專利名稱：香桂組織培養(yǎng)快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)的植物再生，尤其是香桂組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
香桂是我國特有的造林樹種，原產(chǎn)于我國四川盆地的南部山區(qū)、海撥500-1500m的石灰?guī)r山地，其材質(zhì)優(yōu)良，枝、葉含有豐富的芳香油，油的主要成份為黃樟油素，可利用其合成洋茉莉醛、新洋茉莉醛、胡椒基丙酮、香蘭素等多種公認(rèn)的名貴花香型、奶香型香料，是外貿(mào)暢銷物資，也是有關(guān)輕工業(yè)的重要原料。
采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可以在短期內(nèi)快速繁殖多種植物，不僅繁殖速率極高，而且會(huì)因是無性繁殖，可以保持原繁殖母株的優(yōu)良性狀，近年來在生產(chǎn)上應(yīng)用越來越廣。植物組織培養(yǎng)技術(shù)的原理是利用植物細(xì)胞的全能性(即組成植物體的每一個(gè)細(xì)胞都具有發(fā)育成為一個(gè)完整個(gè)體的潛在能力)，采取植物體上的單個(gè)細(xì)胞、細(xì)胞團(tuán)、分生組織或器官的一部分，通過人工配制不同營養(yǎng)成份和激素的培養(yǎng)基來培養(yǎng)并調(diào)節(jié)控制其發(fā)育，使這些細(xì)胞、組織等形成成千上萬個(gè)小植株，并且保持了母本植株全部的優(yōu)良性狀，這種方法可以在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的試管苗，并能在人工控制條件的車間內(nèi)一年四季進(jìn)行，因而可以實(shí)現(xiàn)種苗繁殖的工廠化生產(chǎn)，且可以在較少的面積內(nèi)進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，因而無需占用大量土地。目前，我國利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)再生植株的種類已達(dá)1000多種，其中，木本植物100多種，用現(xiàn)有植物組織培養(yǎng)技術(shù)不能直接進(jìn)行香桂組織的培養(yǎng)及快速繁殖。
香桂是木本植物，且含油量高，其組織培養(yǎng)難度大，至今在國內(nèi)外尚未見到利用組織培養(yǎng)技術(shù)成功繁殖香桂的報(bào)道。
本發(fā)明的目的是提供一種適合于香桂組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，使香桂樹苗大大增加，實(shí)現(xiàn)香桂苗的大規(guī)模生產(chǎn)。
本發(fā)明的具體方案是一種香桂組織培養(yǎng)快速繁殖方法，按如下步聚進(jìn)行(1)外植體制備選擇生長健壯，黃樟油素含量高的優(yōu)良香桂植株，取其0.5～2.0cm長莖尖或側(cè)芽切段，或取其分生組織切塊0.2～3mm，用75％酒精浸泡10～30秒，無菌水沖洗1次，置入0.1％HgCl2溶液中滅菌3～15分鐘，在超凈工作臺(tái)上用無菌水沖洗3～5次，每次5分鐘，濾紙吸干后，作為外植體進(jìn)行培養(yǎng)；(2)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)將外植體接種在下述重量配比的原料制成的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織及不定芽產(chǎn)生細(xì)胞分裂素 0.5～10mg生長素 0.05～1.0mg維生素C(或者聚乙烯吡咯烷酮) 0.5～10mg生物素 1～10mg香蕉鮮汁 2～30g蔗糖 30～60gMS(或1/2MS或1/4MS或LS或White或LS)培養(yǎng)基基本組分 2000～5000mg蒸餾水 加至1000ml在17～26℃、每日照光8～14小時(shí)、光照強(qiáng)度1000～4000lx的條件下培養(yǎng)1～2個(gè)月后，將生成的不定芽移入芽生長繁殖培養(yǎng)基中；(3)芽生長繁殖培養(yǎng)將上述(2)步所獲得的不定芽切下接種在下述重量配比的原料制成的芽生長繁殖培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素 0.05～1.0mg生長素 0.01～1.0mg生物素 1～10mg赤霉素 0～3.0mg香蕉鮮汁 2～30g蔗糖 30～60gMS(或1/2MS或1/4MS或LS或White或LS)培養(yǎng)基基本組分 2000～5000mg蒸餾水 加至1000ml在17～26℃、每日照光8～14小時(shí)、光照強(qiáng)度1000～4000lx的條件下培養(yǎng)20～40天后，小芽可迅速長大，長大后將其切成帶芽切段，再接種在芽生長繁殖培養(yǎng)基中擴(kuò)大繁殖，達(dá)到一定數(shù)量后再將其轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中；(4)生根形成試管苗將從基部切下的無根試管苗插入下述重量配比的原料制成的生根培養(yǎng)基中生長素 0.01～5.0mg水解酪蛋白 200～1000mg蔗糖 15～50g1/2MS(或1/4MS)培養(yǎng)基基本組分 2000～3000mg蒸餾水 加至1000ml在17～26℃、每日照光8～14小時(shí)、光照強(qiáng)度5000～10000lx的條件下培養(yǎng)20～45天后，試管苗生根成苗；(5)試管苗馴化移栽將根系發(fā)育良好的試管苗移入溫室，馴化1～2周后，再打開瓶蓋加少量水，練苗2～3天；或者將試管苗直接進(jìn)入試管苗馴化移栽過程，試管苗在馴化、練苗的過程中生根；把經(jīng)練苗后的試管苗移栽在溫室中蛭石或珍珠巖、河沙、腐殖質(zhì)土等組成的營養(yǎng)缽中，以塑料棚覆蓋，2周后再逐漸打開塑料棚，在溫室土壤中生長一個(gè)月后，定植于大田。
本發(fā)明的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中各原料的優(yōu)選重量配比是細(xì)胞分裂素 1.0～5.0mg生長素 0.2～0.6mg維生素C 3～8mg生物素 3～8mg香蕉鮮汁5～15g蔗糖30～50gMS(或1/2MS或1/4MS或LS或White)培養(yǎng)基基本組分 2400～4700mg蒸餾水 加至1000ml本發(fā)明的芽生長繁殖培養(yǎng)基中各原料的優(yōu)選重量配比是細(xì)胞分裂素 0.1～0.8mg生長素 0.05～0.5mg生物素 3～8mg香蕉鮮汁 5～20g蔗糖 30～45gMS(或1/2MS或1/4MS或LS或White)培養(yǎng)基基本組分2400～4700mg蒸餾水 加至1000ml本發(fā)明的生根培養(yǎng)基中各原料的優(yōu)選重量配比是生長素0.1～3.0mg水解酪蛋白400～800mg蔗糖 20～30g1/2MS(或1/4MS)培養(yǎng)基基本組分 2000～2500mg蒸餾水加至1000ml本發(fā)明的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中各原料的最佳重量配比是細(xì)胞分裂素5.5mg生長素0.2mg維生素C 5mg生物素4mg香蕉鮮汁 10g蔗糖 45gMS培養(yǎng)基基本組分 4696.430mg蒸餾水加至1000ml本發(fā)明的芽生長繁殖培養(yǎng)基中各原料的最佳重量配比是細(xì)胞分裂素0.3mg生長素0.2mg生物素4mg香蕉鮮汁 10g
蔗糖 45gMS培養(yǎng)基基本組分 4696.430mg蒸餾水加至1000ml本發(fā)明的生根培養(yǎng)基中各原料的最佳重量配比是生長素 0.5mg水解酪蛋白 500mg蔗糖 25g1/2MS培養(yǎng)基基本組分 2451.430mg蒸餾水 加至1000ml本發(fā)明的芽生長繁殖培養(yǎng)基也可以是將外植體直接種在下述的芽生長繁殖培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素0.3mg生長素0.2mg生物素4mg赤霉素2mg香蕉鮮汁 10g蔗糖 45gMS培養(yǎng)基基本組分 4696.430mg蒸餾水加至1000ml本發(fā)明不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基和芽生長繁殖培養(yǎng)基配比中的細(xì)胞分裂素是6-芐氨基嘌呤或激動(dòng)素或玉米素或玉米素核苷。
本發(fā)明生根培養(yǎng)基配比中的生長素是吲哚丁酸或吲哚乙酸或奈乙酸。
本發(fā)明選用MS作為基本培養(yǎng)基，提供香桂種苗生長所需的大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成份；在發(fā)明的外植體制備及培養(yǎng)階段，加入了維生素C或聚乙烯吡咯烷酮，防止了外植體的褐化與死亡，提高了外植體的成活率和培養(yǎng)的成功率。在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)和芽生長繁殖培養(yǎng)過程中采用的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基和芽生長繁殖培養(yǎng)基配比中細(xì)胞分裂素與生長素的重量比較高，并在兩種培養(yǎng)基中均增加了生物素、香蕉鮮汁，提高了培養(yǎng)基中蔗糖的濃度，從而使得不定芽能早日形成，并迅速生長，以利于獲得更多更健壯的試管苗。在生根形成試管苗過程采用的生根培養(yǎng)基配比中，采用了1/2MS的培養(yǎng)基，將蔗糖濃度降低至2451.430mg，提高光照強(qiáng)度至5000～10000lx，有利于試管苗由異養(yǎng)向自養(yǎng)的轉(zhuǎn)化，大大提高了移栽成活率。
采用本發(fā)明提供的方法在不定芽誘導(dǎo)階段一般20天左右就可開始出現(xiàn)分化，再經(jīng)5～10天培養(yǎng)，即可出現(xiàn)叢生綠苗。在芽生長階段，1個(gè)小芽經(jīng)剪切再進(jìn)一步扦插繁殖，一般20天左右即可長至5～7cm高，具3～8個(gè)新芽。在生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)20～25天后，可見有白色短根出現(xiàn)。如果生根——馴化一次性在溫室中完成，生根馴化時(shí)間可減少在25～30天左右，且整個(gè)苗木生長健壯，移栽成活率高。
利用本辦法可周年繁殖優(yōu)良香桂種苗，一個(gè)外植體一年可繁殖數(shù)千至數(shù)萬株。在繁殖過程中，利用芽生長，長大的苗再切成帶芽切段，再接種于芽生長繁殖培養(yǎng)基中，反復(fù)扦插形成大量的試管苗，再誘導(dǎo)其生根，將根系發(fā)育良好的試管苗移入溫室馴化并移入土壤中，或?qū)⒃嚬苊缜げ逶谏囵B(yǎng)基之后，轉(zhuǎn)入溫室中馴化并同時(shí)生根，可大大縮短培養(yǎng)到成苗的時(shí)間，降低生產(chǎn)成本，并提高成活率。
采用上述方案，本發(fā)明具有培養(yǎng)速度快、繁殖率高、工藝流程短、試管苗移栽成活率高、繁殖后代不變異、易于操作、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)，可進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，采用組培快繁技術(shù)比采用傳統(tǒng)的種子育苗方法制得的香桂產(chǎn)品性能指標(biāo)好。如下表所示
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。
實(shí)施例一1.外植體制備取香桂莖尖或側(cè)芽，洗潔精清洗1～2次，流水沖洗干凈，濾紙吸干。將取下的莖尖或側(cè)芽在75％酒精中浸泡10-30秒，無菌水沖洗1次，置入0.1％HgCl2溶液中滅菌8分鐘，在超凈工作臺(tái)上用含有5～10mg/L的維生素C的無菌水沖洗3～5次，每次5分鐘，濾紙吸干。
2.不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)上，用常規(guī)無菌操作方法將無菌水沖洗干凈、濾紙吸干的香桂莖尖或側(cè)芽頂部切下5～15mm。接種在下述重量配比的原料制成的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。
6-芐氨基嘌呤2.0mg吲哚丁酸0.2mg維生素C 5mg生物素 4mg香蕉鮮汁10g蔗糖25g1/2MS培養(yǎng)基基本組分 2451.43mg蒸餾水 加至1000ml在24+2℃，每日照光14小時(shí)、光照強(qiáng)度5000～6000lx的條件下培養(yǎng)1～2個(gè)月后，將生成的不定芽移入芽生長繁殖培養(yǎng)基中。
3.芽生長繁殖培養(yǎng)香桂莖尖、側(cè)芽在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中3天后開始膨長，20-40天后開始形成多個(gè)不定芽，當(dāng)不定芽長大后，將其移入在下述重量配比的芽生長繁殖培養(yǎng)基中6-芐氨基嘌呤 1.0mg吲哚丁酸 0.2mg生物素 4mg
香蕉鮮汁10g蔗糖35g1/2MS培養(yǎng)基基本組分 2451.43mg蒸餾水 加至1000ml在芽生長繁殖培養(yǎng)基上，經(jīng)30天培養(yǎng)，不定芽迅速長大成為無根苗，苗高3-8cm，帶3-8片葉及多個(gè)側(cè)芽，此時(shí)將其切下，并切成帶芽切段，再轉(zhuǎn)入上述培養(yǎng)基中，可促進(jìn)芽進(jìn)一步擴(kuò)大繁殖。
4.生根形成試管苗當(dāng)無根試管苗長至3-5cm高，具4-6片葉片時(shí)，將其從基部剪斷并插入下述重量配比的原料制成的生根培養(yǎng)基中吲哚丁酸 0.5mg水解酪蛋白 500mg蔗糖 25g1/2MS培養(yǎng)基基本組分2451.430mg蒸餾水 加至1000ml培養(yǎng)室溫度及光照條件24+2℃，每日照光14小時(shí)、光照強(qiáng)度5000～6000lx。
5.試管苗馴化移栽當(dāng)試管苗根系發(fā)育良好，具5-8片葉片時(shí)，將其移入溫室馴化2周。移栽前，打開瓶蓋2-3天，加少量水以使培養(yǎng)基軟化，取出試管苗，將其根系上的培養(yǎng)基洗干凈，移栽于蛭石或珍珠巖、河沙、腐殖質(zhì)土等組成的營養(yǎng)缽中。第一次澆透水，注意保溫、保濕，并置于塑料棚下，溫度為20+2℃，溫度為95～100％。兩周后，逐漸打開塑料棚，在溫室中繼續(xù)生長一個(gè)月后，定植于大田。
實(shí)施例二先進(jìn)行外植體制備取香桂莖尖或側(cè)芽，洗潔精清洗1-2次，流水沖洗干凈，濾紙吸干。將取下的莖尖或側(cè)芽在75％酒精中浸泡10-30秒，無菌水沖洗1次，置入0.1％HgCl2溶液中滅菌10分鐘，在超凈工作臺(tái)上用含有5～10mg/L的聚乙烯吡咯烷酮的無菌水沖洗3～5次，每次5分鐘，濾紙吸干。然后按實(shí)施例一的步聚進(jìn)行制備，只是各培養(yǎng)基的重量配比和原料成份不同。
本實(shí)施例中不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為下述重量配比的原料制成激動(dòng)素0.5mg吲哚乙酸 0.05mg0.2～0.6mg維生素C 0.5mg生物素1mg香蕉鮮汁 2g蔗糖 30gLS培養(yǎng)基基本組分 4696.430mg蒸餾水加至1000ml該實(shí)施例中芽生長繁殖培養(yǎng)過程中的芽生長繁殖培養(yǎng)基為下述重量配比的原料制成激動(dòng)素 0.05mg吲哚乙酸 0.01mg0.2～0.6mg生物素 1mg香蕉鮮汁 2g蔗糖 30gLS培養(yǎng)基基本組分 4696.430mg蒸餾水 加至1000ml該實(shí)施例中生根形成試管苗培養(yǎng)過程中的生根培養(yǎng)基為下述重量配比的原料制成吲哚乙酸 0.01mg水解酪蛋白 800mg蔗糖 15g1/2MS培養(yǎng)基基本組分 2451.430mg蒸餾水 加至1000ml其他過程與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例三先進(jìn)行外植體制備取香桂莖尖或側(cè)芽，洗潔精清洗1-2次，流水沖洗干凈，濾紙吸干。將取下的莖尖或側(cè)芽在75％酒精中浸泡10-30秒，無菌水沖洗1次要入0.1％HgCl2溶液中滅菌12分鐘，在超凈工作臺(tái)上用含有5～10mg/L的生素C的無菌水沖洗3～5次，每次5分鐘，濾紙吸干。然后按實(shí)施例一的步聚進(jìn)行制備，只是各培養(yǎng)基的重量配比和原料成份不同。
本實(shí)施例中不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為下述重量配比的原料制成6-芐氨基嘌呤10.0mg吲哚丁酸1.0mg0.2～0.6mg聚乙烯吡咯烷酮 10mg生物素 10mg香蕉鮮汁30g蔗糖30gWhite培養(yǎng)基基本組分 4696.430mg蒸餾水 加至1000ml該實(shí)施例中芽生長繁殖培養(yǎng)過程中的芽生長繁殖培養(yǎng)基為下述重量配比的原料制成6-芐氨基嘌呤1.0mg吲哚丁酸1.0mg0.2～0.6mg生物素 10mg香蕉鮮汁30g蔗糖30gWhite培養(yǎng)基基本組分 4696.430mg蒸餾水 加至1000ml該實(shí)施例中生根形成試管苗培養(yǎng)過程中的生根培養(yǎng)基為下述重量配比的原料制成吲哚丁酸 0.2mg
奈乙酸 0.2mg水解酪蛋白 600mg蔗糖 15g1/4MS培養(yǎng)基基本組分 2451.430mg蒸餾水 加至1000ml其他過程與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例四將外植體制備過程中所制備的外植體直接接種在下述重量配比的原料制成的芽生長繁殖培養(yǎng)基中玉米素 0.3mg奈乙酸 0.5mg生物素 5mg赤霉素 0.5mg香蕉鮮汁 10g蔗糖 45gMS培養(yǎng)基基本組分 4696.430mg蒸餾水 加至1000ml該實(shí)施例中生根形成試管苗培養(yǎng)過程中的生根培養(yǎng)基為下述重量配比的原料制成奈乙酸1.0mg水解酪蛋白500mg蔗糖 20g1/2MS培養(yǎng)基基本組分 2451.430mg蒸餾水加至1000ml外植體制備、芽生長繁殖培養(yǎng)、生根形成試管苗、馴化移栽過程與實(shí)施例相同。
實(shí)施例5將芽繁殖培養(yǎng)過程獲得的試管苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基后，直接進(jìn)入試管苗馴化移栽過程，試管苗在馴化、練苗的過程中生根，然后移栽于蛭石或珍珠巖、河沙、腐殖質(zhì)土等組成的營養(yǎng)缽中。第一次澆透水，注意保溫、保濕，并置于塑料棚下，溫度為20±2℃，濕度為95～100％。兩周后，逐漸打開塑料棚，在溫室中繼續(xù)生長一個(gè)月后，可定植于大田。外植體制備、不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、芽生長繁殖培養(yǎng)過程與實(shí)施例1相同。
為了證明本發(fā)明的有益效果，發(fā)明人采用了本發(fā)明第一個(gè)實(shí)施例方法以及培養(yǎng)過程中所用的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、芽生長繁殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基，進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室和大田實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)情況如下一、組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)材料香桂枝條。
2.材料提供單位重慶嘉頓實(shí)業(yè)股份有限公司。
3.實(shí)驗(yàn)方法將香桂枝條剪成小段，保證每段上有一個(gè)芽，按本發(fā)明外植體制備過程制備外植體，把所制備的外植體插植于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，共接種60瓶，每瓶5個(gè)外植體，實(shí)驗(yàn)方法以及所用的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基與實(shí)施例1相同，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1表1 不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)結(jié)果表
芽生長繁殖培養(yǎng)將不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的939個(gè)誘導(dǎo)芽轉(zhuǎn)接于芽生長繁殖培養(yǎng)基中，實(shí)驗(yàn)方法以及所用的芽生長繁殖培養(yǎng)基與實(shí)施例1相同，30天后統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。
表2 芽生長繁殖培養(yǎng)結(jié)果表
生根形成試管苗將芽生長繁殖培養(yǎng)所得的300株苗轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基中，共接種50瓶，每瓶接種6個(gè)苗，實(shí)驗(yàn)方法以及所用的生根培養(yǎng)基與實(shí)施例1相同，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。
表3 誘導(dǎo)生根結(jié)果表
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)論①.取香桂的莖尖及側(cè)芽作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)誘導(dǎo)出芽率達(dá)87％，每個(gè)外植體平均出芽個(gè)數(shù)達(dá)3.6個(gè)。
②.在生長繁殖培養(yǎng)基上香桂試管苗有效繁殖指數(shù)可達(dá)4.3以上。
③.在本發(fā)明提供的生根增減基中，香桂試管苗生根率達(dá)94％以上。
二、試管苗馴化移栽實(shí)驗(yàn)當(dāng)試管苗生長至根系發(fā)育良好，具5～8片葉片時(shí)，將其移入溫室中馴化2周。移栽前，打開瓶蓋2～3天，加少量水使培養(yǎng)基軟化，取出試管苗，將其根系上的培養(yǎng)基洗干凈，移栽于蛭石或珍珠巖∶河沙∶腐殖質(zhì)土＝1∶1∶1組成的營養(yǎng)基質(zhì)中。第一次澆透水，置于塑料棚下，保持溫度為20±2℃，濕度為95～100％。兩周后，逐漸打開塑料棚，使?jié)穸扔?5～100％逐漸降低至與溫室中相同，在溫室中繼續(xù)生長一個(gè)月后，可定植于大田。在所移栽的200株試管苗中，成活株數(shù)186株，成活率93％。
權(quán)利要求
1.一種香桂組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于按如下步聚進(jìn)行(1)外植體制備選擇生長健壯，黃樟油素含量高的優(yōu)良香桂植株，取其0.5～2.0cm長莖尖或側(cè)芽切段，或取其分生組織切塊0.2～3mm，用75％酒精浸泡10～30秒，無菌水沖洗1次，置入0.1％HgCl2溶液中滅菌3～15分鐘，在超凈工作臺(tái)上用無菌水沖洗3～5次，每次5分鐘，濾紙吸干后，作為外植體進(jìn)行培養(yǎng)；(2)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)將外植體接種在下述重量配比的原料制成的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織及不定芽產(chǎn)生細(xì)胞分裂素0.5～10mg生長素0.05～1.0mg維生素C(或者聚乙烯吡咯烷酮)0.5～10mg生物素1～10mg香蕉鮮汁 2～30g蔗糖 30～60gMS(或1/2MS或1/4MS或LS或White或LS)培養(yǎng)基基本組分2000～5000mg蒸餾水加至1000ml在17～26℃、每日照光8～14小時(shí)、光照強(qiáng)度1000～4000lx的條件下培養(yǎng)1～2個(gè)月后，將生成的不定芽移入芽生長繁殖培養(yǎng)基中；(3)芽生長繁殖培養(yǎng)將上述(2)步所獲得的不定芽切下接種在下述重量配比的原料制成的芽生長繁殖培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素0.05～1.0mg生長素0.01～1.0mg生物素1～10mg赤霉素0～3.0mg香蕉鮮汁 2～30g蔗糖 30～60gMS(或1/2MS或1/4MS或LS或White或LS)培養(yǎng)基基本組分2000～5000mg蒸餾水 加至1000ml在17～26℃、每日照光8～14小時(shí)、光照強(qiáng)度1000～4000lx的條件下培養(yǎng)20～40天后，小芽可迅速長大，長大后將其切成帶芽切段，再接種在芽生長繁殖培養(yǎng)基中擴(kuò)大繁殖，達(dá)到一定數(shù)量后再將其轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中；(4)生根形成試管苗將從基部切下的無根試管苗插入下述重量配比的原料制成的生根培養(yǎng)基中生長素0.01～5.0mg水解酪蛋白200～1000mg蔗糖 15～50g1/2MS(或1/4)培養(yǎng)基基本組分 2000～3000mg蒸餾水加至1000ml在17～26℃、每日照光8～14小時(shí)、光照強(qiáng)度5000～10000lx的條件下培養(yǎng)20～45天后，試管苗生根成苗；(5)試管苗馴化移栽將根系發(fā)育良好的試管苗移入溫室，馴化1～2周后，再打開瓶蓋加少量水，練苗2～3天；或者將試管苗直接進(jìn)入試管苗馴化移栽過程，試管苗在馴化、練苗的過程中生根；把經(jīng)練苗后的試管苗移栽在溫室中蛭石或珍珠巖、河沙、腐殖質(zhì)土等組成的營養(yǎng)缽中，以塑料棚覆蓋，2周后再逐漸打開塑料棚，在溫室土壤中生長一個(gè)月后，定植于大田。
2.按照權(quán)利要求1所述的香桂組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于A.所說的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中各原料的重量配比是細(xì)胞分裂素 1.0～5.0mg生長素 0.2～0.6mg維生素C 3～8mg生物素 3～8mg香蕉鮮汁5～15g蔗糖 30～50gMS(或1/2MS或1/4MS或LS或White)培養(yǎng)基基本組分2400～4700mg蒸餾水 加至1000mlB.所說的芽生長繁殖培養(yǎng)基中各原料的重量配比是細(xì)胞分裂素 0.1～0.8mg生長素 0.05～0.5mg生物素 3～8mg香蕉鮮汁 5～20g蔗糖 30～45gMS(或1/2MS或1/4MS或LS或White)培養(yǎng)基基本組分2400～4700mg蒸餾水 加至1000mlC.所說的生根培養(yǎng)基中各原料的重量配比是生長素 0.1～3.0mg水解酪蛋白 400～800mg蔗糖 20～30g1/2MS(或1/4MS)培養(yǎng)基基本組分 2000～2500mg蒸餾水 加至1000ml
3.按照權(quán)利要求1所述的香桂組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于A.所說的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中各原料的重量配比是細(xì)胞分裂素 5.5mg生長素 0.2mg維生素C 5mg生物素 4mg香蕉鮮汁10g蔗糖45gMS培養(yǎng)基基本組分4696.430mg蒸餾水 加至1000mlB.所說的芽生長繁殖培養(yǎng)基中各原料的重量配比是細(xì)胞分裂素0.3mg生長素0.2mg生物素4mg香蕉鮮汁 10g蔗糖 45gMS培養(yǎng)基基本組分 4696.430mg蒸餾水加至1000mlC.所說的生根培養(yǎng)基中各原料的重量配比是生長素0.5mg水解酪蛋白500mg蔗糖 25g1/2MS培養(yǎng)基基本組分 2451.430mg蒸餾水加至1000ml
4.按照權(quán)利要求1或2或3所述的香桂組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于細(xì)胞分裂素是6-芐氨基嘌呤或激動(dòng)素或玉米素或玉米素核苷。
5.按照權(quán)利要求1或2或3所述的香桂組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于生長素是吲哚丁酸或吲哚乙酸或奈乙酸。
全文摘要
一種香桂組織培養(yǎng)快速繁殖方法,采用香桂的莖尖、側(cè)芽及分生組織等為外植體,分別在不定芽分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基、芽生長繁殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中培養(yǎng),快速增殖并獲得完整試管苗,將該試管苗移栽在溫室的蛭石、珍珠巖、河沙、腐殖質(zhì)土中,經(jīng)一個(gè)月后便可植入大田。采用本發(fā)明方法可快速大量繁殖黃樟油素含量高、材質(zhì)優(yōu)良的香桂樹苗,實(shí)現(xiàn)香桂的工廠化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1281637SQ0011316
公開日2001年1月31日 申請(qǐng)日期2000年9月4日 優(yōu)先權(quán)日2000年9月4日
發(fā)明者張存旭, 胡仕林, 趙其中, 唐躍忠 申請(qǐng)人:重慶喜頓實(shí)業(yè)股份有限公司