可以不經洗卵，即往受精卵液中加6-DMAP；2、三倍體率的檢查可改為用流式細胞計，也可以不進行這項檢查。
權利要求
1.一種用6-DMAP誘導牡蠣三倍體的育苗方法，其特征在于該方法包括下列步驟1．解剖打開貝殼進行檢查，鏡檢分雌雄，隔離存放；2．取卵先解剖雌性生殖腺取出卵子，經過濾后進行體外促熟并將環境溫度調至23～25℃；3．取精子再解剖雄性生殖腺取出精子并通過鏡檢選取活潑的成熟精子；4．人工授精按雌雄比=15～30∶1的比例將上述的3選取的精子放入卵液中并迅速均勻攪動使卵子受精；5．誘導當第一極體出現率達30～50％時，往受精卵液中按30～90mg/L加入6-DMAP，處理10～15分鐘；6．分池孵化；7．擇優選幼當胚胎發育至D形幼蟲時，將優良的D形幼蟲選入其它池進行幼蟲培育。
2.根據權利要求1所述的用6-DMAP誘導牡蠣三倍體的育苗方法，其特征在于上述的步驟2中對卵子的過濾先使用100～250目篩絹，再用500目篩絹過濾。
3.根據權利要求1所述的用6-DMAP誘導牡蠣三倍體的育苗方法，其特征在于在上述的第4和第5兩個步驟之間還可在受精后5～15分鐘后對受精卵進行洗卵。
4.根據權利要求1所述的用6-DMAP誘導牡蠣三倍體的育苗方法，其特征在于在上述的最后一個步驟7之前，即當胚胎發育至4～16細胞期時還可分別用滴片法和壓片法或者用流式細胞計檢查三倍體率。
5.根據權利要求1所述的用6-DMAP誘導牡蠣三倍體的育苗方法，其特征在于在上述的步驟6中所述的分池孵化，可按每毫升20～120個受精卵的密度進行分池孵化。
全文摘要
一種用6－DMAP誘導牡蠣三倍體的育苗方法,屬海洋生物養殖技術,主要用于牡蠣養殖。其特征是該方法包括:解剖鏡檢分雌雄、先取卵子過濾和體外促熟、再取精子并按雌雄比15～30∶1在23～25℃下進行人工受精、加入6－DMAP誘導、分池孵化、胚胎發育至D形幼蟲時選入它池進行幼蟲培育等步驟。具有方法較簡單,可操作性強,便于直接推廣應用,三倍體率穩定在70%以上,養生長快產量高,品質優,一年四季口味鮮美等優點。
文檔編號A01K61/00GK1308856SQ01107849
公開日2001年8月22日 申請日期2001年2月27日 優先權日2001年2月27日
發明者王如才, 王昭萍, 田傳遠, 于瑞海, 李赟 申請人:青島海洋大學